Регенерация клеточной стенки

Внедряются новые методы селекции продуцентов, их поддержания в активном состоянии и хранения. Например, для получения активных продуцентов у дрожжей и плесневых грибов применяют метод слияния протопластов, когда после удаления клеточной стенки и воздействия полиэтиленгликоля клеточная мембрана частично растворяется и может произойти слияние протопластов двух штаммов и последующая рекомбинация генетического материала. После регенерации клеточной стенки микроорганизм будет иметь другие свойства. Такие микроорганизмы менее стабильны, чем дикие , поэтому необходимо применять соответствующие методы сохранения их активности. Из относительно новых можно назвать лиофилизацию и хранение под жидким азотом. [c.311]

В жидкой среде под действием пектиназ каллус распадается на изолированные клетки. Взятые отсюда отдельные клетки на плотной среде после ряда делений вновь образуют каллус, из которого в ряде случаев (клетки табака, моркови, петунии, томата, картоЛеля) удается получить целое растение. Целое растение можно получить даже из протопластов, т. е. из клеток, не имеющих клеточных стенок. Протопласты получают из многих видов растений. Лучщим их источником служат клетки молодых листьев, которые сначала обрабатывают пектиназами для удаления межклеточных связок, а затем целлюлазами для удаления самой клеточной стенки. После этого ихпомещают на плотные среды, где через 5— 10 дней происходит регенерация клеточной стенки и начинается деление клеток. Дальнейшее развитие процесса идет стандартным [c.139]

Слияние двух типов протопластов происходит при их смешивании в присутствии полиэтиленгликоля. Смесь наносят на стекло и через 15 мин отбирают продукты слияния. Затем их культивируют на питательной среде, в результате чего происходит регенерация клеточной стенки и образуется гибридная клетка, а затем соматический гибрид. [c.497]

При инкубации протопластов на твердой среде В или на модифицированной твердой среде происходит регенерация клеточных стенок и ограниченное деление клеток, в результате чего образуются микрокаллусы. После переноса в среду С они растут далее до стадии, когда становится возможным перенос в среду D, где индуцируется образование (морфогенез) побегов. На заключительной стадии каллусы с побегами длиной около 1 мм переносят на среду Е для завершения образования побегов и формирования корней. Укорененные растения пересаживают в небольшие горшочки с вермикулитом, где они и растут далее. [c.385]

В ядре (хромосоме) протопластов содержится вся информация, необходимая для восстановления (регенерации) клеточной стенки и для возвращения их (реверсии) к клеточной форме с характерной морфологией. Клеточная стенка у пенициллов восстанавливается в любых средах, даже в голодных — за счет [c.125]

Регенерация клеточной стенки [c.497]

Клетки считаются компетентными для трансформации, когда в них начинается репликация ДНК. Синтез ДНК во многих системах протопластов начинается одновременно с регенерацией клеточной стенки во время первого деления, но такие клетки, как правило, слишком слабые, чтобы пережить совместное культивирование с агробактериями. Во многих случаях целесообразно инокулировать культуры агробактериями, когда большинство клеток в популяции вступает во второй период синтеза ДНК перед вторым делением. В случае мезофильных протопластов табака, выделенных из тепличных растений, эта стадия наступает через 6—8 дней культивирования. [c.153]

Регенерация клеток, клеточных культур и растений из протопластов. Образование клеточной стенки у протопластов в культуре происходит сразу после удаления раствора фермента. Вновь синтезируемую клеточную стенку можно наблюдать в флуоресцентный микроскоп, используя как реагент калкофлер белый (1%-ный раствор). Регенерация клеточных стенок — явление достаточно распространенное. Гораздо труднее добиться деления образующихся клеток и еще труднее получить целое растение. Однако для ряда видов имеются устойчивые пинии клеток и целые растения (см. Ю. Ю. Глеба, К. М. Сытник, М984). Возможность регенерации растений из протопластов мо ет свидетельствовать о тотипотентности протопластов, как это было показано для клеток растений (F. Steward, 1970). I [c.38]

Выбор того или иного осмотического стабилизатора и его концентрации определяется природой организма. Иногда даже для разных штаммов одного вида оптимальная концентрация и вид осмотического стабилизатора могут отличаться. Очень важным фактором, влияющим на реверсию протопластов, является плотность окружающей среды. В генетических экспериментах жидкие среды для регенерации практически не применяются, поскольку в этих условиях невозможен клональный анализ образующихся рекомбинантов. Кроме того, для эффективной регенерации клеточной стенки, очевидно, необходим контакт цитоплазматической мембраны с каким-либо поддерживающим каркасом. Показано, что реверсия протопластов бацилл и актиномицетов происходит гораздо лучше на средах, содержащих 2% агара, чем на средах с 0,7—0,8 агара. Значительно повышает частоту регенерации применение двухслойного метода. Протопласты ресуспендируют в мягком (0,4—0,7%) агаре или легкоплавкой агарозе и помещают на твердую агаризованную среду (1,5—2% агара). Показано также, что эффективность и скорость реверсии протопластов существенно повышается, если их высевать не на свежеприготовленные, а на частично (на 10— 20%) дегидратированные (подсушенные) чашки. [c.126]

Рве. 19 . Микрофотографии протопластов табаи, полученные с помощью сканирующего электронного микроскопа. Только что выделенный сферический протопласт (Л) сходен с протопластами, изображенными на рис. 16-68. Клеточная стейка полностью удалена, и видна оголенная плазматическая мембрана (С-она же при большем увеличении). Через некоторое время начинается регенерация клеточной стенки (В) на показанной здесь ранней стадии этого процесса на наружной поверхности плазматической мембраны хорошо видна новообразованная сеть целлюлозных микрофибрилл, (С любезного разрешения J, Burgess,) [c.207]

Добавление в среду бычьего сывороточного альбумина, лошадиной сыворотки, 0,5% желатина положительно влияет на регенерацию клеточной стенки. Кроме того, эффективность этого процесса зависит от присутствия аминокислот, витаминов и микроэлементов. Вместе с тем. на очень богатых средах уровень реверсии снижается, вероятно, в связи с несбалансированностью процессов роста протопластов и синтеза компонентов клеточной стенки. [c.126]

Поскольку дрожжевые протопласты не способны к регенерации клеточной стенки в жидкой среде, их смешивают с расплавленной ага- [c.292]

Культура изолированных протопластов — выращивание протопластов на/в среде in vitro в присутствии стабилизатора. При регенерации клеточных стенок культура протопластов трансформируется в клеточную культуру. [c.495]

В процессе образования корончатого галла агробактерии способны трансформировать клетки, прилежащие к поврежденной ткани, которые претерпевают клеточные деления в ответ на поранение. Клетки интактного растения, как правило, проявляют максимальный онкогенный ответ на инфекцию А. tumefa iens между 1,5 и 3 днями после поранения. У различных видов эта компетентная фаза совпадает с первыми клеточными делениями в ответ на поранение. Как было показано [50], раневой ответ можно имитировать в культуре тканей, если превратить покоящиеся мезофильные клетки листа или активно делящиеся клетки суспензионной культуры в протопласты и индуцировать регенерацию клеточной стенки и клеточное деление в соответствующей среде. В определенной фазе становления культуры протопластов клетки компетентны для трансформации Л. tumefa iens. Технология совместного культивирования предусматривает инкубацию протопластов в присутствии агробактерий в соответствующей жидкой питательной среде и позволяет получать большое число трансформантов в контролируемых условиях, Варьируя условия культивирования, плотность высева и изменяя процедуру селекции, можно получить трансформированные колонии клонального происхождения. Важно иметь в виду, что корончатые галлы — это смесь нетрансформированных и различных типов независимо трансформированных клеток и, следовательно, фенотип галла представляет собой сумму фенотипов всех клеток, обнаруживаемых в опухоли. Однако клеточная популяция трансформантов, полученных с помощью сов- [c.151]

A, Визуализация регенерации клеточной стенки с помощью тинопала [c.180]

В 1-е сутки культивирования некоторое число протопластов погибает, что может быть связано с гетерогенностью популяции по отношению к действию осмотиков. Оставшиеся уже через несколько часов начинают синтезировать клеточную стенку. Полностью этот процесс завершается при правильно подобранных условиях выделения и культивирования через 1—4 сут. При этом протопласты теряют сферическую (форму, клетки удлиняются. Скорость регенерации клеточной стенки зависит от вида растения и ткани, из которой получены протопласты, а также от степени ее дифференцировки. [c.172]

При получении протопластов и сфероплас-тов большое значение имеет подбор условий, обеспечивающих в последующем эффективную регенерацию клеточных стенок. Процедуры получения протопластов и сферопластов, трансформации их молекулами ДНК, регенерации клеточной стенки и отбора колоний трансформантов многоэтапны, а результат зависит от многих параметров состава растворов, способов обработки и др. Все это приводит к тому, что данные методики отличаются низкой воспроизводимостью, требуют высокой квалификации исполнителя и весьма трудоемки. Поэтому по мере разработки более простых способов данный подход постепенно утратил свое значение. На смену пришли методы обработки клеток растворами солей (см. 2.1). [c.33]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология