Клональный анализ

Мы уже упоминали, что транспозиция Ох-элемента обычно сопровождается его исчезновением из донорного сайта, что отличает этот эффект от транспозиции у бактерий. Результаты клонального анализа свидетельствуют [c.484]

Выбор того или иного осмотического стабилизатора и его концентрации определяется природой организма. Иногда даже для разных штаммов одного вида оптимальная концентрация и вид осмотического стабилизатора могут отличаться. Очень важным фактором, влияющим на реверсию протопластов, является плотность окружающей среды. В генетических экспериментах жидкие среды для регенерации практически не применяются, поскольку в этих условиях невозможен клональный анализ образующихся рекомбинантов. Кроме того, для эффективной регенерации клеточной стенки, очевидно, необходим контакт цитоплазматической мембраны с каким-либо поддерживающим каркасом. Показано, что реверсия протопластов бацилл и актиномицетов происходит гораздо лучше на средах, содержащих 2% агара, чем на средах с 0,7—0,8 агара. Значительно повышает частоту регенерации применение двухслойного метода. Протопласты ресуспендируют в мягком (0,4—0,7%) агаре или легкоплавкой агарозе и помещают на твердую агаризованную среду (1,5—2% агара). Показано также, что эффективность и скорость реверсии протопластов существенно повышается, если их высевать не на свежеприготовленные, а на частично (на 10— 20%) дегидратированные (подсушенные) чашки. [c.126]

Определение параметров ростового цикла весьма существенно для пассирования культуры и для проведения экспериментов на культурах. Поведение клеток и их биохимические свойства заметно различаются на разных фазах роста культуры, так что важно контролировать стадию ростового цикла, на которой в культуру добавляются различные препараты или реагенты или производится сбор клеток для пересева. Форма кривой роста позволяет также получить информацию о репродуктивном потенциале культуры (рис. 1.1). Не вызывает сомнения, что клональный анализ довольно прост и приводит к получению более однозначных и правильных выводов. [c.23]

Функционирование иммунной системы обеспечивается клетками многих типов. Совершенно очевидно, что понимание процессов иммунного ответа требует знания того, какие клетки принимают в них участие и взаимодействуют друг с другом. Один из подходов к изучению иммунной системы, которому отдавалось предпочтение в последние несколько лет, состоял в применении клонального анализа, например методов лимитирующих разведений с использованием клональных клеточных линий. Другой подход, который ни в коей мере не подменяет клональный анализ, а скорее дополняет его, заключается в определении гетерогенности популяций по экспрессируемым маркерам клеточной поверхности. В рамках этого второго подхода весьма популярными стали методы проточной цитометрии и сортировки клеток. [c.326]

Результаты анализа таких независимых (отдельных) культур сравнивают с результатами анализа ряда образцов, взятых из одной и той же культуры (пробирки), выросшей после засева клеток в той же концентрации на 1 мл жидкой среды, что и в первом случае, и достигшей той же численности популяции. При наличии устойчивых бактерий, возникших спонтанно до обработки фагом, результаты анализа независимых культур будут отличаться от результатов анализа образцов из одной и той же культуры (пробирки). Причина здесь кроется все в том же клональном распределении мутантов, которое было рассмотрено в связи с тестом. [c.111]

Рис. 37.10. С помощью клонального анализа можн идентифицировать группу клеток, ведущих происхождение о- одной родительской клетки, у которой в результате транспсзиционного события изменился фенотип.

Рис. 37.13.08-элемент обеспечивает сайт, в котором инициируется ЦИК1 разрыв—слияние—мост (при активации Ас-элементом). Клональный анализ дает возможность анализировать последствия )того цикла. [c.484]

Однако только с середины прошлого века, после классических работ Луи Пастера, микробиология, в том числе и промышленная микробиология, выделилась в самостоятельную науку. Сформировались понятия о чистой культуре микроорганизмов, т. е. популяции однородных особей, начали развиваться работы по изучению биохимии и физиологии микроорганизмов. С начала 40-х годов нашего века микроорганизмы становятся объектом генетических исследований. Получение биохимических мутантов на нейроспоре (клональный анализ) и доказательство справедливости мутационных закономерностей для бактерий кишечной [c.6]

Методы культивирования в полужидкой среде основаны на ее высокой вязкости, что обеспечивает разъединенность внесенных в культуру клеток и, следовательно, дискретность развивающихся колоний. Растворимые компоненты легко диффундируют в полужидком носителе — матриксе и вследствие этого равномерно распределяются по всему объему культуры. Два главных преимущества клонирования клеток в полужидком агаре состоят в том, что с помощью этого метода легко проанализировать большое число клеток и легко визуализировать образующиеся клоны. Правда, недостаток всех методов клонального анализа — возможность случайного совмещения клонов, — разумеется, присущ и культивированию в полужидкой среде. Вероятные при этом ошибки оценивают в экспериментах по титрованию, которые позволяют установить порядок наблюдаемых событий. Для этого подбирают условия, при которых в ограниченном числе оказываются клетки только одного типа. Данные условия определяют по линейной зависимости между числом вносимых в культуру клеток и числом подсчитываемых событий (т. е. числом колоний). Таким образом были найдены условия как для роста sIg+В-клеток (Kin ade, 1981 а, Ь), так и для роста предшественников В-клеток (Paige, 1983, 1984 Paige et al., 1984). [c.255]

При этом Not h функционирует как рецептор, который взаимодействует с лигандом в экстраклеточном компартмента и трансдуцирует полученную информацию внутрь клетки. В частности, это было продемонстрировано с помощью клонального анализа развивающегося эпидермиса эмбриональной vnR, notum и крыльев взрослой мухи у соматических мозаиков. [c.119]

I. Кратковременные культуры (4—24 ч). Кратковременное поддержание клеток в суспензии для анализа чувствительности к препаратам возможно для клеток из любого источника. Если клетки получены из биопсийного материала опухоли человека, то тест-система имеет ряд теоретических преимуществ способность к росту не является лимитирующим фактором, поскольку рост в этой системе не требуется разрастание клеток стромы и клональный отбор сведены к минимуму, так что результаты могут быть получены быстро, что особенно важно, если испытание проводится с клиническими целями. Метод получил широкое использование в ФРГ при изучении чувствительности к ряду химиотерапевтических препаратов различных типов опухолей [13, 14]. Модифицированный метод с использованием либо клеток, либо фрагментов тканей был применен Силвестрини с сотрудниками [10] также для различных типов опухолей. В обоих вариантах исследовали включение нуклеотидов, меченных тритием, в ДНК или РНК. Ограничения этого метода заключаются главным образом в короткой продолжительности опыта это исключает возможность длительного воздействия лекарственных средств в течение одного или нескольких клеточных циклов. Следовательно, этим методом нельзя исследовать обратимость действия лекарства и остаточную цитотоксичность, что существенно ограничивает круг исследуемых препаратов. Было показано, что при использовании этой тест-системы получаются ложно-отрицательные результаты действия адриамици-на [14], хотя имелись сообщения об успешном применении системы при анализе действия других лекарств с иными механизмами действия [10]. [c.260]

Каждый такой очаг является клеточным клоном, т. е. происходит из одной клетки-предшественника (Р. К. Чайлахян, А. Я Фриденштейн, А. В. Васильев, 1970). На это ука зывают данные, полученные методом хромосомного анализа, проведенного на очагах, возникающ их в монослойных культурах от двух доноров, различающихся по половому хроматину. Кроме того, указанием на клональную природу очагов служит линейная зависимость между количеством очагов и числом эксплантированных клеток, которая проявляется при количестве эксплантированных клеток, не превышающем 10 на флакон емкостью в 100 мл. Была определена величина КОЕ, т. е. того количества эксплантированных клегок, на которое приходится одна колония. Для культур селезенки морской свинки КОЕ составляет 10 Это значит, что среди 10 клеток присутствует один предшественник, который дает начало колонии фибробластов в условиях монослойных культур. [c.86]

Анализ природных изолятов Е. oli путем исследования электрофоретических свойств нескольких белков выявил клональную структуру популяции 1691 штамм был подразделен на три подвида (Whittam et ai, 1983). Это, казалось, свидетельствовало о низком уровне рекомбинационных обменов в природе у этих клеток и об их репродуктивной изоляции. Но нуклеотидный анализ области триптофанового оперона 36 штаммов из той же коллекции, подтвердив наличие клональности, вскрыл, одна- [c.132]

Рассмотренная система культивирования позволяет получать чищенные (в том числе клональные) В-клеточные популяции. Она гсьма перспективна для анализа ряда вопросов клеточной иммуно-огии, в частности ранних этапов В-лимфоцитарной дифференци-овки, развития В-лимфоцитов в отсутствие Т-клеточных влияний, олекулярных процессов, вовлеченных в созревание В-клеток, вирус-ой трансформации, антигенной и митогенной активации лимфоцитов I1, 32, 34], а также вопросов стромально-лимфоцитарных взаимо-гйствий и выявления категорий стромальных клеток, необходимых пя поддержания лимфопоэза. [c.275]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология