Праймер удлинение

В такой системе начинается удлинение праймера, т.е. синтез [c.281]

Известно, что для эффективного осуществления ПЦР 3-концевой нуклеотид праймера должен быть комплементарен соответствующему нуклеотиду матричной ДНК. В противном случае эффективность удлинения праймера во время ПЦР резко снижается и при определенных сочетаниях ошибочно спаренных нуклеотидов не происходит. Именно эта особенность ПЦР и ле- [c.214]

Гетерогенные продукты удлинения праймера [c.45]

Затем температуру снижают до 45 — 65 °С (в зависимости от состава олигонуклеотидов) и выдерживают ее 1,0— 1,5 мин. При этом к образовавшимся в результате денатурации одноцепочечным ДНК присоединяются праймеры — один к 3 -концу выбранного для удвоения участка, второй — к 5 -концу. Этот этап называют отжигом . На третьем этапе поддерживается температура 72 °С. Это оптимальная температура для работы применяемой в ПЦР полимеразы. Данный фермент, используя дезоксинуклеозидтрифосфа-ты, содержащиеся в смеси, достраивает комплементарные цепи ДНК, начиная с 3 -концов праймеров навстречу друг другу. Этот этап называется элонгация (удлинение). [c.94]

Для постановки ПЦР необходимо знать последовательность как минимум 17 пн с обеих сторон исследуемого фрагмента ДНК Обычно синтезируют два дезоксинуклеотида длиной 20-30 оснований, представляющие собой концевые последовательности интересующего нас фрагмента ДНК Используя комплементарные к этим участкам олигомеры — праймеры, запускают амплификацию Избыточные количества праймеров смешивают с геномной ДНК, а затем последовательно осуществляют реакции денатурации, отжига (реассоциации) и наращивания цепи (удлинение праймера) Тепловая денатурация сопровождается расплетением двойной спирали ДНК При снижении температуры имеет место отжиг олигонуклеотидов, то есть происходит гибридизация олигонуклеотидных праймеров со своими комплементарными последовательностями Наращивание цепи праймеров катализируется ДНК-полимеразой [c.204]

Трехслойную систему покрытия специально для арктических трубопроводов использует фирма Ривестуби (Италия). У этого покрытия нижний слой — праймер РИВ П-80 представляет собой двухкомпонентную систему из жидкой эпоксидной смолы с полиами-новым отвердителем. В качестве адгезива используется модифицированный полиэтилен, а для основного слоя покрытия применяется полиэтилен низкой плотности с сополимером на основе винилацетата (до 3 %), стабилизированный сажей в количестве 2,5 % и антиоксидантом. Плотность применяемого полиэтилена 0,935 г/см , показатель текучести расплава 0,23 г/10 мин, температура плавления 112°С, предел прочности при разрыве 17 МПа, относительное удлинение при разрыве 700 %. [c.125]

Марка материала Толщина, мм Сопротив- ление разрыву, Н/см Удлинение при ра рыве, % Клеевая фунтовка (праймер) Расход фунтовки при температуре 20 С, кг/м Температурный интервал эксплуатации покрытий (праймер 1-слои обертки) [c.90]

Так как в основе секвенирования по Сэнгеру лежит процесс репликации ДНК, то основным ферментом является ДНК-полимераза (используют ДНК-полимеразу I). В присутствии одноцепочечной ДНК-матрицы, короткого полинуклеотидного праймера и нуклеотидов по принципу комплементарности будет происходить синтез второй цепи ДНК. При этом удлинение цепи будет проходить до тех пор, пока вместо дезокси-нуклеотида не присоединится дидезоксинуклеотид. Присоединение последнего приведет к остановке синтеза. [c.31]

Эксперименты с УФ-поперечным связыванием использовали для идентификации того вирусного белка (белков) Р, который катализирует инициацию транскрипции и того белка, который, возможно, катализирует удлинение цепи (см. рис. 11). Для идентификации белка Р, который катализирует инициацию транскрипции посредством включения Г-остатка на конце фрагментов праймера, вирусные коры инкубировали с немеченым РНК-праймером (т. е. глобип-мРНК) и (а- Р)-ГТФ как единственным рибонуклеозид- [c.75]

Температура достройки праймера 72°С очень близка к температуре, при которой ДНК-полимераза Taq проявляет максимальную активность. Как уже отмечено, продолжительность инкубации при 72 °С зависит от длины амплифицируемого участка ДНК- Считается, что Га -полимераза синтезирует последовательность длиной 1000 нуклеотидов за 1 мин, однако можно опробовать и более короткое время инкубации. Этап удлинения затравки можно совсем исключить, если исследуемая последовательность имеет длину, не превышающую 150 нуклеотидов. При нагреве между этапами отжига и денатурации образцы будут находиться в диапазоне температур 70—75°С несколько секунд, что достаточно для полной достройки отожженной затравки. [c.182]

Кроме биологических праймеров, в литературе встречается упоминание о праймерах, как бы синтезируемых самой ДНК-полимеразой в процессе удлинения исходного праймера [Speek et al., 1986]. Данные праймеры представляли собой некий гибрид синтетического универсального праймера (о котором речь пойдет ниже) и биологического. Так, в результате построения второй цепи ДНК Кленовским фрагментом ДНК-полимеразы I с использованием в качестве затравки универсального праймера образовывались двуцепочечные участки ДНК, протяженность которых зависела от времени инкубации. После этого предлагалось, зная рестриктазную карту клонированного фрагмента ДНК, расщеплять вновь построенный двуцепочечный участок соответствующими рестрикционными эндонуклеазами и уже далее проводить непосредственно само секвенирование в виде терминирующих реакций. Следует отметить, что о подобном подходе говорилось и ранее [Godson, 1980], но в силу своей трудоемкости и плохой воспроизводимости он не нашел широкого распространения. [c.60]

Рис. 2.16. Схема использования октамерных олигонуклеотидов в качестве уникальных праймеров для секвенирования ДНК праймерной прогулкой при помощи дифференциального удлинения данного праймера неполным набором дезоксинуклеотидтрифосфатов

Справочник химика 21

Химия и химическая технология