Щелочная как ферментная метка

Наибольшее распространение получили методы введения ферментной метки, основанные на образовании ковалентной связи между молекулами антитела и фермента. Наибольшее практическое применение нашел метод получения иммунопероксидазных конъюгатов окислением углеводного компонента фермента перйодатом натрия. В случае использования щелочной фосфатазы в качестве фермента-маркера применяют глутаровый альдегид, взаимодействующий с е-аминогруп-пами белковых молекул. [c.317]

Ферментные метки. В электрох1шическом иммуноанализе в качестве метки хорошо зарекомендовала себя щелочная фосфатаза. На рис. 15.4 представлено уравнеще реакции гидролиза нилфосфата, который чаще всего применяют в качестве субстрата этого фермента. Образующийся фенол можно окислить в карбонатном буфере при + 750 мВ относительно хлорсеребряного электрода, в то время как субстрат фенилфосфат при положительном потенциале электрохимически неактивен. Образование способного окисляться продукта устраняет необходимость удаления кислорода из пробы перед анализом, как это принято в восстановительных электрохимических экспериментах. Конечно, и ранее щелочная фосфатаза Использовалась в иммуноанализе, но только в сочетании со спектрофотометрическим определением продуктов. [c.212]

Разработаны также методики конкурентного иммуноферментного анализа в варианте ЖХ-ЭХ для определения кислого а -гли-копротеина [23 ] и иммуноглобулина G [24 ]. В последней работе достигнут предел обнаружения около 5 нг/мл. Значительно большую чувствительность Обеспечивает двухсайтовый анализ. Так, при определении IgG кролика с щелочной фосфатазой в качестве ферментной метки достигнут предел обнаружения около 10 пг/мл [24]. [c.214]

В качестве ферментной метки мы использовали щелочную фосфатазу из кишечника теленка. Этот фермент был выбран благодаря его относительно высокой каталитической активности, а также значительной стабильности как субстрата п-ни-трофенилфосфата), так и продукта его расщепления (л-нитро-фенола). К тому же известно, что эти вещества не канцерогенны в отличие от ряда субстратов для широко используемой в качестве ферментной метки пероксидазы. В частности в Национальном институте рака на трех моделях было показано, что популярный субстрат пероксидазы — о-фенилендиамингидрохло-рид — вызывает рак у лабораторных животных (Weisburger et al., 1978). Этот субстрат к тому же весьма нестабилен, и поэтому его следует использовать непосредственно после растворения, желательно в темноте. [c.196]

Плазмидйые зонды для выявления контаминации клеточных культур микоплазмами сконструированы уже несколькими исследовательскими группами [67—71]. Применение гибридизационного метода в описанной нами модификации ограничено теми лабораториями, где возможна работа с радиоактивными изотопами. Развитие этого метода и его более широкое распространение связывают с заменой радиоактивной метки на ферментную, т. е. с использованием щелочной фосфатазы или пероксидазы хрена, которые могут быть пришиты к плазмидным зондам с помощью биотин-авидиновых комплексов. [c.120]

В отличие от японских исследователей Реннеберг с соавторами [13] сосредоточились не на выделении, а на поглощении кислорода, что позволило использовать более чем простой ферментный иммуноанализ фактора VIH по связанному с ним антигену. Авторы приспособили глюкозооксидазный электрод [14], чтобы контролировать содержание глюкозы, производимой антителом с меткой щелочной фосфатазы (АР). При этом протекают следующие реакции [c.59]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология