Хромосомные перестройки как маркер

Идентификация индивидуальной хромосомы, в которой находится исследуемый ген,-это только первый этап картирования. Основной задачей являются установление порядка генов и их точная локализация. В некоторых случаях метод анализа родословных позволяет расположить на генетической карте хромосомы три и более маркеров. Использование более эффективных методов генетики соматических клеток может дать более точную информацию. Существенную помощь в таких исследованиях оказывают хромосомные перестройки (см. гл. 21). Далее мы рассмотрим примеры использования делеций, транслокаций или дупликаций для картирования генов. [c.301]

В опытах по трансфекции массу добавленной к реципиентным клеткам ДНК обычно увеличивают за счет избытка ДНК-носителя, препарата какой-то другой ДНК (например, ДНК спермы лосося). Доказано, что трансфицируемые клетки получают ДНК-носитель в виде последовательностей, фланкирующих селектируемые с каждой стороны. Следовательно, трансфекция осуществляется структурой ДНК, состоящей из ряда сцепленных последовательностей всех типов, присутствующих в препарате донора. Поскольку ревертанты по селектируемому маркеру утрачивают весь этот материал, кажется вероятным, что трансфицируемые клетки приобретают только одну такую структуру ДНК. Данная структурная единица может образовываться благодаря конкатемерному сцеплению донорных последовательностей в ходе реакции, которая проходит очень быстро по сравнению с другими событиями, вовлекаемыми в процесс трансфекции. Такая трансфицируемая единица может иметь протяженность около 1-10 п.н. Мы не можем установить с помощью метода гибридизации, сцеплена ли донорная единица с хромосомной ДНК реципиента (интересующие нас концевые фрагменты представлены в слишком незначительных количествах). Вероятно, что первая стадия процесса заключается в образования нестабильных внехромосомных единиц, которые впоследствии стабилизируются в результате интеграции. В некоторых клеточных линиях методом гибридизации in situ было показано, что трансфицированные клетки содержат донорный материал, интегрированный в хромосомы хозяина. Любая определенная клеточная линия имеет только один сайт интеграции однако сайты в каждой линии различны. Вероятно, выбор сайта для интеграции - случайное событие иногда оно связано с большими хромосомными перестройками. [c.500]

Распространение методов картирования на очень большие, сложные геномы растений и позвоночных, включая человека, сталкивается с серьезными проблемами. Это связано с огромными размерами геномов и малочисленностью маркеров, а также трудностями экспериментальною скрещивания (у человека такие скрещивания вообще невозможны). Ранее при построении генетических карт человека ученые могли использовать только редкие данные по большим семьям, члены которых обладали специфическим мутантным фенотипом. Число идентифицированных локусов в геноме человека было очень невелико. Все это затрудняло не только фундаментальный генетический анализ, но и раннюю диагностику наследственных болезней. До недавнего времени пренатальная диагностика была возможна лишь для ограниченного числа болезней - тех, которые обусловливались значительными хромосомными перестройками (например, синдром Дауна, связанный с трисомией по хромосоме 21) или сопровождались специфическими фенотипическими проявлениями, которые легко обнаруживались при развитии плода (например, болезнь Тея-Сакса, причиной которой служит отсутствие гексозаминидазы А-гидролазы лизосом). Ситуация стала меняться с появлением [c.353]

Получение кариотипа. Для повышения объективности карио-типического анализа клеток перевиваемых линий необходимо использовать микрофотографии. Съемку производят на пленку Мик-рат-300 , делая по 4—5 фотоотпечатков каждой метафазной пластинки. Изображение не должно быть излишне контрастным, так как прй этом снижается качество О-дисков и затрудняется идентификация хромосом. Кариотипы клеток получают путем вырезания хромосом из фотоотпечатков метафазных пластинок и наклеивания их согласно принятой для каждого вида системе расположения хромосом в нормальном кариотипе. В последнем, нижнем, ряду наклеивают маркерные хромосомы и редкие структурные перестройки (рис. 8, см. вклейку). Как правило, для определения типичного или модального кариотипа вполне достаточно проанализировать кариотипы 15 метафазных пластинок, окрашенных на О-диски. Эти метафазные пластинки должны удовлетворять следующим требованиям 1) число хромосом в них не должно быть менее тех хромосомных чисел, которые установлены при анализе 100 рутинно окрашенных метафазных пластинок 2) метафазные пластинки не должны содержать наложений, затрудняюш,их интерпретацию структурно перестроенных хромосом 3) часть метафазных пластинок (не менее трех) должна иметь хромосомы прометафазного типа, пригодные для более точной локализации районов разрывов хромосом при образовании маркеров. [c.88]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология