Посадка лигандов на активированные матрицы

Хотя синтез аффинного сорбента с индивидуальной специфичностью при наличии одной из продажных активированных матриц и не представляет особого труда, он все же требует наличия достаточного количества очищенного аффинного лиганда, не инактивирующегося в условиях его посадки на матрицу. Заметим, что после посадки лиганда на матрицу прочность связывания с ним биоспецифического партнера может сильно уменьшиться по сравнению с тем уровнем, который наблюдался при образовании их свободного комплекса в растворе (иной раз константа диссоциации комплекса на сорбенте может оказаться на три порядка выше, чем в растворе). Это обстоятельство играет важную роль при осуществлении конкурентной аффинной элюции вещества с сорбента с использованием свободного лиганда (см. ниже). Тем не менее прочность аффинного связывания в большинстве случаев оказывается достаточной для удержания нужного вещества на матрице в условиях отмывки с нее всех сопутствующих ему примесей. Нередко прочность комплекса вещества с аффинным лигандом увеличивается, если последний имеет некоторую свободу ориентирования в пространстве, т. е. закреплен на матрице с помощью спейсера. [c.362]

ПОСАДКА ЛИГАНДОВ НА АКТИВИРОВАННЫЕ МАТРИЦЫ, [c.375]

Заканчивая рассмотрение аффинной хроматографии белков, необходимо отметить, что вне поля нашего зрения осталась родственная область приготовления и использования иммобилизованных ферментов. Многое из того, что было сказано о способах посадки лигандов на активированные матрицы, имеет к этой области прямое отношение. Однако к кругу физико-химических методов исследования белков и нуклеиновых кислот использование иммобилизованных ферментов имеет лишь косвенное отношение, так что за недостатком места мы на нем остановиться не сможем. [c.435]

Посадка лиганда на матрицу, активированную имидазолил-карбонатом [c.346]

Выше, при рассмотрении методов активации матриц, были вкратце описаны способы посадки лигандов на матрицы, активированные трихлортриазином, бензохиноном и трезилхлоридом. Здесь мы приведем несколько более подробные и иллюстрированные типичными примерами] описания способов посадки лигандов на широко [c.375]

Реакция успешно протекает в слабощелочной среде — при pH поэтому можно вести активацию бензохиноном агарозного компонента смешанного агарозно-полиакриламидного геля типа Ultrogel АсА . В реакционную смесь можно вместо бензохинона вводить растворимый в этаноле гидрохинон — в слегка щелочной среде он окисляется до бензохинона. Активированные бензохиноном матрицы приобретают интенсивную окраску, по-видимому, в результате побочных реакций. Как и в случае активации триазином, образование в составе сорбента (после посадки лиганда) ароматического кольца приводит к заметному неспецифическому взаимодействию л—я-типа с ароматическими группами контактирующих с сорбентом веществ. [c.354]

Было упомянуто, что промывать сорбент буфером лиганда следует быстро. Дело в том, что при pH 8,3 идет постепенный гидролиз активных групп сорбента и за 4 ч его связывающая способность снижается в 2—3 раза. Выбор pH буфера для посадки лиганда зависит от того, каким образом ее предполагается осуществить. Напомним, что нуклеофпльную атаку на активированные группы матрицы (в данном случае на имидокарбонатную группу) могут вести лишь непротонированные (незаряженные) аминогруппы. Слабощелочной буфер с pH 8,3 может обеспечить достаточное количество незаряженных концевых аминогрупп белка (рЛГ it 8), по которым и будет идти его посадка на матрицу, но для посадки по е-аминогруппе лизина [c.376]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология