Измерение константы субстрата методами стационарной кинетики

Измерение константы субстрата методами стационарной кинетики [c.48]

Поскольку к+2 можно во многих случаях оценить независимо методами стационарной кинетики, определение Ктах (условия насыщения субстратами А и X) позволяет прямо вычислить к-1 константы k+i и й 2 можно найти путем измерения К при низких концентрациях А и X соответственно. Даже если измерение при насыщающих концентрациях А и X оказывается невозможным, исследование зависимости К от концентрации не насыщающего реагента позволяет все же определить значения к+и к-1 и к-2, если к+2 найдена независимым методом. [c.175]

Что касается теоретических методов оценки констант скоростей по данным стационарной кинетики в сочетании с данными, полученными методами кинетики переходной стадии, то недостатка в таких методах у нас нет. Остается рассмотреть экспериментальные возможности непосредственных кинетических измерений в течение переходной стадии. Интервал времени, в течение которого должны проводиться такие измерения, весьма невелик и измеряется малыми долями секунды Это вынуждает пользоваться весьма сложным оборудованием, позволяющим а) смешивать растворы субстратов и фермента настолько быстро, чтобы фермент не успел денатурировать б) быстро и количественно улавливать весьма малые изменения [c.182]

К сожалению, невозможно сказать, даст ли график линейной зависимости скоростей реакций в стационарном состоянии (либо по Лайнуиверу—Бэрку, либо по Идаю) значение К или /Сщ. Интересно вычислить Км при различных температурах и таким образом установить соотношение между стабильностью комплекса, его реакционной способностью, выраженными соответственно через Км и кз, с одной стороны, и его химическим составом и строением — с другой. Как ни парадоксально, эти сведения можно получить для некоторых бимолекулярных реакций на основании метода стационарных состояний (в действительности определить ki и kz, а также кз), несмотря на то что кинетика этих реакций сложнее, чем рассмотренная здесь это оказывается возможным потому, что второй субстрат допускает изменение еш,е одного фактора, влияющего на скорость, и, следовательно, дает возможность вывести иное уравнение, связывающее константы другим способом. В некоторых реакциях каталазы и пероксидазы удавалось проследить [20] за ростом концентрации комплекса фермент — субстрат на ранних стадиях реакции при использовании методики быстрого смешивания и при спектрофотометрическом измерении концентрации комплекса. Таким способом могут быть определены ki и kz- [c.120]

Таким образом, метод Мэйна для определения константы субстрата по данным стационарной кинетики нельзя считать универсальным, однако принцип Слейтера, положенный в его основу,— избирательное влияние на одну из стадий процесса — является цдодотворным. Видимо, подбирая для каждой конкретной ферментативной реакции свой специальный способ воздействия на одну из стадий процесса, можно добиться положительного результата в измерении Кв, что чрезвычайно важно в исследовании кинетики и механизма действия ферментов. [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология