Гидратация сухих белков

В химии белка мы часто встречаемся с необходимостью определить либо степень гидратации сухих белков в атмосфере водяного пара, либо степень гидратации белков, растворенных в больших количествах воды. В обоих случаях общий объем системы белок—вода будет меньше суммы объемов сухого белка и добавленной воды. Так как небольшие изменения объема системы измерить трудно, то обычно определяют изменения плотности, которые могут быть очень точно измерены при помощи пикнометра. Если плотность системы белок—вода обозначить через D, а удельный объем, т. е. объем, занимаемый 1 г системы, через Ууд., то Куд. будет равен 1/D. Плотность белковых растворов определяют взвешиванием в пикнометре с точно известным объемом V. Если вес раствора обозначить через Р, а объем пикнометра — [c.102]

Полученный от фирмы Sigma трижды перекристаллизован-ный, подвергнутый диализу и лиофилизованный порошок лизоцима из белка куриных яиц использовали после дополнительного диализа и лиофильной сушки. Гидратацию сухого порошка осуществляли в паровой фазе путем экспозиции образца в условиях постоянной относительной влажности в течение 5 сут. При приготовлении образца лизоцима, содержащего DjO, лизоцим дважды растворяли в D2O и выдерживали при 40 °С каждый раз в течение 24 ч перед лиофилизацией. D2O перед использованием обрабатывали helex-100 оба материала были получены от Bio-Rad Laboratories. Как и при гидратации, D2O вводили в сухой белок из паровой фазы. Содержание воды и оксида дейтерия определяли титрованием по Фишеру. [c.154]

Что же касается важной проблемы изменений объема системы полимер — растворитель при смешении, то из рис. 13.2 видно, что в интервале степеней гидратации от О (сухой белок) до содержания воды, соответствующего началу стеклования, плотность системы вода — эластин при любой температуре остается практически постоянной. Из этого следует, что стеклообразлая система эластин+вода имеет более высокую плотность, чем можно было бы ожидать, исходя из аддитивности объемов. Это ясно видно из рис. 13.3, на котором экспериментально определенные значения удельных объемов (полученные на рис. 13.2 путем подходящей интерполяции при трех избранных температурах) сравниваются с идеальными аддитивными объемами системы. Последние представлены на рисунке линиями, соединяющими значения удельных объемов, соответствующих жидкой воде и стеклообразному эластину. [c.235]

Температурные зависимости / и ДГ. Их изучение дает информацию о характере подвижности мёссбауэровских ядер и свойствах их окружения. Важнейшее преимущество данного метода заключается в возможности определять также и амплитуды движений атомов. В этом состоит его отличие от других резонансных методов, где определяются лишь частотные характеристики движений. На рис. Х.20 приведены кривые температурной зависимости / Т) для препаратов белков, меченных изотопом Ге. Для увлажненных белков вероятность эффекта слабо меняется в области низких температур, однако резко падает при температурах, превышающих —(60-30) °С, без уширения ГР-линии. Уширение мёссбауэровских спектров наблюдается только при температурах выше — 20 °С на конечных участках кривой / (Т), где вероятность эффекта уже мала (см. рис. Х.19). Сухой белок характеризуется слабой температурной зависимостью фактора / и постоянной шириной ГР-линии, что характерно для колебаний ионов Ге в твердой матрице. Зависимость / от относительной влажности образца Р/Ре) носит пороговый характер, что свидетельствует о кооперативном характере конформационной подвижности водно-белкового комплекса при степени гидратации Р/Ре 0,4 (см. 4 гл. IX). [c.293]

Из изложенного видно, что определение плотности белковых растворов не представляет особых затруднений. Трудности возникают, однако, при измерении плотности сухих белков или влажных белковых препаратов. хМногие белки при высушивании дена-турируются, что делает невозможным использование этих препаратов для исследования гидратации. Это затруднение можно было бы преодолеть, определив предварительно плотность влажных кристал.иов или раствора белка, а затем уже высушив белок. Однако при этом остается основная трудность, связанная с определением плотности сухого или влажного белка. Один из методов, применяемых для этой цели, состоит в том, что исследуемый белок помещают в пикнометр, взвешивают его, а затем наполняют пикнометр жидкостью известной плотности. Разумеется, такой заполняющей жидкостью не может служить вода, так как вода будет увеличивать степень гидратации нельзя применять также этанол, ацетон и эфир, так как они способны притягивать воду [c.103]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология