Индукция штаммов, лизогенных по

Специфическая трансдукция облегчает генетические исследования у бактерий, касающиеся, в частности, расположения и регуляции генов. Для Е. соИ существует множество фагов, подобно фагу Я включающихся в хромосому бактерии в разных местах и позволяющих осуществлять специфическую трансдукцию хромосомных маркеров. Очень важно при этом, какой используется донор-хозяин. Например, штамм 2 (табл. 14.1) имеет делецию в месте нормальной интеграции профага Я в этом случае фаг Я включается с низкой частотой в другие, несвойственные для него места, разбросанные по всей хромосоме. Индукция таких лизогенных бактерий приводит к формированию трансдуцирующих фагов, несущих почти любой желаемый ген [35]. Этот подход может быть использован и для других фагов Е. oli, осуществляющих специфическую трансдукцию, а также для фагов, размножающихся в других видах бактерий. Многие из методов, позволяющих реализовать эти подходы и другие возможности использования фагов, способных к специфической трансдукции, описаны Миллером [2]. [c.90]

Дефектный трансдуцирующий фаг с транспозоном ТпЮ получают при индукции штамма НК337. Этот сложный лизоген (см. [c.66]

Фиг. 164. Индукция профага в лизогенном штамме Е. oli К12 (X) при облучении ультрафиолетом.

Открытие дефектности трансдуцирующего фага К, осуществляющего специфическую трансдукцию, стимулировало аналогичные опыты для проверки возможной дефектности трансдуцирующего фага Р1, у которого трансдукция неспецифична. В ранних исследованиях по неспецифической трансдукции трансдуктанты, полученные после заражения нелизогенных реципиентов, были обычно лизогенными (т. е. несли профаг трансдуцирующего фага). Это объяснялось тем, что не принималось соответствующих предосторожностей для предотвращения множественного заражения нелизогенных реципиентов препаратом трансдуцирующего фага. Когда удалось наконец подобрать условия для действительно единичного заражения, оказалось, что в геноме трансдуцирующего фага Р1 также имеется дефект — функциональный или структурный. Однако в отличие от дефектно-лизогенных трансдуктантов, образующихся при единичном заражении нелизогенных реципиентов Gal" фагом Xag, почти все трансдуктанты, возникающие при единичном заражении нелизогенных реципиентов трансдуцирующим фагом Р1, оказались нелизогенными и чувствительными к тому типу фага, который осуществил трансдукцию, т. е. к фагу Р1. Лизогенные трансдуктанты можно, конечно, получить, если заразить клетки штамма-реципиента с высокой множественностью, т. е. несколькими частцами фага Р1. Однако популяция фагов, высвобождающихся после индукции ультрафиолетом таких лизогениых трансдуктантов, не обладает высокой трансдуцирующей активностью, свойственной HFT-лнза-там, которые получаются в результате индукции клонов гетерозигот GaT/Gal после специфической трансдукции фагом Kdg. [c.355]

При скрещивании штамма Hfr, лизогенного по фагу X, с нелизогенным F -штаммом может иметь место феномен, называемый зиготической индукцией. Что это такое можно понять, сравнивая рекомбинанты, получаемые в реципрокных скрещиваниях между содержащими профаги щтаммами HfrHStr и F ,Thr Leu Ar Т1 La gal Str , результаты которых приведены в таблице. Основываясь на представленных в таблице данных о частоте возникновения рекомбинантов при зиготической индукции, постройте гипотезу, объясняющую этот феномен, и предложите постановку эксперимента для проверки вашей гипотезы. [c.259]

Чтобы получить специфически трансдуцирующие лизаты, нужен штамм донора, лизогенного по отношению к трансдуцирующему фагу. В зависимости от конкретной системы лизат можно приготовить индукцией штам-ма-лизогена ультрафиолетом или митомицином С еще лучше, если у этого штамма имеется профаг, индуцируемый тепловой обработкой, для которого лизогения стабильно поддерживается при 30 °С, а литическая реакция индуцируется обработкой при температуре 37 °С [19]. Чтобы получить лизаты для общей трансдукции, инфицированные бактерии-доноры обычно выращивают в жидкой среде или высевают в чашки методом наслоения мягкого агара, где наблюдается сплошной лизис [2]. Для обеспечения максимального выхода фага и в том и [c.82]

В реальном эксперименте мутант Р22 T W, т. е. множественный мутант фага Р22, несущий в своем геноме ТпЮ ( han et al., 1972), смешивают с клетками и высевают на чашки с богатой средой, содержащей тетрациклин. Образовывать колонии способны лишь те клетки реципиента, которые получили ТпЮ (путем транспозиции). После того как эти колонии вырастут, их перепечатывают на чашки с богатой средой [LB (бульон Лу-риа — Бертани)+тетрациклин] и на чашки с минимальной средой (Е + тетрациклин). Ауксотрофы выявляют, сравнивая эти чашки-реплики. Используемый в таком скрещивании фаг получают индукцией лизогенного штамма NK337, как это описано в методике 5. Там же описано, как определять титр этого дефектного фага. [c.20]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология