Агароза как матрица в аффинной хроматографии

В обычной аффинной хроматографии для иммобилизации субстратов в качестве носителей используются агароза и сшитая сефароза. В качестве сшивающего агента обычно выступает ВгСМ, а мостик образован а,о)-диамином. Эти полисахаридные носители подвержены биодеградации, и, следовательно, органические полимерные гели более удобны в качестве матрицы и допускают более широкий набор химических модификаций. Именно эти причины побудили Уайт-сайдса и сотр. разработать новый метод иммобилизации ферментов в сшитых органических полимерных гелях [126]. По своей простоте и универсальности этот метод превосходит ранее предложенные. Особенно ценен он при иммобилизации относительно лабильных ферментов для использования в ферментерах большого размера при проведении реакций органического синтеза, катализируемых ферментами. [c.257]

Были также разработаны другие методы привязывания лигандов к различного типа матрицам, но активация агарозы бромцианом с последующим присоединением аминов остается наиболее широко используемым и гибким методом приготовления специфических адсорбентов для аффинной хроматографии. Агарозы с привязанными лигандами довольно стабильны и обладают отличными характеристиками как носители для колоночной хроматографии. Поэтому, если у специфического лиганда отсутствует аминогруппа, то ее вводят искусственно. [c.159]

Помимо очистки ряда ферментов, их ингибиторов или субстратов, которые можно попеременно фиксировать на матрице, аффинная хроматография позволяет выделять антитела и антигены, белки, осуществляющие транспорт гормонов и связывание витаминов. К аффинной хроматографии близко примыкает метод выделения ЗН-содержащих белков на ртутьорганических производных агарозы. Явление фиксации антител на производных агарозы открывает широкие возможности. В отличие от [c.453]

К матрице аффинного сорбента, помимо общих для всех хроматографических матриц требований (нерастворимость п гидрофильпость, жесткость, подходящая форма и размер гранул, химическая стабильность в условиях модификации и в самом хроматографическом процессе, отсутствие неспецифической адсорбцип ж др.), предъявляется требование наличия химических групп, позволяющих с помощью несложной химической реакции ковалеитио связывать с матрицей разнообразные биологические молекулы (лиганды и спейсе-ры). Наиболее удобными с этой точки зрения оказались гидроксильные группы полисахаридных матриц — агарозы и сефадексов, а также амидные группировки полиакриламидного геля. Если иметь в виду аффинную хроматографию белков или использование белко- [c.342]

Аффинная хроматография. Данный метод заключается в использовании иммобилизованного на матрице специфического соединения — лиганда, способного специфически и обратимо связываться только с белками и ферментами, имеющими сродство к данному лиганду. В аффинной хроматографии используют различные нерастворимые сорбенты. Так, все большее распространение получают поперечно-сшитые гранулы агарозы. [c.56]

Свойства агарозы были рассмотрены в первой книге >той серии, посвященной электрофорезу [Остерман, 19811. Однако ввпду центральной роли, которую играют агарозные матрицы в иекотор .г хроматографических методах (гель-фнльтрация, аффинная хроматография), имеет смысл привести здесь некоторые данные еще раз. Как и [c.53]

В аффинной хроматографии и твердофазном секвенсировании часто бывает необходимо определить количество белка, связанного с инертной матрицей, такой, как агароза, декстраны и целлюлоза. В принципе это может быть сделано гидролизом образца с последующим определением общего азота, но в матрицу может быть включен небелковый азот, например когда исполь- [c.313]

В качестве матрицы в аффинной хроматографии наиболее широко используется агароза. Это очиш,енный линейный содержащий галактозу (рис. 1) аэрогель-ксерогелевый коллоид, выделяемый или из агара или непосредственно из содержащих агар морских водорослей. Агароза характеризуется хорошей гелеобразующей способностью она относительно биологически инертна и поэтому удобна в качестве носителей не только для аффинной хроматографии, но также и для гель-фильтрации. Агар и агароза — не синонимы, и различные агарозные препараты также могут значительно отличаться друг от друга по своим физико-химическим свойствам. Некоторые агарсодержащие морские водоросли приведены в табл. 1. [c.11]

В результате реакций по уравнению (1) и (2) получают аминосодержащие матрицы с простой гидрофильной структурой, полностью устойчивые в обычно используемых в аффинной хроматографии условиях. Стадия дополнительной модификации описанная в разд. 11.2.4, приводит к тиол-матрице (3-меркапто-пропионил-АЭКМ-агарозе), которая также может быть использована для получения специфических адсорбентов. Структура последней может быть представлена как НЗ-СНгСНг-СО-АЭКМ-агароза. Незаряженная 9-атомная вставка относительно гидрофильна, поскольку включает лишь две соседние СНг-груп-пы и не содержит ароматической структуры. [c.78]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология