Элюирование фронтальное

Хроматограммы можно проявлять тремя различными методами элюированием, фронтальным анализом и вытеснением. Наиболее широко, несомненно, используется элюирование. Фронтальный анализ фактически никогда не применяют в аналитической химии. Методы вытеснения применяются нечасто, но этот принцип используется, например, в очень важном и широко распространенном методе анализа углеводородов, стандартизированном Американским обществом по испытанию материалов и Институтом нефти. [c.15]

Известны различные способы разделения элюирование, фронтальный анализ, замещение. [c.164]

Проявление можно вести тремя различными методами элюированием, фронтальным анализом, вытеснением. Наиболее широко используется элюирование. [c.307]

Методика зонального элюирования в аналитической аффинной хроматографии была разработана фактически параллельно с методикой постоянного элюирования/фронтального анализа (гл. 6). Благодаря прежде всего экспериментальной простоте, зональный метод нашел широкое применение для биохимического анализа биомолекулярных взаимодействий, при которых одно из реагирующих веществ может быть иммобилизовано с сохранением способности биоспецифического связывания. Поскольку метод может быть использован для анализа очень небольших количеств подвижного компонента, он имеет важное значение [c.218]

Важное условие зональной аналитической аффинной хроматографии состоит в том, что концентрация подвижного компонента [Р] по мере прохождения зоны через слой адсорбента постоянно изменяется. Поэтому члены, содержащие [Р], не включаются в выражения, относящиеся к объемам элюирования и константам диссоциации (см., например, приведенные выше уравнения). Пренебрежение [Р] допустимо только в том случае, если этот параметр мал по сравнению с константой диссоциации /Сь- Проведение экспериментов по зональному элюированию при низком [р] обычно легко осуществимо и особенно желательно при анализе труднодоступных биомолекул. Использование низких [Р] в зональном анализе аналогично применению низких концентраций фермента в твердофазном ферментативном кинетическом анализе [7]. Было экспериментально показано (например, в работе [5]), что при низком (по отношению к /Сх) количестве фермента, введенного в аффинную матрицу, рассчитанные константы диссоциации практически не зависят от количества использованного подвижного компонента. В то же время в работе [8] предложены уравнения расчетов по методу постоянного элюирования/фронтального анализа, в которые входит точное значение концентрации подвижного компонента, нанесен ного на аффинную колонку (см. также гл. 6). С практической точки зрения метод зонального элюирования экспериментально более удобен и требует гораздо меньшего количества подвижного компонента. Таким образом, зональное элюирование, по-видимому, наиболее подходящий метод для изучения большинства взаимодействий, представляющих биологический интерес. Следовательно, существует необходимость в чувствительных аналитических методах для проведения элюирования и детектирования малых количеств подвижного компонента. [c.223]

Для ступенчатого градиентного элюирования хроматографических групп была использована возможность разделения смеси элюентов по способу фронтальной хроматографии [3, 5], согласно которому разделение элюентов должно идти по схеме, представленной на рис. 1. При разделении смеси, например, из трёх растворителей различной адсорбционной активности в предварительной колонке (см. рис. 1, а) первым из колонки выйдет некоторое количество наиболее слабо адсорбирующегося растворителя А в чистом виде, затем смесь растворителя А с более сильно адсорбирующимся растворителем В и, наконец, исходная смесь растворителей А, В и С. Поступая в разделительную колонку, растворитель А вытесняет с силикагеля слабо адсорбирующуюся часть образца (компонент а) и движется вместе с ним к выходу из колонки. Затем по этой же схеме десорбируются компоненты Ь и с. [c.6]

При хроматографии в системе газ — адсорбент используют приемы фронтальной [42], вытеснительной [42, 229, 232] или элюционной хроматографии при хроматографии в системе газ — жидкость применяют только принцип элюирования. [c.487]

Профиль, показанный на рис. 17, был определен благодаря анализу, проводившемуся с помощью газовой хроматографии. Исследовалось содержание растворителя на полосках фольги, покрытых слоем силикагеля. Элюирование с таких тонкослойных пластинок проводили в ненасыщенных сэндвич-камерах без предварительного насыщения сухого слоя, если не считать нескольких миллиметров в области видимого фронта (такая область отчетливо обозначена на рисунке). При пользовании данными пластинками, изготовленными с употреблением фольги, не наблюдаются различия профилей градиента при элюировании в горизонтальной и вертикальной плоскостях. Когда элюирование проводили с двухчасовой передержкой, кривизна, обусловленная фронтальным градиентом, устранялась, слой сорбента оказывался равномерно насыщенным и отмечалось общее увеличение концентрации растворителя в слое на 6%. Последствием такой выдержки пластинки являлось то, что (если даже не учитывать повышенное насыщение всей поверхности) большее количество растворителя (в 1.8 раза) проникало в слой для сглаживания фронтального градиента (4й=1-08 см. уравнение 41а). [c.69]

При достижении капиллярного насыщения обеспечивается максимальная (и конкретная) степень насыщения слоя сорбентов молекулами растворителя (т.е. процесс капиллярного насыщения представляет собой также и процесс элюирования). Это не означает, что во всех случаях все виды молекул будут равномерно распределены по слою. Употребляемое нами определение для состояния капиллярного насыщения не учитывает механизмы, за счет которых оно обеспечивается (влияние пористости, поверхностного натяжения и т.д.), и факт существования фронтального градиента (см. разд. II, А, 2). Для полной ясности необходимо добавить, что хотя подъем фронта жидкости действительно приводит к капиллярному насыщению, даже в том случае, когда состояние такого насыщения достигнуто, из этого не обязательно следует, что достигнуто равновесие между смоченным слоем и атмосферой камеры. Однако на обычный процесс тонкослойной хроматографии не влияет такой теоретически длительный этап уравновешивания (на которое может уйти целый день), поскольку элюирование обычно заканчивается, когда фронт растворителя достигает заведомо определенной линии (хг), [c.95]

Кривая элюирования будет повторять в обратном порядке кривую фронтального анализа последняя ступень будет соответствовать относительно чистому последнему (наиболее сильно удерживаемому) компоненту. [c.8]

В плане этих общих подходов электромиграционный метод близок к хроматографии (те же два основных направления повышения эффективности разделения) — поиск методических приемов лучшего разрешения зон при постоянных Кс и использование химических превращений с целью увеличения Кс. Похожи и основные схемы практического осуществления процесса разделения на колонке, на бумаге, в тонком слое. Возникший на заре развития электромиграции метод подвижной границы внешне аналогичен фронтальному анализу в хроматографии. В этом случае движение разделяемых ионов в электрическом поле происходит непосредственно из раствора их смеси. В наиболее распространенном случае зонного электрофореза просматривается общность с проявительным режимом элюирования в хроматографии. Узкая полоса исходной смеси веществ в среде определенного электролита разделяется на индивидуальные зоны. Существует внешняя аналогия противоточного и двухмерного электромиграционного разделения с соответствующими способами осуществления хроматографического процесса. Поэтому при всем принципиальном различии методов по природе химических процессов, лежащих в их основе, хроматографию и электрофорез иногда даже рассматривают как смежные методы [95]. [c.243]

В общем можно сказать, что фронтальный анализ применяют для предварительной разведки, а метод вытеснения все чап е используют как способ выделения органических всществ в количествах, достаточных для осуществления элементарного анализа, получения производных, изучения строения и т. д. Метод элюирования оказался наиболее удобным способом проведения количественного анализа сложных смесей, когда в наличии имеется всего несколько миллиграммов вещества. [c.80]

Фронтальный анализ Элюирование [c.60]

В проведенных исследованиях для характеристики крутизны спада кривых использовалось отношение оптических плотностей при длинах волн 461 и 541 нм, так как в этом диапазоне наблюдается наибольшее изменение оптических свойств. Как видно из рис. 23, <3, это отношение наибольшее в первых фракциях, отбираемых при фронтальном анализе, затем оно постепенно снижается, потому что из хроматографической колонки начинает поступать смешанный раствор. Еще более заметное уменьшение наблюдается при элюировании колонки. Наименьшие величины отношения характерны для проб, выделенных при растворении адсорбента в кислоте и переводе осадка в раствор 0,01-н. раствором щелочи (гуминовые кислоты). [c.60]

Параметры колонки необходимы для расчета числа теоретических тарелок колонки и для определения характеристик распределения экстрагируемого соединения по кривым элюирования или фронтальным выходным кривым (см. разд. 6). [c.80]

Рис. 8. Фронтальная выходная кривая три элюировании комплекса палладия с

Разновидность количественной аффинной хроматографии — фронтальный анализ [10] он основан на понятии плотности о аффинного лиганда на единицу длины колонки с агарозой. Если / — общая длина колонки с агарозой, а Li — общее количество им мобилизованного лиганда в сорбенте, то о = - г/ - Если аффинный сорбент характеризуется слабым сродством, то раствор фермента в концентрации [ 0] наносится на колонку непрерывно, а для элюирования фермента с колонки необходим объем V. Можно написать следующее уравнение [c.51]

При измерениях в широкой области концентраций имеют дело с большими концентрациями вещества пробы в газовой и неподвижной фазах. Экспериментально это реализуется путем дозирования пробы большого объема или же работой в режиме фронтальной газовой хроматографии. При этом регистрируется изменение формы концентрированного профиля вещества пробы за период времени от ввода в колонку до элюирования. Модифицированные приборы для измерения термодинамических величин с помощью фронтальной газовой хроматографии описаны в работах [59—61]. [c.342]

В связи с кинетической природой хроматографического процесса результаты, полученные рассмотренными методами, несколько различаются. Согласно [67], данные фронтальных газохроматографических методов более точны, чем получаемые методами элюирования. На рис. ХП.4 представлены формы профиля при фронтальном анализе и при элюировании на плато постоянной концентрации. [c.344]

Элюировать можно различными путями. В некоторых -случаях добавляют ЭДТА в таком количестве, чтобы связать в комплексные соединения лишь часть РЗЭ, присутствующих в смеси ( фронтальный метод). В этом случае в колонку вводят уже раствор с элюантом, смола является как бы фильтром более прочные комплексы тяжелых РЗЭ проходят через колонку, менее прочно связанные легкие РЗЭ адсорбируются на смоле и в дальнейшем извлекаются из смолы отдельными фракциями элюированием ЭДТА соответствующей концентрации. Такой метод элюирования существенно ускоряет разделение РЗЭ, т. е. увеличивает производительность. За одну операцию можно получить большое количество двойных и тройных смесей. Введение смеси РЗЭ в виде уже заранее приготовленного раствора с элюантом делает работу колонки более устойчивой, ибо процесс первоначального комплексообразования проводится вне ее. Смола используется более полно и процесс легко можно преобразовать в непрерывный. Иногда [c.121]

В зависимости от положения пластинки и направления потока элюента различают восходящую, нисходящую и горизонтальную ТСХ. По технике работы выделяют фронтальный анализ (когда подвижной фазой служит анализируемая смесь) и обычно используемый элюционный вариант. Применяют также круговую (когда анализируемый р-р и р-ритель последовательно подаются в центр пластинки) и антикруговую ТСХ (когда анализируемый р-р наносится по окружности и элюент перемещается от периферии к центру пластинки), ТСХ под давлением (когда р-ритель под давлением пропускают через слой сорбента, покрытый плотно прижатой полиэтиленовой пленкой), а также ТСХ в условиях градиента т-ры, состава сорбента н т. п, В т. наз. двухмерной ТСХ хроматографич. процесс осуществляют последовате.чьно в двух взаимно перпендикулярных направлениях с разл. элюентами, что увеличивает эффективность разделения, С этой же целью применяют многократное элюирование в. одном направлении. [c.608]

На рис. 20 показаны зарегистрированные сканирующим денсито- метром фронтальные градиенты (аналогичные данные можно увидеть на рнс. 62 и 106). Пологий участок оказывается наибольшим при использовании насыщенных обычны. ка-мер, в которы. слой уравновешен (до состояния "сорбционного насыщения") газовой фазой перед началом элюирования. На соответствующем графике показан фактический фронт (см. рис. 182), а не визуально обнаруживаемый. При работе с сэндвич-камерой [c.71]

В центробежном (цб) варианте растворитель подается через малый канал и распространяется на весь сектор. В иентростремительном (цс) варианте стартовой линии соответствует большой фронтальный участок весь сектор последовательно заполняется растворителем, но при пропускной способности всего = 50% от характерной для линейного варианта элюирования. Штриховыми линиями обозначены границы участка, который использовался бы прп линейном варианте элюирования (при аналогичной длине стартовой линии). [c.291]

Когда способные к обмену ионы элюента (Н+) имеют мень-,шее сродство к иониту, чем разделяемые ионы (N3+ и Ы+), в элюате в течение всего процесса элюирования обнаруживаются ионы элюента (Н+). Поэтому важно выбирать элюент так, чтобы его ионы легко отделялись от разделяемых ионов. В этом особенность элюентной хроматографии — когда все разделяемые ионы можно в принципе получить в виде отдельных фракций (в отличие от метода фронтального анализа). Однако полосы некоторых элементов могут быть сильно размытыми, и чистыми такие элементы можно получить лищь в виде очень разбавленного раствора. В этом случае полезно применять ступенчатое элюирование. Так как наибольшее размазывание наблюдается для наиболее сорбируемых ионов смеси, сначала элюируют не-, сколько ионов одним элюентом, а затем завершают элюирование другим раствором, более эффективно выделяющим ионы, оставшиеся в колонке. Можно применять непрерывное повышение концентрации элюента (градиентное элюирование). [c.159]

Для оптимального разделения продуктов гидролиза нуклеиновых кислот на колонках с ионообменными смолами необходим градиент элюирования, т. е. непрерывное или ступенчатое изменение концентрации ионов или pH вымываюш его раствора или того и другого. Рандерат [73] сообш ает, что на ионообменном слое из модифицированной целлюлозы (эктеола или ДЭАЭ) можно добиться разделения, наблюдаемого на колонках с ионообменной смолой (дауэкс) только при применении градиента элюирования. Этот автор предполагает, что при использовании метода ХТС вследствие фронтального разделения растворителя на слое возникает градиент, которым и объясняется хорошее разделение . [c.447]

При разделении гумусовых веществ применялось сочетание двух методов жидкостной хроматографии — фронтального (намыв колонки при фильтровании природной воды) и элювиального методов анализа (размыв колонки 0,01-н. раствором бикарбоната натрия, pH 8,4). В пробах определялись цветность, окисляемость (перманганатная, бихроматная) и оптическая плотность на упрощенном спектрофотометре. Качественными исследованиями фильтрата, прошедшего через слой карбоната кальция, установлено, что при фронтальном анализе вначале сорбируются из воды практически все окрашенные органические вещества. Затем в результате увеличения количества адсорбированных веществ типа гуминовых и апокреновых кислот соединения типа креповых кислот постепенно вытесняются из колонки. При элюировании вследствие изменения pH среды в раствор переходят апокреновые кислоты. Это подтверждается данными отношения перманганатной и бихроматной окисляемости растворов гумусовых веществ. Величина этого отношения для апокреновых кислот, выделенных химическим путем (см. стр. 44, 45), значительно выше, чем для креновых. Соответствующие результаты получены также ири исследовании (1958 г.) фракций фронтального и элювиального хроматографического анализов водного гумуса (табл. 12). Гуминовые кислоты в ходе анализа из колонки не вымывались, и для перевода их в раствор адсорбент растворяли в соляной кислоте с последующей обработкой осадка 0,01-н. едким натром (pH 12). [c.59]

Как правило, целесообразно проследить всю выходную кривую-элюирования или соответственно фронтальную выходную кривую,, так как формы этих кривых содержат информацию о качестве набивки и всей системы в целом. Очень широкие пики и асимметрия пиков элюирования или и то и другое и необычно пологая фронтальная выходная кривая обычно указывают на отсутствие однородности в размерах частиц носителя или набивки колонки. Особенно просто обнаруживается обоазование каналов в колонке. [c.82]

Во фронтальной хроматографии [20, 21] раствор образца непрерывно вводится в колонку и используется одновременно как подвижная фаза для элюирования колонки. Все компоненты смеси первоначально удерживаются неподвижной фазой, но поскольку степень удерживания отдельных компонентов разная, то и скорость передвижения отдельных компонентов неодинакова. Компонент с наименьшим удерживанием будет двигаться первым и. спустя некоторое время появится в элюате. Вначале элюат будет содержать только этот компонент. После проскока второго компонента и до проскока третьего элюаг будет содержать два вещества. Недостатки фронтальной хроматографии при разделении смесей очевидны. В чистой форме можно выделить только часть наиболее сильно удерживающего компонента образца. Так как высота последовательных ступеней фронтальной выходной кривой не может характеризовать содержание ни одного из компонентов, то такой подход редко используется в аналитической химии. [c.85]

Еще Флодин [1, 13] при систематическом изучении гель-фильтрации особо отмечал следующие основные положения. Объем выхода вещества определяется только размерами его молекул и почти не зависит ни от скорости элюирования, ни от концентрации вещества. (Разделение становится нечетким лишь в том случае, когда вязкость раствора образца намного превышает вязкость элюента [1].) Справедливость этих двух основных положений не подлежит сомнению. Лишь при фронтальном анализе белков на сефадексе G-100 [15] объем выхода в какой-то степени зависел от концентрации. Отсутствие зависимости между объемом выхода и скоростью движения элюента имеет решающее значение при обсуждении механизма процесса (см. далее) поэтому именно это положение проверялось особенно часто, и лишь немногим авторам удалось зафиксировать (совсем небольшие) воспроизводимые различия [12]. [c.114]

Шей и сотрудники [7] еще в 1954 г. предложили газо-хромато-графический метод для измерения сорбционных изотерм. Этот метод основан на принципе определения времен элюирования инертного и сорбируемого газов, фронтально протекающих через колонну с сорбентом. Принцип метода может быть легко объяснен с помощью рис. 3. [c.81]

Образование фронтальных хроматографических зон в подвижной фазе, известное как явление расслоения подвижной фазы [1], наблюдается во всех хроматографических системах при изменении состава подвижной фазы. Обычно расслоение считается нежелательным явлешем, отрицательно влияющим на результаты разделения при градиентном элюировании, принимают меры для нейтрализации этого отрицательного эффекта [3, 4]. [c.41]

В свете сказанного выше рассмотрим процесс разделения мальтенов гудрона котуртепинской нефти на группы с использованием одной из модификаций широко распространенной методики определения группового состава [22]. Разделение проводили на активном силикагеле при соотношении адсорбент проба 200 1. В качестве растворителей последовательно использовали чистый изооктан дпя элюирования насыщенных углеводородов и смеси изооктана с бензолом, содержащие 5, 10, 15, 20, 25 и 30% (объемн.) бензола, для элюирования трех групп ароматических углеводородов. Первую группу смол элюировали бензолом, вторую - спиртобензольной смесью. В процессе разделения отбирали фржции элюата равного объема, масса которых после анализа состава растворителя и его последующего отгона служила основой для построения элюционной кривой выхода разделенного нефтепродукта из колонки, а показатели преломления этих фракций использовали для определения границ хроматографических групп. Кривые состава подвижной фазы по каждой фракции элюата получены на основе газохроматографического анализа. Полученнь1е результаты представлены на рис. [13]. Как и следовало ожидать, концентрационные кривые растворителей, входящих в состав подвижной фазы, показьшают, что в слое адсорбента произошло расслоение подвижной фазы, которое привело к образованию ряда фронтальных зон бензола и этанола. Предполагалось, что число фронтальных зон бензола будет соответствовать числу изменений его концентраций от 5 до 100%, т. е. будет образовано 7 таких зон. Однако достаточно четко прослеживается наличие только четырех зон. Вероятно, это связано с низкой эффективностью колонки вследствие того, что колонка была заполнена крупными частицами силикагеля (0,25—0,5 мм) и элюирование проводили в нисходящем потоке подвижной фазы. Несмотря на это, можно видеть, что движение фронтальных зон подвижной фазы по слою адсорбента вызывает вытеснение, выталкивание этим фронтом гех адсорбированных соединений нефтепродукта, адсорбционная способность которых ниже адсорбционной способности этого растворителя. [c.41]

Преимуществами метода Касаи и Ишии [10] являются его чувствительность и простота для исследования необходимо лишь небольшое количество белка по сравнению с методом Данна и Чейкена [7] в этом методе концентрация фермента очень мала относительно Кй использование фронтального анализа упрощает выведенные уравнения объемы элюирования можно определить более точно, поскольку они практически не зависят от концентрации. При использовании этого метода для определения констант диссоциации химотрипсина на сфероне, к которому был привязан с помощью гидрофобного гексаметилендиамина N-бензилоксикар-бонилглицил- D-фенилаланин, Туркова и др. [15] встретились с трудностями, обусловленными, очевидно, неспецифической сорбцией. [c.54]

Такое количественное разделение ионов с известными в настоящее время ионитами не всегда удается, хотя в принципе это возможно. Поэтому на практике предпочитают исиользо-1)ать фронтальный анализ для получения первичной хроматограммы при этом хроматографируемые вещества переводятся и фильтрат, который собирается по фракциям. В них количе-с1венно определяют вещества, элюированные из сорбснта, и строят выходную кривую распределения вепгеств. [c.201]

Метод ионообменной хроматографии в настоящее время широко используется для получения чистых препаратов редкоземельных элементов (РЗЭ) [1—4]. Известно большое число различных методик хроматографического разделения смесей РЗЭ, но многие из них носят эмпирический характер. Наряду с этим в литературе имеется ряд сообщений, посвященных выбору условий хроматографического разделения смесей. Мейер и Тонкине [5] использовали теорию тарелок для описания процесса элюирования РЗЭ раствором лимонной кислоты теоретические кривые вымывания совпали с опытными. Метод расчета применим также для определения чистоты РЗЭ, разделяемых при помощи процесса элюирования. Корниш [6], используя выражение, данное Глюкауфом для высоты, эквивалентной теоретической тарелке (ВЭТТ), применил теорию тарелок для предсказания условий разделения смесей ряда элементов. В работах Масловой, Назарова и Чмутова [7,8] была рассчитана величина ВЭТТ для процесса вымывания церия раствором молочной кислоты, что дало возможность произвести расчет кривой элюирования и установить условия получения элемента с заданной степенью чистоты. В работе тех же авторов [8] на примере разделения церия и прометия молочной и пирофосфорной кислотами был проведен расчет процесса градиентного элюирования РЗЭ, с использованием теории Фрейлинга. Расчет удовлетворительно совпадает с экспериментальными данными. В работах Еловича и сотр. [9—12] получено выражение для расчета процесса разделения близких по свойствам элементов. На примере разделения трансурановых элементов при помощи ЭДТА показано решающее значение комплексообразования по сравнению с обычным ионным обменом. В работах Материной, Сафоновой и Чмутова[13] рассмотрена возможность применения фронтального анализа в ионообменной комплексообразовательной хроматографии. Авторы изучали процесс комплексообразования в зависимости от pH среды. Маторина [14] изучила зависимость равновесного коэффициента разделения от pH [c.170]

Процесс десорбции (элюирования) можно осуществлять двумя путями 1) элюентно — так же, как и при применении лимоннокислых растворов 2) фронтально. В последнем случае ЭДТА добавляется в таком количестве, чтобы связать в комплексные соединения лишь часть РЗЭ, присутствующих в смеси. В колонку вводится раствор уже с элюентом. Смола является как бы фильтром более прочные комплексы тяжелых РЗЭ проходят через колонку, менее прочно связанные легкие РЗЭ адсорбируются на смоле и в дальнейшем извлекаются из смолы отдельными фракциями элюированием ЭДТА соответствующей концентрации. Такой метод элюирования существенно ускоряет разделение РЗЭ, т. е. увеличивает производительность. За одну операцию можно получить большое количество двойных и тройных смесей. [c.322]