Отвечающие клетки

Рис. 3.38. Принцип методики смешанной культуры лимфоцитов. Стимулирующие клетки, деление которых подавляется рентгеновским облучением, контактируют с отвечающими клетками, заставляя их делиться. Деление можно зарегистрировать с помощью меченого тимидина. Отсутствие сигнала радиоактивного углерода С в составе тимидина свидетельствует об отрицательной реакции (отсутствие соответствующего рецептора на отвечающих клетках).

Отвечающие клетки предшественники Т-киллеров) [c.172]

Т-киллеры (отвечающие клетки) [c.172]

Отвечающие клетки клетки селезенки, отмытые один раз в ЗФР конечная концентрация — 3—4-10 в 1 мл. [c.203]

Обычно отвечающие клетки культивируют 5—6 дней, затем осаждают центрифугированием (10 мин при 1000 об/мин) и ресуспендируют в отмывающей среде в объеме, равном одной трети исходного. [c.204]

Присоединенные аллоантигены обычно концентрируются в виде слабо флуоресцирующих пятен на одном полюсе клетки. Так как свечение фона и интенсивность специфической флуоресценции могут варьировать от опыта к опыту (даже при одной и той же комбинации линий мышей), особенно при использовании разных антисывороток, очень важно в каждый опыт включать все необходимые контроли, а также учитывать препараты слепым методом. В мазке почти все бласты (94,4%) относятся к отвечающим клеткам, однако иногда можно обнаружить небольшой процент (3,8%) бластов, образовавшихся из стимулирующих клеток (табл. 1). Такие бласты легко отличить у них ярко флуоресцирует вся поверхность. [c.315]

Стимулирующие Отвечающие клетки [c.462]

Подготовка клеток-киллеров. После завершения процедуры рестимуляции in vitro отвечающие клетки промывают и ре-Ьуспендируют таким образом, чтобы их максимальная концентрация в цитотоксическом тесте в момент внесения в культуру соответствовала значению 1—1,2-10 . Исходя из этой концентрации, готовят серийные трехкратные разведения. [c.506]

В качестве источника хелперного фактора использовали также облученные сплеиоциты, сингенные отвечающим клеткам (Pilarski, 1977). Однако добавление большого числа клеток к микрокультурам может ухудшить условия культивирования, что помешает оптимальному образованию ЦТЛ. Числа ЦТЛ-П, определяемые при использовании этой методики, обычно меньше, чем при добавлении растворимых хелпериых факторов Т-клеток. Кроме того, неясно, какие именно клеточные взаимодействия происходят при таких условиях культивирования. [c.253]

В заключение следует отметить, что методом лимитирующих разведений для клонирования нужно пользоваться с осторожностью. Необходимо помнить, что отвечающие клетки распределены в культурах случайным образом, и даже ссли в среднем на луику приходится меньше одной клетки-предшествениика, в каких-то лунках может оказаться больше таких клеток. Из обшей формулы распределения Пуассона [уравнение (I)] можно [c.268]

Животные отвечающие клетки лимфоузлов получают от 6— 8-иедельных мышей-самок линии A/J, а стимулирующие клетки селезенки — от 6—12-недельных мышей линии [c.306]

Отвечающие клетки лимфатических узлов (40-10 ) смешивают с 80-10 облученных (3300 Р) клеток-стимуляторов из селезенки н культивируют в 15 мл полной культуральной среды в матрасах для тканевых культур с площадью дна 75 см (№3024, Fal on) в вертикальном положении. Матрасы инкубируют при 37во влажной атмосфере с 5,5% СОг. Культуральную среду можно не менять Ю 14 дней. [c.308]

Этот феномен зависит главным образом от двух свойств смешанных популяций лимфоцитов 1) от экспрессии стимулирующих антигенных детерминант на клеточной поверхности и 2) от способности лимфоцитов к их распознаванию. Эти два свойства впервые удалось изучить раздельно с помощью так называемой однонаправленной СКЛ, в которой одна из двух аллогенных популяций лишена способности активироваться и может лишь играть роль стимулятора для клеток другой популяции. Этой однонаправленности можно добиться двумя способами 1) генетическим — культивируя лимфоциты гибридов первого поколения (стимуляторы) с лимфоцитами родительских линий ( отвечающими клетками), или 2) биохимическим — подавив синтез ДНК в одной из двух клеточных популяций (стимулирующей) рентгеновским облучением или митомицином С. Структуры, ответственные за распознавание и за стимулирующие свойства лимфоцитов, точно не известны, однако они, по-видимому, принадлежат клеткам разных популяций. Полагают, что все отвечающие клетки относятся к определенным ограниченным субпопуляциям Т-лимфоцитов, а В-клетки обладают только сильными стимулирующими детерминантами, хотя имеющиеся данные не позволяют исключить наличие стимулирующих детерминант и на Т-клетках. [c.240]

В описываемом методе лимфоциты, примированиые в СКЛ, используются в качестве источника отвечающих клеток (называемых примироваиными отвечающими клетками — ПОК). При этом можно изучать способность таких клеток к вторичному ответу на стимулирующие клетки самых различных типов и таким образом анализировать реактивность и специфичность аллоиммунных лимфоцитов. Вероятно, этот метод позволит глубже исследовать природу антигенных детерминант, стимулирующих СКЛ, и рецепторов Т-клеток, распознающих эти детерминанты. [c.249]

Отвечающие клетки лимфоузлов (40-10 ), полученные как описано выше, культивируют вместе со стимулирующими клетками (80 10 ), облученными в дозе 3300 Р. Для этой первичной культуры используют пластмассовые флаконы (Fal on, № 3024), содержащие 15 мл среды для СКЛ (с 10% СПК, инактивированной нагреванием, вместо 2,5% человеческой сыворотки). Флаконы инкубируют в вертикальном положении. Через 4 дня можно взять из каждого флакона пробу объемом 100 мкл и внести в нее зН-тимидин для 24-часовой экспозиции, как описано ранее, чтобы оценить первичную реакцию СКЛ. [c.249]

МЫ приготовляем его раствор в ацетоне в концентрации 5 мг/мл и храним при —20°С во флаконе, закрытом фольгой. Перед опытом мы этот основной раствор разбавляем в 100 раз физиологическим раствором и 10 мкл его прибавляем к клеточной суспензии.) Флуорохромированную суспензию помещаем в счетную камеру и подсчитываем живые флуоресцирующие клетки в люминесцентном микроскопе. Обычно пользуются стандартным флуоресцентным микроскопом с опак-иллюминатором (освещение сверху через объектив) и соответствующими возбуждающими и запирающими фильтрамиЖизнеспособными обычно остаются от 10 до 50% исходных отвечающих клеток. Эти живые лимфоциты называют примнрованными отвечающими клетками (ПОК). [c.250]

Усиление клеточной пролиферации и синтеза макромолекул — это опосредованный эффект, отдаленный результат первоначального взаи 0Действия между аллогенными клетками. Неоднозначность такого взаимодействия лежит в основе ложных положительных еакций, которые можно наблюдать, в частности, при культивировании лимфоцитов Fi с клетками родительских лини и или лимфоцитов мышей nuinu с аллогенными клетками. Как выяснилось, положительный ответ в этих случаях обусловлен обратной стимуляцией отвечающих клеток, которая происходит в результате абортивной аллогенной активации облученных стимулирующих клеток интактными отвечающими клетками. [c.252]

После обработки мазка аллоантисывороткой к клеткам линии, отличной от стимулирующих и отвечающих клеток, число таких Т-бластов обычно слегка повышается (дополнительно на 2—4%), Этот эффект наблюдается даже после истощения антисыворотки стимулирующими и отвечающими клетками и объясняется скорее всего остаточной перекрестной реактивностью антисыворотки или же неспецифическим захватом клетками иммуноглобулина из этой антисыворотки. Хотя общее число бластов, флуоресцирующих без обработки аллоантисывороткой, может достигать 6,9%, гипериммунная антисыворотка, выявляющая аллоантигены стимулирующих клеток, окрашивает в 9,2—11,8 раз больше Т-бластов, чем антисыворотка к третьей, неродственной линии. [c.315]

Все эти факты указывают на то, что аллоантитела, связываемые поверхностью отвечающих клеток, вовсе не обязательно реагируют с теми же аллоантигенными молекулами, детерминанты которых распознаются предполагаемыми эндогенными рецепторами этих клеток. (Попутно отметим, что, вероятно, те сайты на фрагментах мембран стимулирующих клеток, которыми эти фрагменты присоединяются к отвечающим клеткам, уже недоступны для добавляемых антител.) Таким образом, ничего не зная о размерах присоединяемых фрагментов мембран и [c.317]

Когда лимфоциты от генетически различных особей растут вместе в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ), то обычно наблюдается пролиферация. Отвечающие клетки — это подкласс Т-лимфоцитов. Их активируют антигенные детерминанты стимулирующих клеток. Эти детерминанты находятся под контролем генов главного комплекса гистосовместимости. Как правило, ставят СКЛ, дающие однонаправленные ответы (при этом отвечающие клетки активируются специальным набором стимулирующих клеток). При заданной комбинации отвечающих и стимулирующих клеток на выраженность ответа влияют несколько факторов. Наиболее важный из них — различная стимулирующая и отвечающая способность клеток. Эта способность значительно варьирует от опыта к опыту. В связи с этим метод оценки должен быть достаточно грубым для того, чтобы привести результаты всех опытов в соответствие с законом нормального распределения (см. Thorsby, Piazza, 1975, и указанную там литературу). Приведенные ниже примеры иллюстрируют такой метод. [c.461]

ПОК — примироваиные отвечающие клетки (в смешанной культуре лимфоцитов) [c.469]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология