Выделение репрессора и его связывание с ДНК

Выделение репрессора н его связывание с ДНК [53, 54] [c.90]

Каждый домен способен выполнять свою функцию независимо от другого. С-концевой протеолитический фрагмент способен образовывать олигомеры. N-концевой фрагмент способен связаться с операторами, хотя и с более низкой эффективностью, чем интактный репрессор. Таким образом, информация для специфически контактирующей ДНК содержится в пределах N-концевого домена, но (так же как в случае с /ас-репрессором) эффективность процесса повышается при присоединении С-конце-вого домена. Вероятно, это происходит из-за способности интактного репрессора димеризоваться, что обеспечивает одновременное связывание с ДНК его двух N-концевых доменов. Выделенная N-концевая область осуществляет те же контакты с ДНК, как и интактный репрессор. Однако при удалении последних трех N-концевых аминокислот способность к некоторым из контактов утрачивается. На основе этого наблюдения была предложена модель, показанная на рис. 16.9, согласно которой основная часть N-концевой области осуществляет контакты на одной стороне ДНК, тогда как три последние N-концевые аминокислоты образуют контакты на противоположной стороне ДНК. [c.214]

Сродство выделенных N-концевых доменов к трем участкам 0 соответствует сродству полного репрессора к каждому из этих участков по отдельности. Другими словами, удаление С-концевого домена никак не сказывается на способности репрессора различать эти три участка, но полностью лишает его кооперативности, которая наблюдается при связывании димеров с соседними участками. Энергия взаимодействия между димерами репрессора, связанными с ДНК, составляет примерно-2 ккал/моль. [c.108]

Представим себе два операторных участка, один из которых обладает меньшим сродством к репрессору, чем другой (например, OrI и Or2), и разделенных пятью или шестью витками спирали (имеется в виду расстояние между центрами операторных участков). Репрессор кооперативно связывается с этими участками-точно так же, как и в случае, когда они находятся на обычном расстоянии в два витка. Другими словами, сродство к участку слабого связывания увеличивается, если в составе той же ДНК имеется участок сильного связывания. Как и в случае, когда участки сближены, выделенные N-концевые домены связываются некооперативно. [c.147]

Поведение выделенного белка-репрессора in vitro прямо показывает, что в нем имеется участок связывания с ДНК, способность которого оставаться присоединенным к ДНК оператора зависит от структуры остальной части молекулы. [c.184]

Изучение генетического контроля утилизании лактозы в клетках Е. соИ привело исследователей к выводу о существовании белка-репрессора, который в отсутствие лактозы в среде выключает синтез Р-галактозидазы. Выделение, очистка этого белка и использование его в опытах in vitro позволили расшифровать механизм гакой регуляции. Оказалось, что репрессор ингибирует транскрипцию 1ас-оперона, связываясь с так называемым оператором - последовательностью ДПК длиной 21 нуклеотид, которая перекрывается с расположенным по соседству участком связывания РПК-полимеразы (промотором). До тех пор, пока репрессор [c.184]

Сайты связывания репрессоров и активаторов. То, что регуляторы транскрипции должны присоединяться к выделенным местам на молекуле ДНК стало понятно сразу после их открытия. Многие промоторы регулируются своими репрессорами, которые присоединяются к участку ДЖ, называемом оператором. Xopomo изученными примерами являются регуляторные области генов la (Gilbert et al., 1976), trp (Bennett, [c.115]

Репрессор 1ас-оперона был выделен и очищен. Он имеет молекулярную массу около 150000 Д и состоит из четырех идентичных субъединиц. Каждая субъединица связывает по одной молекуле индуктора ИПТГ. Очищенный репрессор имеет исключительно высокое сродство к специфическому 1ас-опера-торному участку ДНК oli, связывание с которым нарушается в присутствии индуктора [c.17]

Рис 4 6 Специфическое связывание Х-репрессора с ДНК фага X Этот эксперимент показывает, что Х-репрессор связывается с ДНК фага X, но не с ДНК Хтт Аналогичным образом репрессор фага 434 связывается с ДНК фага Хтгп , но не с ДНК фага X Поскольку эти две ДНК различаются только областью иммунности, репрессоры связываются с участками, расположенными именно в этих областях Как показали дополнительные эксперименты. ДНК, выделенная из фага Xvir, связывает Х-репрессор гораздо слабее, чем ДНК фага X дикого типа Это подтверждает, что репрессор связывается с операторами фага X, выявленными генетическими методами [c.92]

Во многих точках последовательности операторного участка длиной 17 пар оснований можно произвести замену пар оснований, приводящую к уменьшению эффективности связывания репрессора с данным участком. Много мутантных операторов содержат ДНК фагов Xvir, которые способны расти в присутствии Х-репрессора. Первый из выделенных фагов Xvir содержал мутации в 0 , OrI и Or2. Если в дальнейшем использовать этот фаг для отбора мутантов, способных расти при более высоких концентрациях репрессора, чем в данном лизогене, то можно выделить новые мутанты, несущие допол- [c.105]

Исходно белок Сго был выделен из клеток, где шла литическая инфекция, в опытах по связыванию с фильтрами. Это был один из белков, которые специфически связывались с ДНК фага X. Соответствующий ген был клонирован и соединен с различными призводными /ас-промотора. В клетках, содержащих такие плазмидные конструкции, Сго может синтезироваться в различных количествах. Если содержание белка достаточно высоко (до нескольких процентов суммарного количества), его легко выделить, и многие биохимические подходы, использованные в случае репрессора, были применены и при изучении Сго. [c.116]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология