Выделение 32р-РНК из фага

Негативные колонии (НК) — признак первичной идентификации вновь выделенного фага [c.186]

Выявление роли бактериофага как причины неудачных ферментаций обычно является задачей заводской лаборатории. Вместе с тем глубокое изучение свойств вновь выделенного фага, вплоть до его классификации, провести в заводской лаборатории трудно как из-за ограниченных возможностей в использовании дорогостоящих приборов и реактивов, так и прежде всего из-за опасности распространения фага иа производстве (для многих методов исследования требуются большие количества фага). Поэтому работу по классификации фага целесообразно проводить в специализированной фаговой лаборатории, хорошо оснащенной и обладающей соответствующим опытом работы с фагами. Отобранные на любых стадиях работы фагоустойчивые варианты бактерий-продуцентов должны пройти обязательную проверку на сохранение ими всех необходимых производственных свойств и на отсутствие нежелательных свойств, которые могут возникнуть в ходе придания клеткам признака фагоустойчивости. Эти работы в наилучшей степени могут быть выполнены в генетико-селекционной лаборатории. [c.206]

После получения окончательного доказательства роли бактериофага в неудачной ферментации (совпадение неудачных операций с признаками фаголизисов, выделение фагов из производственных емкостей) проводят работы по гашению вспышки фаголизиса, включающие определенные мероприятия. [c.213]

Анализ адсорбционных свойств вновь выделенного фага (возможность выявления кофактора адсорбции, удаление которого из среды или связывание приведет к остановке роста фага), [c.213]

Выделение фага из объектов окружающей среды. Для [c.65]

Для выделения фага X следуйте методике 4. Используйте минимальное количество пробирок. Препарат фага с 20 чашек можно уместить в две центрифужные пробирки объемом по 45 мл. [c.46]

И. Следуйте методике 2 выделения фага Я вплоть до стадии центрифугирования. Используйте минимальное число пробирок. Препарат с 20 чашек можно уместить в две центрифужные пробирки объемом 45 мл. [c.49]

Возможность быстро оценить уровень адсорбции для вновь выделенного фага промышленных бактерий очень важна на практике, поскольку позволяет изучить потребность фага в кофакторах адсорбции. Например, для вирулентного фага Т4 кофактором адсорбции является триптофан, необходимый для активации хвостовых волокон. Кофакторами адсорбции могут быть ионы тех или иных металлов, особенно часто магния или кальция. Важным условием для выявления кофакторов адсорбции служит строгая стандартизация условий опыта (состав адсорбционного буфера, температура, реакция среды). Если выделенный в производственных условиях фаг нуждается в каком-то кофакторе адсорбции, то устранение этого кофактора из питательной среды может оказаться вполне достаточной мерой для гашения вспышки фаголизиса, вызванного данным фагом (при условии, что удаление кофактора не ухудшает рост или биосинтетическую активность бактерий, или иные их важные для производства свойства). Му- [c.174]

На рис. 9.1. были представлены некоторые морфотипы фагов в соответствии с классификацией Бредли. Абсолютные размеры частиц в описании морфотипа не учитываются и приводятся отдельно. Такая классификация имеет, естественно, очень ограниченное значение, ее основная цель — создать удобство для описания морфологии частицы вновь выделенного фага. Г. Аккерман для [c.192]

Одним из таких подходов, имеющих прямое отношение к обсуждаемой теме, является отбор белковых лигандов фагового дисплея непосредственно в живом организме [100, 101]. В этом случае суспензию фаговых частиц дисплея вводят в кровоток экспериментального животного, через некоторое время животное забивают и из исследуемого органа выделяют находящиеся там фаговые частицы. Выделенные фаги размножают в бактериальных клетках и проводят новый раунд отбора. После нескольких раундов удается выделять фаговые частицы, специфически задерживаемые данным органом, а следовательно, экспрессирующие на своей поверхности лиганды, специфичные в отношении рецепторов органа (или ткани). При этом остальные органы и ткани организма осуществляют отрицательный отбор тех фаговых частиц, которые экспрессируют лиганды универсальной специфичности и взаимодействуют со всеми органами и тканями организма. С использованием такой системы отбора пептидов фагового дисплея удалось получить пептидные аптамеры, специфически взаимодействующие с многими тканями экспериментальных животных [102-105], в том числе с клетками гладких мышц мышей в области рестеноза [106], а также эпителием атеросклеротических сосудов [107]. [c.348]

Во многих точках последовательности операторного участка длиной 17 пар оснований можно произвести замену пар оснований, приводящую к уменьшению эффективности связывания репрессора с данным участком. Много мутантных операторов содержат ДНК фагов Xvir, которые способны расти в присутствии Х-репрессора. Первый из выделенных фагов Xvir содержал мутации в 0 , OrI и Or2. Если в дальнейшем использовать этот фаг для отбора мутантов, способных расти при более высоких концентрациях репрессора, чем в данном лизогене, то можно выделить новые мутанты, несущие допол- [c.105]

Выделен также белок дрожжей, способный разрезать полухиазмы и по свойствам напоминающий аналогичные белки фагов Т4 и Т7. [c.98]

С помощью плазмид можно также осуществить Т. протопластов (клетки с удаленной клеточной стенкой), к-рые затем регенерируют в полноценные клетки. ДНК, проникая в них, почти не повреждается и остается двунитевой. Плаз-мидная Т. во многом близка к т.наз. трансфекции, когда бактерии поглощают ДНК фага (вирус бактерий), предварительно выделенную из фаговых частиц. Эта ДНК в бак-терщ1 кодирует образование новых частиц фага, к-рые разрушают затем бактериальную клетку и выходят наружу. [c.626]

Типичный эксперимент по клонированию генов включает следующие этапы. 1. Рестрик-тазное расщепление ДНК, выделенной из организма, который содержит искомый ген. 2. Обработка вектора для клонирования (обычно плазмидного), который может реплицироваться в клетке-хозяине, теми же рестриктазами, которые использовались для расщепления донорной ДНК. 3. Смещивание этих двух образцов ДНК и сшивание фрагментов ДНК-лигазой фага Т4. 4. Трансформация сшитыми молекулами клеток-хозяев. Амплификация рекомбинантной ДНК в трансформированных клетках. [c.78]

На третьем этапе из выросшей на скошенном агаре культуры делают мазки, окрашивают их по Граму. О чистоте ьсультуры судят по однородности роста, формы, размера и окраски микроорганизмов. Для идентификации выделенной чистой культуры, кроме изучения морфологических, тинкториальных и культуральных особенностей микроорганизмов, необходимо определить их ферментативные и антигенные свойства, фаго- и бактериоцино-чувствительность, токсигенность и другие признаки, характеризующие их видовую специфичность. [c.32]

Для внутривидового типирования (с целью определения источника инфекции и путей передачи) проводят пробу с сальмо-неллезными фагами выделенную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри, куда затем наносят по 1 капле типовых фагов, подсушивают и инкубируют при 37 °С 18 — 20 ч. Наличие лизиса культуры ( стерильного пятна в газоне роста) позволяет определить принадлежность выделенного штамма к определенному фаговару. Совпадение фаговаров у штаммов данного вида свидетельствует об общности их происхождения. [c.147]

Исследование выделенной культуры бактерий чумы на фаго-лизабельность производят на МПА обычным методом (см. подразд. 1.2.4). Чумной и псевдотуберкулезный фаг разводят до рабочего титра и испытывают различные разведения. [c.174]

Выделенную чистую культуру листерий идентифицируют по морфологическим, тинкториальным признакам, подвижности, биохимическим свойствам, антигенной структуре и чувствительности к диагностическим листериозным фагам. [c.180]

С помощью трансдукции переносятся способность сбраживать различные углеводы, резистентность к антибиотикам, пе-нициллиназная активность, спорообразование и другие признаки. Процесс трансдукции, по-видимому, играет важную роль в природе, приводя к появлению штаммов бактерий с атипичными свойствами. В пользу этого предположения говорит частое выделение из природных источников умеренных фагов, способных вызывать трансдукцию. [c.109]

Разработаны различные устройства — маркеры для нанесения одновременно многих культур на питательную среду, что значительна ускоряет пересевы при изучении различных свойств выделенных штаммов. Один из таких маркеров запатентован П. Г. Оганесяном (патент СССР № 169755). В его приборе стержни опускают в пробирки со взвесями различных бактерий и затем засевают на питательную среду. Предложены чашки Петри с отсеками для розлива разных сред или посева разных микробов на одну среду. Выпускается аппарат для фаготипирова-ния бактерий, позволяющий наносить несколько фагов на поБсрлность агаровых сред. [c.70]

При необходимости исследования чистой воды, например питьевой, используют метод подращивания. К исследуемой воде добавляют мясо-пептонный бульон с густой взвесью эталонного штамма Е. oli в количестве, в 10 раз превышающем объем воды. Посев инкубируют при 37°С 24 ч. Подтверждают наличие фага во взвеси выделением бляшек по методу Грация. [c.193]

Loehk, S hwegler (1965) предложили использовать метод фильтрации, совмещающий выделение и концентрирование бактериофага, когда в воде содержится мало фаговых частиц и их невозможно уловить методом агаровых слоев по Грацию. Принцип метода заключается в том, что фаг после адсорбции на бактериальной клетке-хозяи-не задерживается вместе с этими клетками на обыкновенном мембранном фильтре № 2. После выращивания Е. соИ вместе с фагом получаются непосредственно на фильтре негативные колонии. Исследуемые пробы воды смещивают со взвесью, эталонной Е. oli, после чего фильтруют через мембранный фильтр и инкубируют при 37°С на адсорбционной подушечке, смоченной бульоном Эндо. [c.193]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология