Расшифровка нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК

РАСШИФРОВКА НУКЛЕОТИДНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ФРАГМЕНТОВ ДНК [c.36]

До самого последнего времени расшифровка нуклеотидных последовательностей ДНК представляла почти неразрешимую проблему не только из-за большого размера молекул, но также из-за отсутствия подходящих нуклеаз. Часто прибегали к транскрибированию участков ДНК с образованием РНК или же каким-либо образом встраивали определенные рибонуклеотиды в ДНК, чтобы использовать имеющиеся рибонуклеазы для частичного расщепления ДНК. Однако за последние несколько лет было открыто большое число высокоспецифичных рестриктаз. Они расщепляют двухцепочечную ДНК в определенных последовательностях, состоящих из четырех-шести оснований, и позволяют расчленить длинные молекулы на фрагменты, поддающиеся анализу. Для определения последовательностей в таких рестрикционных фрагментах бьши разработаны новые, очень мощные методы. Ключевым моментом в этих методах является возможность разделения (с помощью электрофореза) фрагментов ДНК, которые различаются по длине на один нуклеотид, в то время как сами фрагменты содержат до нескольких сотен звеньев это позволяет точно локализовать места химических или ферментативных расщеплений просто измерением длины получающихся фрагментов ДНК. Эти новые методы столь эффективны, что они за короткое время дали возможность получить информацию о последовательностях ДНК, превосходящую по объему все накопленные за десятилетия данные о последовательностях белков и РНК. [c.158]

Расшифровка генетического кода дала молекулярным биологам ключ к переводу белковых текстов в последовательности РНК, ДНК и наоборот, но последнее могло осуществляться только теоретически, поскольку самих текстов ДНК еще не было. Главным препятствием для определения нуклеотидных последовательностей молекул ДНК был их огромный размер и невозможность получения небольших дискретных фрагментов ДНК, пригодных для секвенирования. Значительно [c.13]

Бурному развитию генетической инженерии в немалой степени способствовала разработка высокоэффективных методов расшифровки нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК. В свою очередь одной из причин появления этих методов стала возможность клонировать в составе векторов целевые фрагменты ДНК и нарабатьшать их в индивидуальном состоянии и в требуемых количествах. Расшифровку нуклеотидной последовательности нуклеиновых кислот в отечественной литературе принято называть секвенированием (от ант. sequen ing — определение последовательности). [c.36]

Молекулярное клонирование создало предпосылки для изучения практически любой части любого генома и позволило решить очень серьезные проблемы, связанные со сложностью геномов эукариот и трудностью их генетического анализа. Сейчас мы можем получать в чистом виде нужные нам фрагменты ДНК самых разных геномов в количестве, достаточном для их исчерпывающего химического анализа, причем применение эндонуклеаз рестрикции и методов определения нуклеотидных последовательностей делает эту работу почти рутинной. Локализация перекрывающихся участков клонированных сегментов ДНК уже позволила установить нуклеотидные последовательности областей генома млекопитающих длиной более 150 т.п.п. И хотя геномы эукариот имеют огромные размеры и чрезвычайно сложное строение (табл. III. 1), детальное изучение их молекулярной организации уже не представляется невозможным теперь это в основном вопрос времени и средств. На расшифровку последовательности генома фага X длиной 50 т. п. н. потребовалось около пяти человеко-лет. Благодаря использованию усовершенствованных методов сек-венирования ДНК удалось достичь больших успехов в определении нуклеотидной последовательности хромосомы Е. oli, состоящей из четырех миллионов пар оснований, а сейчас проводится исследование короткой хромосомы человека, которая по длине только в десять раз больше хромосомы Е. соИ. [c.5]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология