Диметилсуберимидат

Построение калибровочных кривых. Калибровочную кривую, необходимую для определения молекулярной массы белков, можно получить путем электрофореза нескольких чистых белков с известной молекулярной массой. Однако далеко не в каждой лаборатории имеется набор таких белков. В этом случае калибровочную кривую можно построить с помощью одного единственного белка, если получить его полимеры, используя Сшивающие агенты, подобные диэтилпирокарбонату [760, 1440, 1441] или диметилсуберимидату [195, 781]. Образованные таким способом полимеры, содержащие 5—10 мономеров, позво- ляют проводить определение молекулярных масс в широком диапазоне (рис. 79). Наличие полимеров высокомолекулярного белка дает возможность построить калибровочную кривую для белков с мол. массой до 600 ООО (рис. 80). [c.222]

Рис. 80, Молекулярные массы белков саркоплазматического ретикулума, обработанных диметилсуберимидатом. Белки мигрировали в смешанном геле, состоящем из 0,5%-ной агарозы и 2%-ного полиакриламида и содержащем 0.1% ДСН [781]. О белки сар-коплазматических пузырьков Л полимеры белка А.

Обработка мембран сшивающими агентами (такими, как, диметилсуберимидат [594, 781], формальдегид, глутаровый альдегид [1227] или диметнладипи-мидат [629]) Приводит к формированию межмолекулярных связей между белками, расположенными в мембранах близко друг от друга. Образующиеся при этом высокомолекулярные соединения можно обнаружить с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с ДСН. На рис. 97 показано, что в процессе обработки мембран формальдегидом некоторые белки (обозначенные как 2-1, 2-2, 2-3 и 4-2) постепенно исчезают и вместо них появляются новые зоны, расположенные в области высокомолекулярных белков. [c.319]

Эта Методика аналогична описанной для белковых антигенов. Ей следует отдать предпочтение в том случае, когда требуется максимальная чувствительность теста. Эритроциты,, фиксированные диметилсуберимидатом, тоже могут быть нагружены, с помощью хлорного хрома [17], однако эта методика обладает незначительными преимуществами. Она может использоваться для количественного определения антигенов в в клеточных. э к страктах, содержащих неионные детергенты, но если избыток детергента удаляется при до бавлении смолы, То можно Использовать и обычные нефиксированные нагруженные антителами клетки [25]. [c.263]

Для получения этого конъюгата связывают аминогексил-FAD с IgG человека, используя в качестве сшивающего агента диметилсуберимидат. Как правило, сначала проводят реакцию между аминогексил-FAD и диметилсуберимидатом в стехио-метрическом соотношении (буфер pH 8—9, 5—10 мин при комнатной температуре), а затем добавляют раствор IgG человека, pH 8—9. Применяемый буфер не должен содержать аминогрупп. Раствор непрерывно перемешивают при комнатной температуре 1—2 ч. После хроматографического обессоливания и диализа против фосфатно-солевого раствора конъюгат [c.71]

При исследовании растворимой митохондриальной Н+АТФазы из сердца быка (фактор Fi) как в сопряженной регенерирующей системе, содержащей пируваткиназу с ее субстратом фосфоенолпируватом + лактатдегидрогеназа (рис. 2 А, В), так и в системе с рН-индикатором нейтральный красный (рис. 2 Б, Г) (уд. активность соответственно 50 ед./мг и 20 ед./мг) было установлено, что коэффициент седиментации активного фермента (12,4+0.4 5) с точностью до ошибки измерений совпадает с данными, которые получаются при обычной скоростной седиментации в отсутствие субстрата Mg-АТФ. По-видимому, этот фермент не изменяет своей общей конфигурации при гидролизе АТФ. В ходе этой работы было обнаружено, что гидростатическое давление в ячейке ультрацентрифуги инактивирует F , причем тем скорее, чем выше скорость вращения ротора (измерения проводили при 48000, 60 000 и 68 000 об/мин). Инактивация приводила к искривлению графиков Inr(t), из наклона которых вычисляется s, и это вынудило искать пути к стабилизации фермента. Измерения удалось произвести в двух вариантах. 1. Фактор Fi был обработан бифункциональным сшивающим агентом — диметилсуберимидатом — в условиях, когда в среднем на молекулу фермента приходилась одна сшивка при этом сохранялось около 40% активности и исчезала чувствительность к давлению (по крайней мере до 300 атм). [c.186]

Протеазы часто обладают также эстеразной активностью. При ацетилировании в карбоксинептидазе А всего двух тирозиновых остатков наблюдается шестикратное усиление эстеразного действия, протеолитическая же активность фактически утрачивается. Панкреатические рибонуклеазы (РИКазы) подвергали многим химическим модификациям. Интересна димеризация фермента с помощью сшивающего агента диметилсуберимидата. Нативный фермент представляет собой мономер с низкой активностью по отношению к двухцепочечной РНК, однако после сшивки гидролитическое действие фермента на двухцепочечную РНК усиливается в 78 - 440 раз. При сшивке этого фермента в присутствии ингибитора индолпропионовой кислоты у него появляется также эстеразная активность, что предположительно связано с осуществлением сшивки при необычной конформации фермента. [c.109]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология