Фосфатно-солевой буфер

Фосфатно-солевой буфер (ФСБ) [c.90]

Фосфатно-солевой буфер (ФСБ) (разд. 20.4.17) 10 мл [c.83]

Фосфатно-солевой буфер (ФСБ) Дюльбекко [c.223]

ФСБ фосфатный солевой буфер [c.242]

Фосфатно-солевой буфер (ФСБ) Дюльбекко сходен с СБСР Хэнкса, но в ФСБ отсутствует бикарбонат, а содержание Na2HP04 и КН2РО4 повышено для обеспечения большей буферной емкости. ФСБ не используется в качестве основы для культуральных сред, но часто применяется для промывки клеточного монослоя. ФСБ составляется из трех частей (приложение 1 табл. 2). Раствор А ФСБ (ФСБ-А) лишен ионов Са + и Mg +, которые добавляются к ФСБ-А в виде отдельных растворов (ФСБ-Б и ФСБ-В) для получения полного ФСБ. [c.77]

Флуоресцирующую антисыворотку ( конъюгат ) и флуоресцирующую нормальную сыворогку растворяют в воде. Готовят несколько порций флуоресцирующей антисыворотки, разбавляя ее каждый раз вдвое (например, 1 5 1 10 1 20 1 40 1 80) в фосфатном буфере с добавлением Na l [фосфатно-солевой буфер (ФСБ), см. разд. 20.4.17]. При каждом разведении антисыворотки с помощью метода окрашивания, описанного ниже, а также с помощью подходящего флуоресцентного (люминесцентного) микроскопа (разд. 1.4) определяют степень флуоресценции бактериальных клеток по шкале О, 1-Ь, 2 +, З-Ь, 4+ (максимум). Рабочее разведение антисыворотки составляет /2 максимального разведения, которое дает степень флуоресценции 4 +. Например, если максимальная степень флуоресценции 4-Ь достигается при разведении сыворотки 1 20, то рабочее разведение равно 1 10. Эквивалентное разведение флуоресцирующей нормальной сыворотки пе должно давать флуоресценции. [c.67]

Как правило, в качестве раствора для разведения применяют фосфатно-солевой буфер с желатиной. При- [c.231]

Фосфатный солевой буфер в модификации Дюльбекко, раствор А (ФСБА без Са + и Mg +) [c.316]

Выделение иммуностимулирующих средств ("суммарный препарат") из ткани зобной железы крупного рогатого скота (ФСБ — фосфатно-солевой буфер) [c.593]

Для приготовления и разбавления всех растворов используют фосфатно-солевой буфер [ФСБ 0,02 М фосфат, 0,15 М хлорид натрия, 17о полиэтиленгликоля (PEG —6000, Sigma), pH 7,4], прокипяченный с целью защиты белков от разрушения бактериями. Все рабочие растворы готовят в день использования. [c.164]

Иммуноанализ проводят следующим образом. Полистирольные пробирки (80X11 мм) покрываются антителами при обработке 1 мл раствора антител. Растворы антител разбавляют ОД М N a-карбонатного буфера (pH 9,8) или фосфатным (солевым) буфером. Пробирки с этими растворами оставляют на 3 ч при 37 °С для хранения раствор оставляют в пробирках на холоду. Перед определением необходимое число пробирок промывают 0,9%-ным хлоридом натрия, содержащим 0,05% твина 20. В каждую пробирку помещают 0,5 мл одного из следующих растворов 1) стандартный раствор иммуноглобулина G, 2) неизвестный образец, 3) буферный раствор. После этого добавляют 0,1 мл разбавленного конъюгата щелочной фосфатазы и иммуноглобулина G (приготовленного с помощью сщивапия глутаровым альдегидом). Для разбавления используют фосфатный (солевой) буферный раствор, содержащий 1% сывороточного альбумина человека и 0,02% азида натрия. Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) на роторной мешалке так, чтобы поверхность, покрытая антителами, покрывалась 0,6 мл раствора, находящегося в каждой пробирке. Затем пробирки промывают три раза раствором Na l-твин. Количество фермента, присоединенного к иммуноглобулину G, связанному стенками пробирок, покрытых антителами, определяют, добавляя 1 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера (pH 9,8), содержащего 1 мг/мл п-нитрофенилфосфата и 1 ммоль/л хлорида. магния. Через 30 мин реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М ХаОН. Измеряют оптическую плотность при 400 нм и строят стандартный график зави-си.мости ферментативной активности (изменение оптической плотности в единицу времени) индивидуальных образцов от содержания в них иммуноглобулина G. [c.382]

Монослойная культура может быть перенесена во второй культуральный сосуд после диссоциации клеток монослоя трипсином и разведения. В случае субкультивирования суспензионных культур достаточно только разведения. Диссоциация клеток монослойной культуры достигается лучше всего промыванием монослоя фосфатным солевым буфером (ФСБ) или ФСБ с 1мМ этилендиаминтетраацетатом (ЭДТА) и последующей инкубацией с холодным раствором трипсина (0,25%-ный неоч11-щенный или 0,01—0,05%-ный очищенный) в течение 30 с. После этого трипсин удаляется, клетки инкубируют дополнительно в течение 15 мин. Затем клетки суспендируют в среде, определяют их количество и рассевают на новые флаконы. [c.23]

Ресуспендируйте и доведите объем до 22 мл фосфатно-солевым буфером (PBS) pH 7,2, содержащим 0,5% бычьего сывороточного альбумина. [c.20]

Полуколичественная оценка /50 на ранних стадиях культивирования гибридом может быть осуществлена методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. В лунки платы для миКро-титрования, покрытые антигеном, использованным для получения моноклональных антител, помещают по 25 мкл растворенного в фосфатно-солевом буфере с тритоном перекрестно реагирующего антитела, концентрацию которого варьируют от 1 10 до 1 10 М. Затем в каждую лунку добавляют 25 мкл среды культивирования гибридом, разведенной в 2 раза буфером, содержащей моноклональные антитела. Аналогичным образом параллельно титруют исходный антиген, к которому были получены моноклональные антитела. В качестве контроля титрование сходного и перекрестно реагирующего антигенов осуществляют в присутствии 25 мкл разведенной в 2 раза среды культивирования гибридом, не содержащей моноклональных антител. Контрольные и опытные образцы инкубируют 1 ч при 37°С, а затем обрабатывают планшеты по методике для проведения непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. [c.173]

Полученный диализат экстракта лейкоцитов растворяют в стерильном фосфатно-солевом буфере с pH 7,4 (0,01 М фосфатный буфер -1-8,5 г/л ЫаСЬ) в соотношении 1 20 и асептично подают на хроматографическую колонку, заполненную сефадексом С-25, ранее законсервированную 0,2% натрия азидом и промытую тем же ФСБ, разведенным в 20 раз. [c.594]

В 0,3 мл фосфатно-солевого буфера, содержащего 0,05% Тритона Х-10 и 3 мМ ЭГТА, 50 мкл разбавленной (1 50) иммунной сыворотки кролика инкубировали в течение 30 мин при 30° с возрастающими количествами (1—10 мкг) немеченного кальмодулина. Только после этого вносили меченный I каль-модулин ( 13ООО имп./мин), инкубировали смесь в течение 30 мин при той же температуре, а затем для достижения полного конкурентного равновесия ее выдерживали 24 ч на холоду. Добавляли 10 мкл неразбавленной антисыворотки козы против IgG кролика, инкубировали еще 14 ч, осадок собирали центрифугированием (20000 g 20 мин) и просчитывали в у-счетчике. В точном соответствии с описанным построением калибровочной кривой осуществляли определение неизвестной концентрации кальмодулина в экстракте (до 60 мкг белка в препарате). [c.283]

ФРСТ —фактор роста, синтезируемый тромбоцитами ФРФ — фактор роста фибробластов ФРЭ — фактор роста эпидермиса ФСБ — фосфатно-солевой буфер ФЭУ — фотоэлектронный умножитель ХМ —хориоаллантоисная мембрана ЦПЭ — цитопатогенный эффект ЭДТА — этилендиаминтетраацетат [c.9]

Рис. 11-4. Разность изменений интенсивности флуоресценции,, возникающей под действием свободной пероксидазы и пероксидазы в составе конъюгата с антителами. Состав реакционной смеси IgG (25 мкг/мл), активированный ЛДАДХФ (10- М) и пероксид водорода 10 М) в фосфатно-солевом буфере.

Рис. 11-5. Зависимость сигнала флуоресценции от концентрации IgG в образцах сыворотки (кривая связывания). В поток, содержащий конъюгат [ПХ — антитела против IgG человека] в фосфатно-солевом буфере (разведение конъюгата 1 250), вводили 25 мкл образца, разбавленного в 700 раз. Через 30 с образец сливался с потоком, содержащим активированный ЛДАДХФ (10 М) и пероксид водорода (10 М) в фосфатно-солевом буфере. Флуоресценцию измеряли в проточной ячейке еще через 30 с.

Получение и характеристика ИФК. Преципитат ИФК получали инкубацией 1,0 мл антисыворотки кролика или морской свинки с серологически эквивалентным количеством ЩФ (типа Р5521 или Р6674) 1 ч при 37 С и затем в течение ночи при 4 С. После центрифугирования осадок промывали дважды фосфатно-солевым буфером (ФСБ) или боратно-солевым буфе- [c.214]

Часто для преципитации иммунных комплексов используют описанную в начале этой главы систему двух антител. Например, Форстнер и соавторы определяли этим способом содержание муцина в препаратах слизистой оболочки кишечника крысы. Антисыворотку кролика против чистого муцина концентрировали осаждением сульфатом аммония (с последующим диализом против фосфатно-солевого буфера) до 20 мг/мл. Метку тритием вводили, как и в предыдущем случае, по методу Рандерата в сахаридную часть муцина, который является гликопротеидом. [c.281]

Романи и соавторы для проведения радиоиммунных определений различных белков хроматина, в частности HMG-1, в качестве твердофазного носителя использовали гибкие платы для микротитрования на 96 лунок, изготовленные из полихлорвинила. В лунки вносили по 0,1 мл белкового раствора в обычном фосфатно-солевом буфере, выдерживали 4 ч при комнатной температуре, а затем ночь на холоду (концентрации белка указаны ниже). Не сорбировавшиеся на пластик белки смывали шестью порциями по 0,3 мл того же раствора. Для блокирования центров сорбции на пластике, оставшихся незанятыми, лунки заполняли 1%-ным раствором БСА в фосфатно-солевом буфере, инкубировали и отмывали, как описано выше. Затем в лунки вносили по 0,1 мл иммунной антисыворотки кролика, разбавленной в отношении 1 200 тем же раствором БСА, инкубировали 4 ч при комнатной температуре с покачиванием и промывали 8 раз буфером. Наконец, для обнаружения связавшихся антител добавляли по 0,1 мл раствора [ 1]-белка А (10—50 тыс. имп./мин), инкубировали еще 4 ч, трижды тщательно промывали раствором БСА, 8 раз — буфером и 10 раз — водой. После этого лунки вырезали из платы и поочередно просчитывали в у-счетчике. [c.290]

Даже при кратковременном культивировании одним из главных условий сохранения жизнеспособности клеток является поддержание в определенных пределах концентрации водородных ионов (pH) и осмотического давления. Эту функцию выполняет лежащая в основе питательной среды смесь солей, дополненная углеводом в качестве источника энергии — сбалансированный солевой раствор. В табл. 1 приведен состав двух таких растворов — Эрла [1] и Хэнкса [2], которые входят в состав многих сред. Растворы Эрла и Хэнкса, а также фосфатно-солевой буфер Дульбекко и Фогта широко используются и самостоятельно, в частности, для орошения и промывания клеток, для приготовления различных растворов, необходимых при культивировании клеток трипсина, ЭДТА, некоторых веществ, вводимых в среду, и т. д. [c.45]

Клетки (5 10 —10 10 ) после промывания в фосфатно-солевом буфере суспензируются в 0.3—0.5 мл 0.01 М Трис-НС1, pH 7.5. После трехкратной процедуры замораживания в жидком азоте с последующим оттаиванием и центрифугирования в пробу добавляется сахароза (хч) до концентрации 10 %. Состав геля 5 %-ный (для ЛДГ) или 7 %-ный (для Г6ФДГ) акриламид ( Serva ), [c.102]

Если нет специальных требований, суспензию для окрашивания и анализа приготавливают на сбалансированном буферном солевом растворе (например, на фосфатно-солевом буфере Дальбекко без кальция и магния, на растворе версена или растворе Хэнкса). При изучении внутриклеточных компонентов используют фиксированные клетки или проводят обработку клеток детергентом, чаще всего 0.05—0.2 %-ным (в зависимости от типа клеток) раствором Тритона Х-100. В качестве фиксатора в большинстве случаев используют 70—80 %-ный этанол. Фиксируют, приливая к суспензии охлажденный 95 %-ный этанол. Перед окрашиванием клетки отмывают от фиксатора. В ряде случаев (например, при проведении цитометрии ДНК, РНК, белка) допускается отмытые от среды [c.142]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология