Геномы аденовирусов

Рнс. 138. Схема репликации генома аденовируса. [c.268]

Рис. 159. Схема транскрипции генома аденовируса

Эту проблему решали разными путями. Например, сконструировали пакующую клеточную линию, содержащую Е1-область и ряд аденовирусных генов, которые не входят в состав трансдуцирующей ДНК и не попадают в клетки-мишени. Затем удалось добиться того, чтобы ни один из аденовирусных генов не включался в трансдуцирующую ДНК. Для этого линеаризовали плазмиду Е. соН (28 т. п. н.), которая обеспечивает экспрессию одного или большего числа терапевтических генов и не содержит аденовирусных генов, и пришили к ее концам фрагменты ДНК (по 4 т. п. п.), содержащие точку начала репликации аденовирусной ДНК, последовательность, ответственную за ее упаковку, и сигнал терминации. Длина продукта лигирования (36 т. п. н.) соответствует длине полноразмерного генома аденовируса. Затем полученным продуктом и аденовирусным гено- [c.494]

Рис. 21.7. Аденовирусный вектор. В клетку-хозяина, несущую интегрированный в геномную ДНК функциональный ген Е1 аденовируса, вводят встроенную в сегмент аденовирусного генома (0-17 единицы карты) плазмиду с терапевтическим геном (ТГ) и участок геномной ДНК аденовируса (9-100 единицы карты). Длина генома аденовируса равна 100 единицам. В результате рекомбинации (штриховая линия) между перекрывающимися участками плазмиды и ДНК аденовируса образуется молекула ДНК, эквивалентная полноразмерному вирусному геному. Рекомбинантная ДНК, содержащая терапевтический ген, упаковывается и высвобождается из клетки после лизиса. Образующиеся вирусные частицы дефектны по репликации. Плазмидная ДНК, входящая в состав конечной генетической конструкции, не влияет на упаковку рекомбинантной ДНК (не показано).

Открытие прерывистой структуры гена [46—49]. Прерывистая структура эукариотических генов и явлений сплайсинга были открыты при детальном изучении структуры генома аденовируса 2, одного из вирусов, содержащих ДНК. [c.35]

Полиаденилирование и терминация транскрипции. Транскрипция многих генов белков эукариот заканчивается далеко за сайтом, в котором происходит расщепление РНК с образованием З -конца зрелой РНК. Терминация осуществляется во множественных сайтах последовательности ДНК протяженностью в сотни, а иногда и тысячи пар нуклеотидов. Например, находящаяся за сайтом полиаденилирования область, в которой заканчивается транскрипция гена -глобина позвоночных, имеет длину более чем 1 т. п. н. Аналогичным образом, транскрипция первого из двух тандемно расположенных генов а-глобина млекопитающих заканчивается в разделяющей эти два гена промежуточной области размером почти 2 т.п.н. Еще более ярким примером служит транскрипция поздней области генома аденовирусов. В этом случае непрерывная транскрипция области, содержащей пять участков полиаденилирования, заканчивается только в конце вирусной ДНК. [c.43]

Рис. 14.15. Транскрипционная карта генома аденовирусов Ad2 и Ad5.

Выделение клонов вируса Ad5 Рис. 14.20. Рекомбинационное клонирование полноразмерного генома аденовируса в клетках Е. соН [c.379]

Репликация линейного дуплексного генома аденовируса человека. Цепи синтезируются последовательно. Копирование матричной цепи начинается каждый раз с З -конца. [c.72]

Для получения аденовирусного вектора провели котрансфекцию клеточной линии, синтезирующей продукты аденовирусного гена El, двумя участками генома аденовируса (рис. 21.7). Один из них может существовать в виде плазмиды в Е. соИ и содержит вместо El-области терапевтический ген, фланкируемый нуклеотидными последовательностями аденовируса, а второй представляет собой молекулу ДНК аденовируса, которая лишена 5 -концевого участка, включающего Е1-область, и имеет перекрывающийся участок с несущей терапевтический ген плазмидой. Рекомбинация между двумя трансфицирующими фрагментами ДНК в области их перекрывания приводит к восстановлению полноразмерного аденовирусного гена, в котором вместо El-области находится терапевтический ген. Продукты гена El, поставляемые клеткой-хозяином, инициируют образование вирусных частиц, высвобождающихся из клетки в результате лизиса. Клонирующая емкость аденовирусного вектора [c.494]

Дальнейшее изучение транскрипции и сплайсинга поздних генов аденовируса позволило уточнить детали этого процесса. Транскрипция всегда начинается с первого экзона и кончается после прохождения РНК-полимеразы почти вдоль всего генома аденовирусй. Затем в про-мРНК [c.36]

Рис. 4. Строение различных мРНК, синтезируемых на поздней цени> генома аденовируса 2

Аденовирусы, или их ДНК, или фрагменты ДНК ранней области 1 левого конца генома аденовируса могут трансформировать культивируемые клетки. Опухоли у сирийских хомячков могут вызывать только определенные аденовирусы, например аденовирус человека типа 12 (Tooze, 1973). Интересно, что объект исследования большинства работ по молекулярной биологии аденовирусов — 2 и 5 типы аденовируса человека, которые нетуморогенны, но могут трансформировать культивируемые клетки. Хотя с точки зрения онкогенеза это может вносить различия в окончательный анализ генетики [c.188]

При работе с трансгенными мышами, содержащими ДНК аденовируса SA7, нами был выявлен неожиданный феномен. Анализ различных органов двух разных линий мышей F -Fj поколений показал, что трансген специфически э.пимипировался из сердца и скелетной мускулатуры (Gazaryan et al., 1984 Тарантул и др., 1986а). Интересно, что в повторной, независимой серии экспериментов по инъекции ДНК аденовируса SA7 в зиготы мышей факт отсутствия трансгена в сердце и мышцах первых двух поколений мышей полностью подтвердился. Это свидетельствовало о том, что скорее всего наблюдаемые изменения были обусловлены не столько положением трансгена в геноме, сколько самой его природой. Было показано также преимущественное встраивание в хозяйский геном последовательностей левого конца генома аденовируса, где расположен онкоген (Кузнецова и др., 1989). [c.195]

Относительно небольшой размер, хорошая изученность организации и фунвсционирования генома аденовирусов, наличие ограниченного числа участков гидролиза различными рестриктазами на вирусной ДНК и высокая гомология ДНК Ad2 и Ad5 позволили успешно осуществить первую серию экспериментов по встройке in vitro в геном аденовирусов чужеродных фрагментов ДНК и отбору гибридных вирусов. Эти работы заложили основу генно-инженерной методологии создания аденовирусов, экспрессирующих чужеродные гены. [c.375]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология