Сайты полиаденилирования

Рис. 20-72. Схема получения трансгенного растения. Интересующий нас ген кодирует бактериальный белок, токсичный для насекомых. Чтобы ген экспрессировался в растительной клетке, его 5 -конец соединяют с растительным промотором, а З -конец с сайтом полиаденилирования. Модифицированный ген токсина встраивают в плазмиду, содержащую кроме него и маркерный ген (например, ген устойчивости к канамицину), по которому можно проводить селекцию. Плазмида сконструирована таким образом, чтобы и ген токсина, и маркерный ген были окружены особыми повторами, размером 25 нуклеотидных пар, которые в норме окружают Т-ДНК. Плазмиду из клеток Е. oli переносят в Agroba terium, где на отдельной плазмиде присутствуют гены вирулентности. Если такую Agroba terium культивировать вместе с листовыми дисками, продукты генов вирулентности узнают повторы в Т-ДНК и перенесут ДНК, содержащую маркер и гены гоксина в хромосому растения. Все клетки листового диска затем заставляют делиться, помещая экспланты на соответствующую питательную среду, однако способность делиться и образовывать каллус сохранят лишь те клетки, которые содержат ген селективного маркера. Из каллуса затем получают трансгенные растения, которые экспрессируют

Лишь примерно через 1 т. п. н. располагается участок, в котором связывание меченой РНК на единицу длины ДНК падает в 3 раза, а следующие за ним отрезки вообще не гибридизуются с РНК. Более подробный анализ области с пониженным связыванием РНК показывает, что синтез РНК обрывается не в одной определенной точке, но затухает в пределах отрезка длиной около 1 т. п. и. Для разных генов длина этой зоны терминации и ее расстояние от сайта полиаденилирования сильно варьирует, но принципиальная схема во всех случаях остается одной и той же. [c.77]

Эксперименты с разными искусственными конструкциями показывают, что для терминации транскрипции нужно существование в геноме зоны терминации и обязательно расположенного перед нею сайта полиаденилирования. Если последний убрать, то транскрипция идет за зону терминации. В то же время зону терминации можно удалять и приближать к сайту полиаденилирования, и терминация все равно будет происходить в ее пределах. [c.77]

Каждая вирусная частица содержит две копии одноцепочечного РНК-генома, а после проникновения в пермиссивную клетку этот геном переводится в линейную двухнитевую ДНК под влиянием вирусного фермента — обратной транскриптазы. Чтобы интегрироваться в клеточный геном клетки-мишени, линейная ДНК проникает в ядро, где приобретает кольцевидную форму. Интегрированная линейная ДНК-копия ретровирусного генома (провирус) имеет на обоих концах длинные нуклеотидные повторы — LTR (от англ. long termine repeats). 5 LTR несет промотор, с которого начинается транскрипция генов интегрированного провируса 3 LTR-сайт полиаденилирования, где происходит терминация РНК-транскриптов (см. рис. 23). [c.584]

Рис. 1.10. Альтернативный сплайсинг при экспрессии гена кальцитонина крысы, с — кодирующий экзон —интрон > — инициирующий кодон, А — терминирующий кодон рА — терминатор транскрипции и сайт полиаденилирования

Мутации в сайте полиаденилирования РНК. У негров часто обнаруживается одиночная мутационная замена ААТААА -> А АС ААА в З -фланкирующей области гена Hb , приводящая к -талассемии таким образом, мутации в З -некодирующей области также могут влиять на эффективность транскрип ции. Относительно слабое проявление -та лассемий в этой расовой группе объясняет ся явным преобладанием мутаций, затраги вающих ТАТА-последовательность (см выше) и сайт полиаденилирования (табл 4.17). [c.90]

Внешней стрелкой обозначено направление транскрипции с промотора Рр рА — сайт полиаденилирования [c.367]

Значимость сайтов полиаденилирования при экспрессии генов выявляется при молекулярном анализе природы мутаций. Оказалось, что один из случаев нарушения синтеза р-глобина человека обусловлен мутацией, которая привела к образованию лишнего сайта полиаденилирования и нарушила созревание нормальной мРНК. [c.181]

Рис. 6.7. Челночный прокариотически-эукариотический вектор pSEM atR. Если смотреть против часовой стрелки, этот вектор включает ген, кодирующий устойчивость к ампициллину, участок начала репликации pBR322, промотор области ранних генов SV-40, содержащий ТАТА-бокс Голдберга — Хогнесса, промоторную область гена AT (хлорамфеникол-ацетилтрансферазы), содержащую сайт начала транскрипции (этот ген кодирует устойчивость к антибиотику хлорамфениколу), интрон малого t-антигена и сайт полиаденилирования области ранних генов вируса SV-40.

Внедрение мобильного элемента внутрь гена или около гена вызывает разные эффекты. Во многих случаях происходит инактивация гена, напри-мер нарушается образование нормальных транскриптов в результате терминации вблизи сайтов полиаденилирования в одних ДКП или, наоборот, инициации в других ДКП (рис. П9, б). При интеграции в район промотора на 5 -фланге гена. мобильный элемент может резко активировать экспрессию гена, обеспечивая транскрипцию с собственного промотора. Однако активирующее влияние элемента может наблюдаться, если направления транскрипции в ДКП и в гене противоположны. Возможно, активация транскрипции и экспрессии гена осуществляется в таком случае благодаря воздействию энхансеров, привно-СИ.МЫХ элементо-м (рис. U9, в). Действительно, в составе ДКП нли тела ряда мобильных элементов находятся нуклеотидные последовательности, ведущие себя как энхансеры, т. е. действующие независимо от ориентации по направлению к транскрипции гена (см. гл. X). [c.230]

Экспрессионные векторы. Их используют для анализа конкретных последовательностей генов и их белковых продуктов, а также наработки конкретного белка. Существует огромное количество экспрессионных систем, особенно для прокариотических организмов. Есть также векторы для экспрессии генов в клетках дрожжей, растений и млекопитающих. Экспрессионные векторы для эукариотических организмов всегда содержат так называемую экспрессионную кассету, состоящую из промотора, способного работать в данном организме и сайта полиаденилирования. [c.36]

Рис. ]. 11. Схема транс-сплайсинга (его механизм HensBe TeHV i — интрон > — инициирующим кодон i терминирующий кодон рА - терминатор транскрипции и сайт полиаденилирования

Общий мРНК-предшественник содержит два потенциальных сайта полиаденилирования (см. гл. 39) один — между экзонами С 4 и М и второй — со стороны З -конца от экзона М. В зависимости от того, какой из двух возможных сайтов полиаденилирования подвергается эндонуклеазной атаке в ходе подготовки к полиаденилированию, образуется тот или иной из двух типов 1-мРНК (ц - или ц -) тяжелых цепей с различными З -концами. Возможно, что именно выбор сайта полиаденилирования и определяет один из двух альтернативных вариантов сплайсинга экзонов первичного транскрипта. [c.125]

Сегмент 7 РНК вируса гриппа В/Ьее/40 содержит 1191 нуклеотид. После 5 -некодирующего участка из 24 нуклеотидов следует открытая рамка считывания, простирающаяся от первого кодона возможной инициации белкового синтеза в нуклеотидах 25—27 до терминального кодона в нуклеотидах 769—771. Этот участок может кодировать белок, состоящий из 248 аминокислот, что соответствует по размеру оцененной молекулярной массе белка М. Начиная с нуклеотида 513, следует второй открытый участок — рамка считывания -Ь2, простирающаяся до терминирующего кодона в нуклеотидах 1095—1097. В нуклеотидах 1171—1175 располагается тракт из пяти адениновых остатков. Этот участок, возможно, представляет сайт полиаденилирования для вирусных мРНК, как и в случае вируса гриппа А [86]. Полиаденилирование в этом сайте должно давать М1 мРНК из примерно 1175 вирусных нуклеотидов. [c.279]

Границы единицы траскрипции. Первичный транскрипт и его процессинг [64]. Те участки ДНК, по которым происходит кэпирование и которые соответствуют таким образом точкам начала транскрипции, называют кэп-сайтами , или сайтами кэпирования . Места, по которым происходит полиаденилирование, обозначают как сайты полиаденилирования . Они соответствуют З -концам зрелых мРНК. [c.60]

Рис 2.9. Гипотетичесчий механизм образования ретрогенов, р - промотор рА — терминатор транскрипции и сайт полиаденилирования 1 — интрон > - инициирующий кодон [c.56]

Если сайт кэпирования является местом, с которого начинается транскрипция, то сайт полиаденилирования не совпадает с точкой окончания транскрипции. РНК-полимераза II прочитывает ДНК за сайтом полиаденилирования, иногда проходя еще дистанцию длиной в несколько сот или даже тысяч нуклеотидных пар. Вскоре, однако, РНК разрезается, и по образовавшемуся новому З -концу происходит полиаденилирование. Остальная часть первичного транскрипта (за сайтом полиаденилирования) подвергается быстрому разрушению в ядре. [c.60]

Таким образом, первичный транскрипт, или про-мРНК, подвергается в клеточном ядре целому ряду превращений. Происходит кэпирование его 5 -конца, созревание З -конца, заключающееся в расщеплении по сайту полиаденилирования, и затем само полиаденилирование. Наконец, происходит сплайсинг и удаление интронов. Эти процессы кэпирование, созревание З -конца, полиаденилирование и сплайсинг — в совокупности обозначаются как процессинг про-мРНК , или созревание мРНК . [c.60]

Это было впервые показано Дж. Дарнеллом (США), который выделил клеточную РНК после очень короткой инкубации клеток с меченым предшественником (порядка 1 мин) и затем исследовал гибридизацию этой РНК с фрагментами клонированной аденовирусной ДНК или ДНК глобинового гена (в зависимости от типа изучаемых клеток). Все фрагменты гена связывают метку пропорционально своей молекулярной массе, что указывает на более или менее равномерное движение РНК-полимеразы вдоль матрицы. Оказалось, однако, что и участок, расположенный сразу за местом, соответствующим З -концу мРНК, т. е. за сайтом полиаденилирования, тоже связывает вновь синтезированную РНК с той же эффективностью. Следовательно, он, так же как и участок собственно гена, [c.76]

В трансформированных растительных клетках Т-ДНК активно транскрибируется. мРНК Т-ДНК в растительных клетках устроены аналогично эукариотическим мРНК, т. е. на их 5 -концах находится 7-метилгуанозин, а на З -концах — сайты полиаденилирования ААУАА и полиадениловые цепочки. Эукариотической особенностью транскрипционного механизма Т-ДНК является и отсутствие в ней оперонов, в то время как в других частях Ti-плазмид опероны есть. Это пока единственный обнаруженный в природных условиях пример функционирования прокариотической нуклеотидной последовательности в эукариотических организмах. Следует полагать, что функциональная часть Т-ДНК за [c.93]

Смотреть страницы где упоминается термин Сайты полиаденилирования: [c.181] [c.180] [c.181] [c.197] [c.392] [c.402] [c.335] [c.214] [c.217] [c.202] [c.204] [c.277] [c.89] [c.125] [c.168] [c.89] [c.125] [c.125] [c.123] [c.61] [c.78] [c.82] [c.134] [c.139] [c.177] [c.168] [c.29] [c.53]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология