Белки негомогенное связывание

Вычисления, проведенные выше, а также данные табл. 4.7 основаны на двух допущениях, которые могут не подтвердиться. Первое касается возможной гетерогенности распределения присоединенных лигандов в ограниченных участках адсорбента величина т< может быть намного выше, поэтому даже при низких значениях констант связывания (например, 10 М) с адсорбентом может связаться гораздо больше белка, чем можно было бы предположить. В одном из недавних исследований для анализа распределения лигандов использовали модельные спин-меченые лиганды [86]. Оказалось, что негомогенность в их распределении незначительна. Однако было обнаружено (путем подсчета на основе степени модификации), что при близком расположении лигандов друг от друга белок среднего размера может связываться с ними одновременно в нескольких участках (если белок имеет более одного центра связывания). [c.155]

Последнее осложнение, нарушающее теоретические предсказания, связано с негомогенностью адсорбента несомненно, это основной фактор, от которого зависят величины Кру но это означает также, что концентрация центров связывания mt [уравнение (4.2)] является усредненной величиной, так как ее подсчитывают исходя из концентрации связанного белка. В некоторых адсорбентах большой объем носителя очень слабо модифицирован, так что число эффективных центров связывания здесь незначительно, но там, где произошла модификация адсорбента, это число настолько велико, что практически весь связанный белок остается в этой относительно небольшой ча-СТ1И общего объема адсорбента. Следовательно, истинная эффективная величина mt в уравнении (4.5) может быть намного выше, чем среднее ее значение, подсчитанное исходя из связывания белка на 1 см адсорбента. Это приведет к повышению величины а по сравнению с тем, что наблюдается, когда центры связывания распределены в матрице равномерно. Далее этот вопрос будет обсуждаться при описании аффинной адсорбции (разд. 4.5). [c.100]

В этой связи необходимо отметить следующее. Возможность выявления случая реакционной способности половины связывающих центров зависит от того, известна ли концентрация центров связывания на ферменте, что в свою очередь зависит от точности определения концентрации белка и чистоты препарата. Негомогенный препарат, содержащий молекулы, обладающие разным сродством к лиганду, дает кривую связывания такого же вида, как и в случае отрицательной кооперативности, что может привести к ошибочному выводу о наличии взаимодействия между субъединицами. Еще одна ситуация, которую можно ошибочно интерпретировать как случай реакционной способности половины связывающих центров, имеет место в реакциях, катализируемых лактатдегидрогеназой, и обсуждается в гл. 12 из-за неблагоприятной константы равновесия между E.NAD+.La и E.NADH.Pyr не происходит полного накопления ферментсодержащего промежуточного соединения E.NADH.Pyr [схема (12.9)]. [c.261]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология