ДНК-содержащие бактериофаги

Вирусы, поражающие бактерии, называются бактериофагами (буквально — пожиратели бактерий) или просто фагами. Они имеют округлую или многогранную головку и отросток в виде белковой трубочки-. Головка окружена белковым чехлом и содержит ДНК или РНК. Прикрепляясь к клеточной стенке, бактериофаг-как бы просверливает ее, и ДНК фага через отросток поступает в клетку. Фаговая ДНК так перестраивает механизм обменных процессов бактерии, что в ней начинают синтезироваться частицы фага. Через определенное время все содержимое клетки превращается в зрелые фаговые частицы, оболочка бактерии растворяется и фаги выходят наружу. [c.48]

Проникновение фага в клетку осуществляется в несколько этапов (рис. 66). Вначале бактериофаг адсорбируется на клетке-хозяине, прикрепляясь к ее стенке концом хвоста . Затем фаг внедряется в клетку, причем в нее проникает лишь ДНК фага, а белковая оболочка остается снаружи. С помощью электронного микроскопа удавалось увидеть тени фага — пустые белковые оболочки, оставшиеся после внедрения ДНК фага в бактерию. При размножении фага в клетке в ней происходят существенные изменения она перестает делиться и все ее содержимое [c.473]

Содержимое опытного сосуда прозрачно, в контроле — помутнение питательной среды. Полученные данные указывают на содержание в исследуемом фильтрате бактериофага высокой активности. [c.76]

Если бы к такому заключению пришли только на основании наличия в митохондриях всех дыхательных ферментов, то оно было бы, несомненно, убедительным, но не безоговорочным. Однако благодаря успехам техники фракционирования удалось добиться гораздо большего. Можно показать, и притом количественно, что в митохондриях дыхание продолжается и in vitro при этом потребляются О2 и фосфат и образуются СО2 и АТФ. Для этого нужно только снабжать митохондрии достаточным количеством субстрата и фосфата, а также некоторыми другими веществами, так называемыми кофакторами (например, АДФ ). Кроме того, следует учесть еще одно обстоятельство. Если митохондрии после центрифугирования поместить в чистую воду, то они испытывают осмотический шок и в результате разбухают и лопаются (подобное явление уже было описано для бактериофага см. стр. 153). Конечно, о дыхании в этом случае больше не может быть и речи. Поэтому для предотвращения шока к суспензии митохондрий обычно добавляют сахарозу в определенной концентрации эта концентрация должна как можно более точно соответствовать осмотической концентрации содержимого митохондрий. Если это соответствие соблюдается недостаточно точно (или при недостатке одного из кофакторов), также будет происходить легкое набухание митохондрий. Правда, при этом они еще сохраняют способность потреблять кислород и образовывать Oj, однако образование АТФ прекращается. Окисление и фосфорилирование, протекавшие до этого взаимосвязанно, сопряженно, теперь разъединены . Дыхание идет вхолостую , не достигая своей цели, которая состоит, как мы знаем, в образовании АТФ. Митохондрии в этом случае быстро разрушаются. Такое разобщение окисления и фосфорилирования весьма важно для понимания многих биохимических процессов правда, обсуждать их здесь означало бы слишком далеко отойти от темы. Здесь нам важно знать, что сопряженное фосфорилирование есть признак того, что митохондрии не повреждены и нормально функционируют — как в пробирке, так и в клетке. (Следует отметить, что в митохондриях, по-видимому, происходят и другие биохимические процессы помимо дыхания, например синтез аминокислот.) [c.224]

Перейдем теперь к генетике бактериофагов, которые изучены гораздо лучше, чем все другие вирусы. Картина заражения клетки бактериофагом следующая. Бактериофаг адсорбируется своим хвостом на внешней поверхности клетки, проделывает в оболочке микроскопическое отверстие, для чего в его хвосте присутствует специальный фермент со свойствами лизоцима, затем инъецирует внутрь клетки свое содержимое, что у больших фагов сопровождается настоящим сократительным движением (рис. 124). В результате от фага остается нустая белковая оболочка, или тень . Отдельные эпизоды во всей этой последовательности удается хорошо заснять с помощью электронного микроскопа. Освободить бактериальную клетку от адсорбированных на ней пустых оболочек фагов легко с помощью быстрой мешалки. [c.364]

Другой опыт, иллюстрирующий роль ДНК, заключается в следующем. Фаги, как уже упомянуто, это вирусы бактерий. Под электронным микроскопом можно наблюдать, как эти маленькие организмоподобные частицы, прилипнув к стенке большой клетки — бактерии, прокалывают острым выступом (точнее, растворяют с помощью выделяемого им фермента) участок стенки бактерии и выпускают внутрь клетки содержимое своего белкового мешка — дезоксирибонуклеиновую кислоту. Сам белковый мешок легко отделяется от бактерии и в дальнейшем участия не принимает. Был выращен бактериофаг (типа Tg), помеченный радиоактивным фосфором по нуклеиновой кислоте и радиоактивной серой по белку (Херши и Чейг). В результате радиохимического анализа было выяснено, что в клетку бактерии проникает только радиоактивный фосфор (т. е. ДНК), а радиоактивная сера практически вся остается в отпавших оболочках фага. В дальнейшем идет обычное размножение фага в клетке бактерии, распад последней и выпадение взрослых частиц фага в среду. Таким об- [c.726]

В реактор с питательной средой (37°С) засевают нативную взвесь бактерий из расчета 50—150 млн. клеток на 1 мл среды. Маточный фаг добавляют в количестве 0,01—0,1% объема питательной среды. Содержимое тщательно перемешивают воздухом. Воздух, подаваемый в реактор под давлением, поступает через стерильный ватно-угольный фильтр с активированным углем. Лизис проходит при температуре 37°С в течение 4—10 ч (в зависимости от вида бактериофага). Полноту лизиса определяют визуально (по полноте прозрачности). По завершении процесса добавляют консервант хинозол (0,01%). Через 1,5—2 ч после добавления консерванта фаголизат фильтруют через стерилизующие пластины и разливают в стерильных условиях во флаконы по 100, 50 и 25 мл. [c.580]

При одинаково.м помутнении в обоих сосудах для окончательного заключения об отсутствии бактериофага необходимо произвести дополнительное исследование высев на плотную питательную среду содержимого опытной и контрольной пробирок. Высев делают на среду в чашюи Петри шпателем, чтобы получить оплошной рост микробов. Чашки ставят в термостат и после 24 ч инкубирования при 37 °С учитывают результаты. Посев из контрольного сосуда даег сплошной рост микробов. При наличии фага в исследуемом материале на фоне сплошного роста микробов появляются стерильные пятна — колонии бактериофага. [c.76]

Обнаружение-бактериофага на плотных питательных средах двухслойным методом Грациа. Мясо-пептонный агар 1,5% разливают в чашки Петри в количестве 25—30 мл (первый слой). После застудневания среды чашки ставят на 17г—2 ч для подсыхания. В пробирку с 2,5 мл 0,7% расплавленного и остуженного до температуры 45 °С агара вносят 1 мл исследуемого фильтрата и 0,1 мл густого смыва суточной агаровой культуры, соответствующей искомому фагу. Содержимое пробирок быстро перемешивают, чтобы не произошло застудневания агара, и выливают. в ту же чашку вторым слоем. После застудневания агара посев ставят в термостат при 37 °С. Учет результатов, как правило, возможен через 5—8 ч инкубации в термостате. Присутствие бактериофага определяют по наличию прозрачных пятен, хорошо видимых на матовом фоне глубинного роста бактерий. [c.77]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология