Мутации флуктуационный тест

Рис. 5.27. Иллюстрация принципа, положенного в основу флуктуационного теста Луриа и Дельбрюка [1538]. Если клеточное деление носит дихотомический характер, в первом поколении после начала деления будет 2 = = 2 клетки во втором-2 =4 клетки в третьем поколении 2 = 8 клеток и т. д. Если все изучаемые культуры клеток берут начало от одной-единственной клетки и если частоты мутаций одинаковы во всех клеточных поколениях, можно рассчитать относительное число культур с О, 1,2,... мутантными клетками, зависящее от того, в каком клеточном поко-

Если Принять во внимание различие самих методов, то можно считать, что определенная таким способом частота мутаций находится в хорошем соответствии с той, которая была получена ранее из результатов флуктуационного теста Лурия и Дельбрюка. Более того, так как общее число [c.142]

Хотя опыты с пересевом значительно проще, чем флуктуационный тест, но и в этом случае полученные результаты нуждаются в статистической обработке. В 1952 г. Джошуа и Эстер Ледерберги смогли наконец показать спонтанную природу бактериальных мутаций с помощью метода, не требующего никакой статистической обработки. Ледерберги провели очень простой, но очень удобный по технологии эксперимент. Они установили, что можно делать отпечаток бактериальных колоний, выросших на чашке с агаром (фиг. 64). Для этого на поверхность агара исходной первичной чашки, содержащей колонии бактерий, накладывают кусок бархата, натянутый на круглую деревянную болванку диаметром, равным диаметру чашки Петри. Затем этим бархатом касаются чистой поверхности агара новой чашки Петри. После инкубации этой второй чашки получается реплика, отпечаток исходной чашки в каждой точке, где была колония на исходной чашке, вырастает колония и на чашке-реплике. [c.143]

Демерец исследовал также механизм приобретения мутантами бактерий устойчивости к стрептомицину (фиг. 69). С помощью флуктуационного теста ему удалось показать, что устойчивые к стрептомицину мутанты Str Е. соН возникают спонтанно. Однако в отличие от пенициллина стрептомицин не дает ступенчатого обучения . Если на чашку с агаром, содержащим 100 мкг/мл стрептомицина, высеять чувствительную к стрептомицину культуру Е. oli Str , то на такой чашке могут образоваться колонии лишь около 1 бактерии из 10 высеянных. Если затем выделить клетки из некоторых из этих немногих выживших колоний, размножить их и высеять бактерии таких изолятов первой ступени на ряд чашек, содержащих возрастающие концентрации стрептомицина, то среди этих бактерий выявится по крайней мере три разных класса мутантов Str. Это будут а) мутанты с низкой устойчивостью, способные выдержать лишь 100 мкг/мл стрептомицина, т. е. ту концентрацию антибиотика, при которой они отбирались, и погибающие при более высоких концентрациях стрептомицина б) мутанты с промежуточной устойчивостью, которые могут выдержать до 500 мкг/мл стрептомицина в) мутанты с высокой устойчивостью, которые могут выдержать еще более высокие концентрации стрептомицина на чашке. При одной ступени отбора на 100 мкг/мл стрептомицина все эти три типа мутантов появляются примерно с одинаковой частотой. Поэтому Демерец сделал вывод, что признак Str контролируется тремя или большим количеством бактериальных генов sir, обладающих разной силой действия, причем частоты мутирования каждого из этих генов примерно одинаковы и составляют 10 мутаций на одну клетку на генерацию. Мутация в любом из этн х генов приводит [c.150]

Доказав с помощью флуктуационного теста, что за плодовитость скрещиваний Р+ X Р" ответственны спонтанные Н1г- мутации , возникающие в р+-популяции, Вольман и Жакоб повторили уже предпринимав-щуюся ранее попытку обнаружить спонтанные мутанты, а именно использовали разработанный Ледербергом метод отпечатков для непосредственного выделения мутантов. С этой целью исходную чашку, содержащую полноценную среду, засевали достаточным числом клеток ауксотрофной Р+-культуры для образования сплошного газона бактерий. Затем [c.228]

У Е. соН выделено множество штаммов типа Hfr с различными точками начала переноса и различными направлениями хромосомного переноса [13, 27]. Выбор штамма Hfr, таким образом, зависит от участка бактериальной хромосомы, который собираются изучать в отношении картирования генетических локусов. Новые Hfr-доноры могут быть легко выделены на различном генетическом фоне с использованием либо модифицированного флуктуационного теста со штаммом F+ [6], либо интегративной супрессии в штамме F+ или R+, имеющем мутацию dnaA (Ts) [30]. Методы осуществления скрещиваний типа HfrXF" можно проиллюстрировать, используя какой-либо Hfr-штамм, например прототрофный штамм 12 (табл. 14.1), который передает свою хромосому 0-thr leu pro А la ... руг В F и чувствителен к налидиксовой кислоте и стрептомицину, и какой-нибудь штамм F", например штамм 14 (табл. 14.1), с мутациями, обусловливающими ауксотрофность по лейцину, пролину, аденину, триптофану и тиамину и устойчивость к налидиксовой кислоте и стрептомицину. У штамма 14 имеются и другие мутации, и наследование их аллелей дикого типа будет происходить как наследование маркеров, по которым не ведется отбор. Штамм 13 (табл. 14.1) несет меньше мутаций, чем штамм 14 он более удобен для проверки стабильности Hfr-фенотипа в штамме 12. [c.110]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология