Посев на поверхность агара

Рис. 12.5. Посев на поверхность агара.

Посев на поверхность агара [c.47]

Рис. 8.2. Посев во вращающиеся пробирки в анаэробных условиях [27]. 1 — проволочная петля из платины или нержавеющей стали (нихром может вызывать окисление среды) 2 — газовая канюля для постоянного продувания через пробирку газа, не содержащего кислород, 3 — предварительно восстановленная агаровая среда, покрывающая внутреннюю поверхность пробирки 4 — соединяющийся с мотором держатель для вращения пробирки во время нанесения штриха. Петлю с инокулятом опускают на дно пробирки, прижимают плоскость петли к поверхности агара и поднимают ее вверх. После нанесения на агар штриха таким образом в нижней четверти пробирки плоскость петли ставят перпендикулярно поверхности агара (как показано на рисунке) и продолжают наносить штрих до верхней части пробирки. Удаляют газовую канюлю, закрывают пробирку резиновой пробкой и инкубируют в вертикальном положении.

Ниже описываются два метода. Один из них — это метод посева в чашки на поверхность агара, при котором все выросшие колонии являются поверхностными. Именно на поверхностных колониях изучают характерные изменения в индикаторных агаровых средах. Подповерхностные колонии часто отличаются по цвету от поверхностных, так как они развиваются в других условиях аэрации и, следовательно, характеризуются другой способностью к кислотообразованию и другим окислительно-восстановительным потенциалом. Второй метод — посев в многослойный агар — обладает своими преиму-ш,ествами поскольку здесь все колонии развиваются под слоем агара, они невелики, компактны и могут интенсивно окрашиваться. В чашке в данном случае может вырастать значительно больше колоний по сравнению с другими методами, причем вероятность их слияния невелика. Можно просчитать несколько тысяч колоний на чашке и получить достоверные результаты. Поскольку при использовании других методов основная сложность заключается в подсчете нарастающего числа колоний на чашку, совершенно очевидно, что в этом плане данный метод явно следует предпочесть другим. Существует правило, согласно которому оптимальное для подсчета число колоний на чашку лежит в пределах от 30 до 300. Нижний предел устанавливается из соображений статистической достоверности, а верхний — из-за опасности слияния индивидуальных колоний. Указанный 10-кратный диапазон неудобен для многих экспериментов, поскольку в ряде случаев при разведении трудно заранее определить, будет ли число колоний входить в указанный сравнительно узкий диапазон. Дополнительные усилия по приготовлению чашек с многослойным агаром окупаются тем, что вырастающие в этом случае колонии можно считать в широком диапазоне (от 30 до 2000). Вторым важным преимуществом метода является возможность дополнительных манипуляций с составом питательной среды. Первым слоем в чашки Петри можно разлить минимальную среду с агаром и в таком виде хранить их неопределенно долго. Может храниться так- [c.459]

При посеве штрихом на неровную поверхность агара происходит вибрация петли или иглы, что приводит к образованию аэрозоля. Как правило, этой проблемы не существует, если посев делают на гладкую поверхность агара, поэтому рекомендуется не высевать культуру в чашки с неровной поверхностью агара. [c.201]

Микологическое исследование. Посев материала дает возможность на основании изучения культуральных свойств определить род грибов — возбудителей дерматомикозов. Исследуемый материал сеют на плотную среду (например, агар Сабуро с глюкозой, гентамицином и пенициллином или агар Сабуро с 2 % дрожжевого лизата, метиленовым синим и стрептомицином). Для этого волосы или чешуйки измельчают и 4—5 кусочков переносят на поверхность среды в пробирке, которую инкубируют при 27 °С или при комнатной температуре. Через 3—4 нед после посева образуются колонии, типичные по морфологии, консистенции и цвету. На основании изучения структуры колоний и данных их микроскопии определяют вид гриба. [c.325]

Рис. 6. Посев петлей по поверхности питательного агара в чашке Петри для выделения чистой культуры

Аснярационный метод. Более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов. Прибор Кротова (рис. 45) устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром при этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей его поверхности, поскольку чашка (под входной щелью) находится в постоянном вращении. После инкубации посева в термостате производят расчет микробного числа по формуле [c.85]

Посев, После записи в журнале результатов посева па среду Эйкмана, материал из забродивших или помутневших сосудов пересевается, для получения отдельных К1. л > нвй иа агар Эндо при иомощи платиновой петли. Пересев необходимо производить с расчетом получения отдельных изолированных колоний, для чего петля с набранным. материалом сначала погру кается в агар, а затем штрихуется по поверхности арара. [c.392]

При проведении второго этапа анализа для выделения чистых кз льтур из забродивших, а также помутневших пробирок делают посев на фуксин-сульфитный агар или на МПА с желчью и розоловой кислотой. С этой целью одну из указанных сред разливают в чашки Петри и после застывания ее поверхность подсушивают в сушильном шкафу. Технику подсушки агаровых сред мы описали выше. Вслед за тем на поверхность среды из испытуемой пробирки штрихом делают посев платиновой петлей. [c.569]

Три—пять колоний с признаками, характерными для ти-фо-паратифозных бактерий, отсевают на среду Ресселя (рец. 84, 85) или на скошенный столбик агара с мочевиной (рец. 86) для накопления чистой культуры и определения ферментативных свойств в отношении глюкозы и лактозы. На комбинированной среде посев делают сначала на скошенную поверхность, а затем уколом в глубину столбика. [c.214]

Посев почвенной суспензии на всю поверхность скошенного агара производят платиновой петлей или пастеровской пипеткой. Следует заразить, по крайней мере, 5—6 пробирок с агаризованной средой. Часть осадка используют для биологической пробы. [c.583]

Имеющиеся данные о длительном сохранении спорами способности к прорастанию основываются на наблюдениях о сохранении инфекционности споровой массой, без учета процента сохранившихся в ней жизнеспособных спор. Для определения способности спор к прорастанию Мюллер-Кеглер рекомендует посев спор на агар с суслом, разлитый на предметные стекла. После затвердения агара на него иглой наносится суспензия спор в стерильной воде. Для того чтобы не нарушалась поверхность питательной среды, используется 3%-ный агар. Концентрация спор в суспензии должна быть такой, чтобы на стекле можно было различать отдельные споры. Через 24, 48 и 72 часа содержания спор на стеклах в стерильных чашках Петри при температуре 20° С препараты окрашивают метиленовой синей, нанося 0,1%-ный раствор красителя по каплям, и подсчитывают количество проросших спор по окрасившимся ростковым трубкам. [c.370]

Культуру равномерно распределяют по агару в чашке, стараясь покрыть всю его поверхность вплоть до периферии. Равномерный посев требует определенного опыта. После инкубации проверяют распределение колоний на всех чашках, чтобы убедиться в равномерности посева. Лучшими для оценки равномерности посева являются чашки с наибольшим числом выросших колоний, хотя подсчет колоний в этом случае затруднителен. Если количество колоний, выросших вокруг наносимых на агар капель суспензии, выше, чем на остальной поверхности, то технику распределения следует улучшить. Капли влаги на крышках чашек Петри удаляют интенсивным встряхиванием крышек. Чашки с разлитым в них агаром следует подсушивать до тех пор, пока капля жидкости (0,1 мл), наносимая пипеткой, не поглотится агаром в течение 15—20 с. [c.463]

При посеве на скощенный мясо-пептонный агар пробирку берут в левую руку между I и П пальцами, чтобы основание пробирки находилось на поверхности кисти руки и посев осуществлялся под контролем глаза. Пробку из пробирки вынимают правой рукой V и IV пальцами, не прикасаясь к той части пробки, которая входит внутрь пробирки. Остальные 3 пальца правой руки остаются свободными для взятия бактериальной петли, посредством которой производится посев. Петлю держат, как писчее перо. После вынимания пробки пробирку с питательной средой держат в наклонном положении во избежание попадания в нее посторонних микроорганизмов из воздуха. [c.48]

Определение бактериоциногеновара. Определение циногенной активности микроорганизмов также проводят для внутривидовой дифференциации микроорганизмов с эпидемиологической целью. На чашки с соответствующей питательной средой сеют уколом суточную агаровую или 4-часовую бульонную исследуемую культуру и помещают на 48 ч в термостат при 37 °С. Инактивируют рост макроколоний хлороформом или УФ-лучами. Затем заливают поверхность агара 4 мл 0,7%-го МПА с 0,2 мл 4-часовой бульонной культуры эталонного штамма, чувствительного к бактериоцинам данного вида. Посев помещают в термостат при температуре 37 °С на сутки. Наличие зон задержки роста эталонных культур свидетельствует о продукции бактериоцинов. Использование эталонных продуцентов бактериоцинов и штаммов, чувствительных к соответствующим бактериоцинам, позволяет установить условный или точный бактериоциногеновар изучаемой культуры. [c.40]

Бактериологическое исследование. При бактериологической диагностике коклюша и паракоклюша производят посев мокроты методом кашлевых пластинок . Для этого в момент приступа кашля перед ртом больного на расстоянии 8—12 см помещают открытую чашку Петри с питательной средой (картофельно-глицериновый агар по Борде, молочно-кровяной или казеиновоугольный агар) и выдерживают в течение 6 — 8 кашлевых толчков. Чашку закрывают и помещают в термостат при 37 °С. Если кашель отсутствует, отделяемое слизистой оболочки с задней стенки глотки собирают клювовидным тампоном через рот или тампоном через нижние носовые ходы и сеют на чашки с указанными выше питательными средами. При взятии материала следует избегать попадания на тампон материала (микрофлоры) со слизистой оболочки щек, языка, миндалин (для этого используют шпатель). Следует учитывать также, что на сухом ватном тампоне бордетеллы быстро отмирают в результате высушивания и действия токсичных для них компонентов ваты. Если нет возможности немедленно посеять материал, его берут тампоном, смоченным в ИХН. Материал доставляют в лабораторию как можно быстрее и засевают на селективные среды в течение 2 ч после взятия. При посеве взятый тампоном материал тщательно растирают по поверхности агара (от периферии к центру чашки) для получения хорошо изолированных колоний. Такое исследование проводят дваж- [c.134]

Такие микроорганизмы накапливают и выращивают следующим образом. В чашки Петри разливают агаровую питательную среду, которая через несколько минут застывает. На застывшей поверхности производят посев, разливая по ней воду, взятую из какого-либо небольшого пруда и наверняка содержащую большое количество живых организмов. Затем чашки Петри ставят в термостат. Через сутки на поверхности агара вырастают отдельные колонии микроорганизмов. Их переносят в колбу с фенольной водой, содержащей 20—50 мг л фенолов. Через некоторое время, когда микроорганизмы приспособятся к окружающей среде и начнут разрушать фенолы, посев повторяют, но воду для этого берут уже из колбы. Колонии выросших микроорганизмов переносят последовательно в колбы с водой, содержащей фенолы во все большем и большем количестве (200, 400, 1000, 1500, 1800 мг л), создавая таким образом условия, близкие к производственным. Метод отбора и размножения фенолразрушающих микробов разработан и успешно освоен Институтом коммунальной гигиены Министерства здравоохранения Украинской ССР. Гипрококсом разработана и на большом количестве коксохимических заводов внедрена установка по биохимическому обесфеноливанию сточных вод. [c.337]

В колбу наливают 9 мл культуры реципиента, чтобы она приняла температуру бани, и определяют ее титр посевом разведения 10 , равномерно распределяя его по поверхности агара Penassay в чашках. Делают также посев аликвот неразведенной реципиентной культуры объемом 100 мкл на селективную агаровую среду, чтобы убедиться в том, что культура свободна от постороннего материала и содержит небольшое количество ревертантов (или их совсем нет). [c.107]

TiaToreHHbix кишечных палочек, дизентерийных бактерий и сальмонелл. С этой целью посев производят параллельно на среды Плоскирева (рец. 81), Вильсона—Блер (рец. 82), а также на среды обогащения Мюллера (рец. 72) и Лейфсона с селенитом (рец. 74). Для выделения энтеропатогенных кишечных палочек исследуемый материал высевают на среды Эндо (рец. 79), Левина (рец. 80) и Аселя—Либерманна (рец. 83). При посеве испражнений небольшое количество материала эмульгируют в изотоническом растворе хлорида натрия (примерно в соотношении 1 10) и оставляют на несколько минут. После оседания крупных частиц с поверхности жидкости берут 1—2 капли, вносят в чашку Петри и на небольшом участке питательной среды растирают досуха стерильным стеклянным шпателем. Затем шпатель отрывают от поверхности агара и, не прожигая его, распределяют остаток материала по остальной поверхности чашки. Для посева во 2-ю и 3-ю чашки материал берут заново. [c.206]

ПроР13водится посев П0. (Г, мл соответствующие развеДений в чашки Петри со средой Эндо. Внесенный материал втирают досуха шпателем на поверхность -агара. Посевы выдерЖ11вают при температуре 37°С в течение 18—-24 ч. Ьдновременно производится посев разведений в среду Кесслер для определения бродильного -титра. [c.364]

Используют чашк И Петри или прямоугольные лотки, заполненные на глубину 3—4 мм, если нет других указаний в частной статье, культуральной средой, предварительно засеянной соответствующей культурой чувствительного тест-организма, приготовленного, как описано ниже. Питательный агар может состоять из двух отдельных слоев, из которых только верхний слой может быть засеян. Концентрация тест-организ-ма должна быть подобрана таким образом, чтобы получить четкие зоны угнетения в соответствии с ответами на дозу с различными концентрациями стандарта. Если посев готовят, как описано ниже, засеянная среда обычно содержит 1 мл посевного материала на 100 мл культуральной среды. Если культура состоит из суспензии вегетативных клеток, температура расплавленной для засева агаровой среды не должна превышать 48—50° С. Следует специально отобрать чашки и лотки с плоским дном во время заполнения их устанавливают на ровной горизонтальной поверхности для обеспечения одинаковой толщины слоя среды. При использовании некоторых тест-организмов методику можно усовершенствовать, перед употреблением высушивая засеянные лотки при комнатной температуре в течение 30 мин или помещая их в холодильник при 4°С на несколько часов. [c.166]

Бактериологическое исследование. Менингококк растет на специальных питательных средах с нативным белком (бульон или агар с сывороткой, асцитической жидкостью или кровью). Для исследования материала, обильно контаминированного нормофлорой (мазки из носоглотки), применяют посев на плотные селективные среды с антибиотиками (ристомицином, ванкомицином, ко-листином и нистатином). Спинномозговую жидкость лучше сеять после центрифугирования (3000 об/мин в течение 5 мин). Засевают 2— 3 капли полученного осадка на поверхность подогретой пи- [c.117]

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на фруктозный агар с лошадиной кровью и антибиотиками (циклосерином и цефокситином). Циклосерин (500 мкг/мл) подавляет рост эшерихий и других грамотрицательных бактерий, цефокситин является антибиотиком широкого спектра действия. Засеянные чашки инкубируют при 37 °С в анаэробных условиях в течение 24 ч. Выросшие колонии клостридий и среда вокруг них окрашиваются индикатором нейтральным красным в желтый цвет. Посев издает запах крезола или конского навоза. Колонии могут иметь правильную или неправильную форму, плоские с фестончатым краем и матовой поверхностью. При облучении их длинноволновым ультрафиолетом колонии дают золотисто-желтую флюоресценцию. [c.195]

Для определения общего числа бактерий сапрофи-тов посев производят на питательную среду—мясо-иеп-тонпый агар ( МПА) —глубинным способом. Сначала в чашку Петри вносят исследуемую пробу воды, а затем заливают в нее расплавившуюся питательную среду (температура не более 42—44°С). После этого содержимое чашки перемешивают круговыми вращательными движениями и ставят чашки ка строго горизонтальную поверхность для застывания среды. Чашки с застывающей средой переворачивают и переносят в термостат. [c.81]

После выдержки в термостате суспензию подвергают центрифугированию. Жидкость отсасывают стерильной пипеткой, осадок диспергируют в небольшом количестве физиологического раствора Na l и делают посев на поверхность печеночного агара, к которому добавляют генцианвиолет (2 мл 1 %-ного раствора на 1 л среды). Эту среду разливают в чашки Петри и ее поверхность подсушивают. Для посева одной пробы следует брать несколько чашек. [c.593]

На чистых культурах испытание препаратов проводилось по методу введения ацетоновых растворов препаратор в жидкую агари-зированную питательную среду (КДА), после разлива и застывания которой, в чашках Петри, и на поверхность этой среды проводили посев соответствующих тест-объектов. Процент подавления микроорганизмов определяли по формуле Эббота в сравнении с контролем (посев микроорганизмов на питательную среду без введения препаратов), где рост мицелия грибов и чистых культур бактерий принимали за 100%. [c.82]

Метод используют для культивирования анаэробных организмов или организмов, растущих при низкой концентрации кислорода (микроаэрофилов). Обычно используют пробирку с питательной агаризованной средой. Благодаря небольшой поверхности и достаточно большой глубине агара в пробирке по сравнению с чашкой доступ ы1Слорода внутрь агара ограничивается. Посев производят прямой проволочкой (без петли), или бактериологической иглой. Небольшое количество культуры (твердой или жидкой) берут кончиком иглы и затем вертикально прокалывают ею агар (рис. 12.7). Культура растет в агаре во все стороны от линии прокола. [c.50]

Диагностика основной метод — бактериологическое исследование материал определяется локализацией очага поражения. Посев по методу Шущкевича в каплю конденсированной влаги свежескошенного мясопептонного агара характерен рост в виде вуали по всей поверхности среды. [c.104]

Для получения спор Ba illus subtilis, вариант Лг, 18—24-часовую культуру со скошенного агара (среда № 1) смывают 5—10 мл стерильной дистиллированной воды. Затем производят посев культуры в матрац с 300 мл среды № 3 (со скошенной поверхностью). Засеянный мат- [c.946]

Метод 1. Посев производят в пробирках на скошенный питательный агар (разд. 20.3.25) или другую среду, не содержащую крови. После инкубации вливают по капле вниз по косяку 1 мл 3%-ной перекиси водорода. Сразу же и через 5 мин наблюдают за образованием пузырьков, которое означает положительную реакцию. Параллельно добавляют несколько капель 3%-ной перекиси водорода к колониям на чашке или к зонам обильного роста, который может наблюдаться на поверхности полужидкой среды или около нее. В случае бульонной культуры к 0,5 мл культуры добавляют 0,5 мл 3%-ной перекиси водорода и наблюдают за постоянным образованием пузырьков. Примечание не следует применять для теста на каталазу среду, содержащую кровь, так как кровь, если ее предварительно не прогреть, имеет каталазную активность (метод 3). Некоторые бактерии (например, молочнокислые) в средах с низкими концентрациями глюкозы или вообще без глюкозы образуют негемовую псевдокаталазу [94]. Образование псевдоката лазы можно предотвратить введением в среду глюкозы (1%). При проверке анаэробов на каталазную активность важно перед добавлением перекиси водорода выдержать культуру на воздухе в течение 30 мин. [c.16]

Определять антибиотическую активность методом серийных разведений можно и на чашках Петри. В пробирки, содержащие по 9 мл расплавленного питательного агара, вносят по 1 мл изучаемого антибиотика определенного разведения или культуральной жидкости. После тщательного перемешивания содержимое пробирки выливают в чашку Петри и дают агару застыть. Затем по поверхности пластинки штрихами делают посев тест-организ-мов. Чашки выдерживают в термостате при оптимальной для используемых тест-организмов температуре в течение 20-21 ч. [c.170]

Определение способности к брожению проводят обычно на уг-леводно-пептонной среде с относительно высокой концентрацией углеводов и небольшим количеством пептона. Состав среды (г/л) углевод — 10,0 пептон — 2,0 Na l — 5,0 К2НРО4 — 0,3 агар — 3,0. На 100 мл среды добавляют 0,3 мл 1%-ного водного раствора бромтимолового синего, pH среды 7,1—7,2. Среду без углевода стерилизуют при 1 ати. Углеводы (глюкозу, сахарозу, лактозу) добавляют к стерильной расплавленной среде в виде растворов в дистиллированной воде, которые стерилизуют при 0,5 ати. Стерильную среду с углеводами разливают в стерильные пробирки слоем 5—в см и после того, как она застынет, ее засевают исследуемым микроорганизмом. Посев делают уколом. Для каждого углевода используют две пробирки. После посева поверхность среды в одной пробирке заливают стерильным расплавленным парафином, смесью вазелинового масла и парафина (1 1), или водным агаром (1,5 г агара на 100 мл), слоем 1—2 см. [c.164]

Выделение чистой культуры. Для выделения чистой культуры используют твердую среду Ваксмана с тиосульфатом (N" 10). Для приготовления среды используется очищенный агар или агар Дифко. Через 3— 10 дней на поверхности агаровых пластинок появляются очень мелкие колонии T.thiooxidans. Мицелиальные грибы на этой среде растут плохо. Для получения чистой культуры из колоний, выросших на твердой среде, производят массовый посев в пробирки на среду № 9. О развитии T.thiooxidans судят по снижению реакции среды до pH 2,0 и ниже и по ее помутнению. [c.55]

Посев крови и костного мозга для выделения бруцелл рекомендуется проводить по методу Кастенеды. Для посева крови пользуются прямоугольными флаконами емкостью 100 мл, в которые разливают по 20 мл питательного агара. После стерилизации флаконы кладут так, чтобы среда распределилась и застыла равномерным слоем на поверхности одной из граней флакона. После этого во флаконы вносят стерильный печеночный бульон или бульон Мартена (рец. 40) в количестве 15—20 мл. В каждый флакон засевают по [c.270]

Схема бактериологического исследования. Первый день. Для постановки микробиологического диагноза коклюша и паракоклюша пользуются посевом исследуемого материала иа казеиново-угольный агар (рец. 110). Для подавления роста сопутствующих сапрофитических микробов, препятствующих размножению палочки коклюша, рекомендуется из расчета на 1 мл питательной среды добавлять по 0,25— 0,5 ЕД пенициллина или в поверхность питательной среды за IV2—2 ч до посева втирать шпателем 0,1 мл раствора пенициллина, содержащего 10 ЕД. Взятый материал круговыми движениями тампона засевают по краю чашки так, чтобы все стороны тампона коснулись поверхности питательной среды. В центре чашки тампоном наносят штрихи. Этим же тампопом делают точно такой же посев на вторую чашку с питательной средой. Нанесенные в центре чашки штрихи растирают для получения изолированных колоний шпателем, отдельным для каждой чашки. Чашки с посевами пЬмещают в термостат вверх дном. Обязательным условием культивирования коклюшных палочек является достаточная влажность в термостате, достигаемая путем помещения в него открытого сосуда с водой. Оптимальная температура роста для коклюшных палочек 36 С -( 1°). [c.277]

Рис. 6. Посев петлей по поверхности Рис. 7. Колонии на дифференциальнопитательного агара в чашке Петри для диагностической среде Мак-Конки

Справочник химика 21

Химия и химическая технология