Ранние вирусов SV и полиомы

Другая ситуация наблюдается в случае небольших молекул вирусов 8V-40 и полиомы, когда в результате различного протекания сплайсинга одновременно продуцируются белки с перекрывающимися аминокислотными последовательностями. Это происходит при транскрипции и ранних, и поздних генов. [c.257]

Поскольку все описанные на сегодняшний день упаковывающие MLV-клетки ведут свое начало либо от линий NIH3T3 либо от линии BALB/ ЗТЗ, рекомбинантную ретровирусную ДНК в них можно легко ввести путем трансфекции, используя стандартный метод кальций-фосфатной преципитации 34]. Непродолжительная, так называемая временная (transient), трансфекция может оказаться достаточной, чтобы получить вирусный препарат с низким титром (обычно 10—Ю /мл). Однако для достижения более высоких концентраций вируса необходимы стабильно трансформированные клеточные линии, экспрессирующие доминантный селективный маркер. Такие линии позволяют получать препараты вируса с титром Ю —10 инфекционных ед./мл. Титр вирусных препаратов, полученных путем временной трансфекции, можно повысить, если использовать гибридный ретровирусный вектор, содержащий полную область ранних генов вируса полиомы такая конструкция претерпевает в упаковывающих клетках мультикопийную внехромосомную репликацию [35]. [c.288]

Большая часть полипептида NS2 вируса гриппа транслируется с рамки считывания, отличающейся от той, что используется для трансляции NS1. У вирусов гриппа А NS2 совпадает с NS1 по 70 аминокислотам, а у вирусов В — по 52 аминокислотам [36, 136]. Большая часть полипептида М2 также транслируется с рамки считывания, отличной от той, что используется для М1 М1 и М2 совпадают по 14 аминокислотам [140]. Ранее было обнаружено использование перекрывающихся рамок считывания у похожих бактериофагов 0X174 и G4 [17, 252], у бактериофага Q-P [12, 21], у большого и среднего Т-антигенов вируса полиомы [266] и в VP2,3 и VP1 вируса SV40 и вируса полиомы [60, 265]. Пока неизвестно, имеет ли место столь эффективное использование геномов только у бактериофагов и вирусов с небольшими геномами или также у эукариот. [c.58]

Основные принципы. Выполненные в последние годы молекулярно-биологические исследования и особенно открытие так называемых онкогенов способствовали пониманию молекулярных механизмов канцерогенеза. В ранних работах по слиянию клеток (разд. 3.4.3) было показано, что важную роль в злокачественной трансформации могут играть мутации в определенных локусах и обработка клеток хомячка ДНК вируса полиомы С другой стороны, со времени появления работ Эллермана и Бэн-га (1908) и Рауса (1911) стало известно о способности некоторых РНК-вирусов - ретровирусов - индуцировать опухоли у животных. Эти и полученные позднее результаты побудили многих исследователей заняться поиском ретровирусов, которые могли бы вызывать опухоли у человека. До конца 1970-х г. эти поиски были безуспешными. Однако внедрение в практику исследований молекулярно-биологических методов позволило получить в последние годы очень важные результаты. [c.214]

Онкогенные участки генома ДНК-содержащих вирусов всегда расположены в районах, которые работают на ранних стадиях жизненного цикла вируса. Эти гены лучше всего изучены у вирусов полиомы и SV40. Анализ функций этих генов осложняется, однако, тем, что эти онкогены входят в группу перекрывающихся генов, один из которых (кодирующий большой Т-антиген, см. разд. 8.1.6) необходим для репликации вирусной ДНК. Еще не вполне ясно, сколько продуктов, кодируемых перекрывающимися генами, участвует в опухолевой трансформации. Известно лишь, что для трансформации нужен средний Т-антиген вируса полиомы в частности, молекулы этого белка обнаружены на внутренней поверхности плазматической мембраны, где они, возможно, связаны с протеинкиназами, фосфорилирующими тирозин (см. ниже). У более крупных ДНК-содержащих вирусов, например аденовирусов, геном гораздо более сложен по-видимому, он кодирует несколько различных онкогенных белков, и для полной трансформации необходимо определенное их сочетание. [c.154]

Опухолевыми антигенами (Т-антигенами) называют продукты ранних генов 5 40 и вируса полиомы. Название антигенов объясняется тем, что они впервые были обнаружены в опухолях, индуцированных вирусом, и в клетках, трансформированных вирусом. В настоящее время известны два Т-анти-гена для 5У40 и три для вируса полиомы (подробнее см. [1]). Основные белки — это большие Т-антигены (мол. масса 88 кД для 5У40 и 100 кД для вируса полиомы), накапливающиеся в ядрах инфицированных и трансформированных клеток. [c.241]

Получены стабильные жизнеспособные делеционные мутанты нескольких ДНК-содержащих вирусов животных, субпопуляции которых проявляют уменьшенную способность к репликации. Они представляют интерес, так как уменьшение способности к репликации — это и есть аттенуация. Жизнеспособные делеции могут быть произведены как в неструктурных, так и в структурных генах. Например, в геноме 5У40 могут подвергнуться делециям без потери жизнеспособности по крайной мере три участка [8, 26, 183]. Один участок, поздний лидер, является неструктурной областью, а два других представляют собой гены для капсидного белка УР2 и раннего белка — малого Т-антигена [8, 183]. Из этих участков без потери жизнеспособности может быть делетирована довольно большая часть генома [44, 81]. В одном случае Кониг и Лай [81] сконструировали мутант 5У40 с двойной делецией, у которого отсутствовало 7,5 % вирусного генома, но жизнеспособность в культуре ткани сохранялась. Был также получен жизнеспособный мутант вируса полиомы с относительно обширной делецией (с сохранением фазы трансляции) в структурном гене для среднего и большого Т-антигенов [60]. Таким образом, как в некодирующих, так и в кодирующих областях паповавирусов существуют участки, которые могут быть делетированы без потери жизнеспособности. Более того, делеция внутри участка любого типа может уменьшить репликативную способность вируса. Некоторые адено- [c.174]

Информация, полученная в исследованиях на животных, указывает на то, что делеции в соответствующих участках генома могут давать жизнеспособные мутанты с ограниченной способностью к репликации in vivo [102]. Некоторые мутанты вируса полиомы с делециями в ранних участках способны заражать мышей-сосунков, но уровень репликации при этом равен 1/10—1/10000 уровня репликации вируса дикого типа. Несмотря на такой уровень рестрикции in vivo, некоторые из этих делеционных мутантов растут в культуре клеток до такого же высокого титра, как и дикий вирус. В отличие от вирусов дикого типа делеционные мутанты не вызывают персистентную инфекцию у мышей-сосунков [102]. Хотя паповавирусы не являются подходящими кандидатами для разработки вакцин, данные, полученные в опытах с мутантами вируса полиомы, свидетельствуют о том, что делеция в соответствующем участке генома ДНК-содержащих вирусов может ограничивать репликацию вируса in vivo, не влияя на его рост в культуре ткани. Более того, делеционные мутанты могут благоприятно изменять патогенез инфекции, превращая персистентную инфекцию в спонтанно затухающую. [c.175]

Показана возможность клонирования и экспресс чужеродных генов в составе литических или эписомных векторов на основе вирусов Ру и BKV. Для вируса полиомы по аналог с линией клеток OS создана культура клеток СОР8, продуцирующая Т-антиген Ру и поддерживающая репликацию векторов с делецией ранних (и при необходимости поздних) генов вируса. [c.366]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология