Фенилизотиоцианат реагент Эдмана

Эдмана реакция (деградация белков но Эдману) - метод отщепления от белка и идентификации К-концевой аминокислоты. Действующим реагентом в реакции является фенилизотиоцианат. [c.530]

По оригинальной прописи Эдмана [43] 0,5—1 г аминокислоты растворяют в 25 мл водного пиридина (1 1) в закупоренной пробирке. С помощью 1 н. гидроокиси натрия доводят pH до 9,0, затем раствор помещают в водяную баню при 40° и добавляют при перемешивании 1,2 мл фенилизотиоцианата. В ходе реакции (продолжительность ее около 30 мин), добавляя щелочь, поддерживают pH около 9,0. Затем реакционную смесь повторно экстрагируют бензолом для удаления избытка реагента и пиридина. Реакцию считают законченной, когда прекращается потребление щелочи. Для осаждения ФТК-аминокислоты добавляют небольшой избыток 1 н. соляной кислоты. ФТК-аминокислоту отфильтровывают и нагревают осадок с 30 мл 1 н. соляной кислоты при 40° в течение 2 час. При охлаждении выкристаллизовывается ФТГ-производное из маточного раствора при охлаждении получают дополнительное количество кристаллов. Большинство ФТГ-производных аминокислот перекристаллизовывают из водной уксусной кислоты или этанола. Температуры плавления ФТГ-производных аминокислот приведены в табл. 20. [c.160]

Вторым важным реагентом для определения N-концевых остатков служит фенилизотиоцианат реактив Эдмана). Это вещество реагирует со свободными а-аминогруппами в разбавленных щелочных растворах с образованием фенилтиокарбамилпептида (уравнение III.4). Последующая обработка продукта реакции кислотой (предпочтительно, по не обязательно в органических растворителях) приводит к циклизации с образованием фенилтиоги-дантоина N-концевой аминокислоты (его структура может быть установлена хроматографически) и новой N-концевой аминокислоты [c.87]

При автоматическом секвенировании вместо реагента Сенгера применяют фенилизотиоцианат (реагент Эдмана) в результате реакции происходит отщепление N-концевого остатка в виде его фенилтио-гидантоинового производного (реакция Эдмана рис. 4.11). [c.39]

Другой подход основан иа использовании реагента, образующего с NH2-кoн-цевым остатком производное, которое можно затем отщепить, не гидролизуя остальную часть пептидной цепи. С этой целью успешно применяется реагент Эдмана — фенилизотиоцианат (ФИТЦ). [c.174]

Введение Эдманом [129] фенилизотиоцианата как реагента для определения К-концевых групп позволило последовательно отщеплять от полипептидной цепи по одному аминокислотному остатку, начиная с конца, содержащего свободную а-аминогруппу. Метод концевого анализа Эдмана [c.153]

Одним из самых ценных реагентов при работе с белками является фенилизотиоцианат, впервые примененный П. Эдманом. Это соединение реагирует с хМ-концевой аминогруппой пептидов [уравнение (2-25)]. Образующийся продукт циклизуется, что в кислой среде влечет за собой разрыв пептидной цепи (2-25). В итоге образуется соответствующий Ы-концевой аминокислоте фенилтиогидантоин, который можно идентифицировать. Проделав ту же операцию с укороченной указанным путем пептидной цепью, можно определить следующий аминокислотный остаток. При тщательной постановке эксперимента с помощью реакции Эдмана можно пройти вдоль пептидной цепи несколько десятков остатков. Есть специальные приборы — так называемые секвена-торы, в которых все необходимые операции осуществляются автоматически. [c.174]

Недавно был разработан миниатюрный секвенатор нового типа — газофазный, в котором для проведения реакции Эдмана используются газообразные реагенты [4, 8]. Единственными жидкостями, вступающими в контакт с пленкой белка (пептида), являются фенилизотиоцианат и органические растворители, в которых белок плохо растворим. Вымывание гидрофобных пептидов и белков, связанных с додецилсульфонатом натрия (ДСН), предотвращают добавлением полибрена. [c.465]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология