Эдмана реакция

Метод Эдмана последовательной деградации пептидов и белков основан на реакции фенилизотиоцианата с концевой аминогруппой в щелочной среде, которая приводит сначала к образованию тиомочевинной метки концевой аминокислоты, последняя при действии СРзСООН отщепляется, в конечном счете, в виде замещенного фенилтиогидантоина, после чего полипептидная цепь белка укорачивается на один аминокислотный остаток. Далее этот процесс повторяется вновь [c.94]

Эдмана реакция (деградация белков но Эдману) - метод отщепления от белка и идентификации К-концевой аминокислоты. Действующим реагентом в реакции является фенилизотиоцианат. [c.530]

ЭДМАНА РЕАКЦИЯ (Эдмана расщепление), превращение пептида под действием фенилизотиоцианата в фенилтио- [c.692]

По оригинальной прописи Эдмана [43] 0,5—1 г аминокислоты растворяют в 25 мл водного пиридина (1 1) в закупоренной пробирке. С помощью 1 н. гидроокиси натрия доводят pH до 9,0, затем раствор помещают в водяную баню при 40° и добавляют при перемешивании 1,2 мл фенилизотиоцианата. В ходе реакции (продолжительность ее около 30 мин), добавляя щелочь, поддерживают pH около 9,0. Затем реакционную смесь повторно экстрагируют бензолом для удаления избытка реагента и пиридина. Реакцию считают законченной, когда прекращается потребление щелочи. Для осаждения ФТК-аминокислоты добавляют небольшой избыток 1 н. соляной кислоты. ФТК-аминокислоту отфильтровывают и нагревают осадок с 30 мл 1 н. соляной кислоты при 40° в течение 2 час. При охлаждении выкристаллизовывается ФТГ-производное из маточного раствора при охлаждении получают дополнительное количество кристаллов. Большинство ФТГ-производных аминокислот перекристаллизовывают из водной уксусной кислоты или этанола. Температуры плавления ФТГ-производных аминокислот приведены в табл. 20. [c.160]

Многократное повторение реакции Эдмана, таким образом, позволяет определить N-концевую аминокислотную последовательность изучаемого пептида. Этот метод имеет исключительно большое значение при определении последовательности пептидов, изолированных из ферментативных гидролизатов, и, следовательно, при выяснении первичной структуры белков с высоким молекулярным весом. [c.283]

В условиях получения ЭДМ-2 (высокая температура, слабокислые растворы) первоначально образуется ион Мп + по реакции [c.199]

Вторым важным реагентом для определения N-концевых остатков служит фенилизотиоцианат реактив Эдмана). Это вещество реагирует со свободными а-аминогруппами в разбавленных щелочных растворах с образованием фенилтиокарбамилпептида (уравнение III.4). Последующая обработка продукта реакции кислотой (предпочтительно, по не обязательно в органических растворителях) приводит к циклизации с образованием фенилтиоги-дантоина N-концевой аминокислоты (его структура может быть установлена хроматографически) и новой N-концевой аминокислоты [c.87]

Образование ФТГ-производных (реакция Эдмана). Эта ] [c.334]

Другим химическим методом определения К-концевых групп является метод Эдмана — реакция с фенилизотиоцианатом. При этом происходит перегруппировка и расщепление с образованием фенилтиогидантоина К-концевой аминокислоты [50]. Для данного способа была разработана стандартная методика [57] и выяснен механизм реакции [51]. Фенилтиокарбамильный пептид, полз ча-ющийся при этой реакции, быстро расщепляется в кислой среде с образованием 5-тиазолинона N-кoнцeвoй аминокислоты и остатка пептида. 5-Тиазолинон затем быстро гидролизуется до фенилтио- [c.403]

Используя аналогичную систему ТСХ для идентификации ФТГ-АК в последовательных циклах секвенирования полипептидов по методу Эдмана (вручную), Рид и Мак-Кэй столкнулись со следующей трудностью иа месте ФТГ-Arg в каждом цикле выходил некий, также гасящий флюоресценцию фона побочный продукт реакции. Они описали метод детектирования истинного пятна ФТГ-Arg путем дополнительной обработки пластинки смесью (1 1) 0,02%-ного раствора фенантренхинона и 10%-ного раствора NaOH в 60%-ном этаноле. После такой обработки только пятна ФТГ-АК прн освещении длинноволновым УФ-светом давали интенсивную желто-зеленую флюоресценцию иа слегка флюоресцирующем голубоватом фоне пластинки [Reed, Ma Kay, 1978]. [c.485]

Одним из самых ценных реагентов при работе с белками является фенилизотиоцианат, впервые примененный П. Эдманом. Это соединение реагирует с хМ-концевой аминогруппой пептидов [уравнение (2-25)]. Образующийся продукт циклизуется, что в кислой среде влечет за собой разрыв пептидной цепи (2-25). В итоге образуется соответствующий Ы-концевой аминокислоте фенилтиогидантоин, который можно идентифицировать. Проделав ту же операцию с укороченной указанным путем пептидной цепью, можно определить следующий аминокислотный остаток. При тщательной постановке эксперимента с помощью реакции Эдмана можно пройти вдоль пептидной цепи несколько десятков остатков. Есть специальные приборы — так называемые секвена-торы, в которых все необходимые операции осуществляются автоматически. [c.174]

Реагенты, используемые для этой реакции, указаны в табл. 5. Все эти реагенты в мягких условиях (pH 8,5, низкая температура) образуют производные, отличающиеся друг от Но скорости циклизации и растворимости в кислотных рёагёйтах, вызывающих циклизацию. Указанные реагенты успеШНо рйменялись для исследования простых пептидов, но только ф йлизотиоцианатный метод Эдмана нашел широкое [c.239]

В секвенаторе проводятся только первые две стадии реакции Эдмана — присоединение и отщепление. Образовавшиеся в результате анилинотназолиноиы экстрагируются и собираются в коллекторе фрвкций. Их превращение в ФТГ осуществляется вручную или с помощью автоматической приставки — конвертерв. [c.62]

Определение N-кoнцeвoй группы проводят по методу Эдмана (1950 г.), который основан на реакции Ы-концевой группы полипептида с фенилизо-тиоцианатом. [c.521]

Метод Эдмана, разработанный для М-концевых аминокислот (аминокислот со свободной МНз-группой), основан на реакции полипептидов или белков с фенилизотиоцианатом, образующим фенилтиомочевину по концевой МНз-группе. При последующем гидролизе отщепляется фенилгидантоин, а остальная молекула не затрагивается [c.509]

Другой метод определения концевых групп, предложенный Эдма-ном (1950), включает избирательное отщепление N -концевых аминокислотных остатков. При реакции белка с фенилизотиоцианатом образуется соответствующее фенилтиокарбамильное производное I, которое расщепляется хлористым водородом до фенилтиогидантоина II и модифицированного белка. Наконец, щелочной гидролиз фенилтиогидантои-на приводит к выделению свободной концевой аминокислоты ПГ. [c.675]

Исследуя реакцию взаимодействия метилизотиоцианата с белками, авторы показали, что при большом избытке реагента (60 мкл) образуется продукт, затрудняюпщй газохроматографическое определение. При анализе бычьего инсулина после первого цикла его расщепления по методу Эдмана на хроматограмме были идентифицированы пики производных глицина и фенилаланина, после второго цикла — пики производных второй пары аминокислот изолейцина и валина. Пик производного глицина может быть экранирован пиком производного валина. [c.34]

В результате ферментативного воздействия, определяли последовательно после каждого отщепления Ы-концевого остатка по методу Эдмана (см. гл. 6). При изучении гемоглобина (Брауницер был удачно применен последовательный гидролиз белка разными про-теолитическими ферментами. В этом случае на белок действовали трипсином, а затем полученные пептиды гидролизовали пепсином, специфичность которого значительно повышали, ограничивая время реакции. Методические трудности, связанные с фракционированием сложных гидролизатов и определением полной структурной формулы белка, были преодолены в результате упорного труда нескольких групп ученых. Мы теперь знаем полную аминокислотную последовательность инсулина, глюкагона, рибонуклеазы, гемоглобина, белка вируса табачной мозаики, а также кортикотропина и других пептидных гормонов приближаются к завершению работы по установлению строения папаина, лизоцима, химотрипсиногена, трипсииогена, цитохрома с успешно продвигается изучение некоторых других белков. Изучение последовательности аминокислот проводилось на частичных кислотных гидролизатах или на гидролизатах, полученных при действии различных протеолитических ферментов. Чисто химические методы избирательного расщепления пептидных цепей не имели до сих пор значительного успеха, и эта область остается еще нерешенной задачей пептидно химии. [c.117]

Френкель-Конрат при отщеплении N-концевых аминокислот по способу Эдмана (см. стр. 171). Этим методом было подтверждено наличие С-концевого аланина у альбумина сыворотки крови лошади. Очень часто вследствие побочных реакций получают низкие выходы 2-тиогидантоинов по-видимому, идентификацию отщепляемой аминокислоты лучше осуществить путем сопоставления аминокислотного состава исходного и укороченного пептида или белка (т. е. по разности). Фокс и др. показали [51], что аминокислоты лизоцима (кроме С-концевого остатка) не разрушаются при обработке по методу Шлака и Кампфа точный аминокислотный анализ после кислотного гидролиза показал потерю 1 остатка лейцина на 1 моль лизоцима (мол. вес 14 700). [c.210]

Второй метод исследования К-концов (метод Эдмана) называется фенилтиогидантоинным методом. Используется реакция с фенилизотиоцианатом [c.23]

Инглис и Никольс [125] проводили разделение на предварительно покрытых кизельгелем 60F 254 алюхминневых пластинках, на которых удается получать более четкие пятна меньшего размера, чем на слоях силикагеля. Разделение большого числа производных при этом улучшается, а цветные реакции с неполярными ФТГ-аминокислотами становятся более чувствительными. Смесь растворителей представляет собой модификацию смеси Эдмана Н этиленхлорид—уксусная кислота (60 7). [c.503]

Первоначально в методе Эдмана тиогидантоины подвергали щелочному гидролизу для освобождения аминокислот, которые идентифицировали хроматографией на бумаге [129]. Аргинин и триптофан давали по два пятна, что затрудняло идентификацию. Сёквист [131] преодолел эту трудность, применив непосредственную хроматографию фТГ на бумаге и обнаруживая зоны реакцией с иодом и азидом [132]. Эдман и Сёквист [133] разработали количественный метод элюирования пятен ФТГ с последующим определением их ультрафиолетового поглощения при 270 ммк. [c.154]

Выходы па стадиях классического ( ручного ) метода Эдмана обычно ниже, чем при использовании автоматических приборов, главным образом вследствие невозможности полного исключения кислорода из реакционной среды и менее эффектив-]плх промывок водной фазы. Поскольку реакция расщепления 1 рифтороуксусной кислотой обратима [21] (рис. 10.1), присутствие тиазолинонов, неполностью экстрагированных на преды- [c.343]

По ys с образованием N-koh-цевого 4-карбоксиминотиазо-лидииа, блокирующего реакцию Эдмана и действие амино-пептидаз возможно деблоки-эование каталитическим восстановлением [57] [c.347]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология