Грипп А изучение, методы генетические

Последние достижения в развитии новейших технологических приемов значительно расширили наши возможности в определении генетического строения и молекулярной структуры вирусов, а также выявлении сходства штаммов и идентификации различий между вариантами вирусов. Наиболее важные из этих методов — клонирование и определение последовательности нуклеиновых кислот, картирование РНК и пептидов, а также антигенный анализ белков с помощью моноклональных антител. Задача последней обзорной главы данной книги — обсуждение эпидемиологии вируса гриппа в свете применения этих новых методов. Особое внимание уделено оценке последних достижений и изучению вопросов эпидемиологии, которые могут быть успешно решены при использовании молекулярных методов. [c.313]

Разработка метода бляшек для вирусов гриппа в клетках фибропластов куриного эмбриона ( EF) [111 117] позволила идентифицировать одношаговые мутанты и установить частоту реверсии [117]. Она привела также к подтверждению более ранних исследований по кросс-реактивации вируса, инактивированного УФ-луча-ми [4, 19, 32, 64J, и, что особенно ван<но, к основанию методов клонирования некоторых бляшкообразующих штаммов вируса 1111]. Позднее использование перевиваемых человеческих клеточных линий расширило перечень вирусов, для изучения которых можно было применять метод бляшек и готовить рекомбинанты, различающиеся по типу образующихся бляшек [121, 122]. Только значительно позднее было установлено, что загадочная неспособность вирусов гриппа образовывать бляшки обусловлена главным образом необходимостью обязательного расщепления вирусного НА эндогенными протеазами клетки хозяина, без чего невозможны инфицирование клетки и репликация вируса [67, 76]. Возможность применения только тех нескольких вирусов (в основном WSN и RWS — вариантов оригинального штамма WS), которые образовывали отчетливые бляшки, значительно ограничивала проведение генетических экспериментов. К настоящему времени установлено, что образование бляшек вирусом WSN, по крайней мере [c.15]

С учетом сегментированности вирусных геномов избирательная пересортировка генов обеспечивает тонкий метод идентификации генов, определяющих такое сложное явление, как вирусная вирулентность, т. е. способность вируса нанести вред хозяину каким-либо образом. Как уже указывалось, самые первые маркеры, использованные для изучения генетики вируса гриппа, включали вирулентность и были в основном полигенными. Неудивительно поэтому, что вирулентность остается каким-то быстро исчезающим явлением, определение которого затруднено даже при использовании доступных сейчас более точных методов идентификации вирусных генов. Проблема генетического выявления вирулентности с помощью перераспределительной генетики — методом разрезания и склеивания — включает 1) возможность появления мутации в пересортированных генах в процессе перераспределения генов или при выделении вируса-реассортанта [21, 27] 2) приобретение вирусом новых фенотипических признаков вследствие пересортировки генов в другом ключе, т. е. генные констелляции [73, 98] 3) необходимость точного определения и оценки свидетельств вирулентности, особенно у сложных (интактных) хозяев. Тем не менее были получены существенные результаты, даже несмотря на ограпиченпые возможности аналитических методов (см. главу 9). [c.20]

Для изучения генетического родства вирусов гриппа были ] работаны п попользованы различные аналитические методы, к дый из которых имеет свою специфическую ценность и облг применения. Одни методы относительно просты н могут б использованы для быстрого анализа большого количества вг выделенных штаммов, другие более трудоемки по времени и затрачиваемым для их постановки материалам, но дают б( точные ответы. В этой главе будут описаны различные метод] ские приемы и обсуждены их достоинства и недостатки. Поск( ку большинство из сравнительных данных о генетическом роД вирусов гриппа типа А доступно, далее будут рассмотрены и суждены различные подтипы этих вирусов. [c.96]

Несмотря на то что в течение нескольких десятилетий предпринимались попытки получить штаммы вируса гриппа, адаптированные к человеческому организму сериями пассажей на чужеродных для хозяина клеточных системах, результаты этих опытов были весьма вариабельными [7]. Кроме того, даже когда наблюдали нарушение адаптации к человеческому организму, было невозможно определить генетические основы изменения фенотипа. Подобно этому до сих пор не уточнены мутации, необходимые для адаптации к человеческому организму вирусов, обитающих не в человеческой популяции [26]. К настоящему времени ймоют-ся лишь крайне ограниченные сведения о специфических мутациях в отдельных генах, влияющих на адаптацию к определенным хозяевам. В этом отношении определенный интерес представляет недавнее выделение и изучение вируса H7N7 при диссеминированной смертельной гриппозной эпизоотии у тюленей. С помощью метода конкурентной гибридизации было найдено, что каждый из 8 сегментов РНК этого вируса был очень близок к эквивалентным сегментам других птичьих вирусов. Однако было обнаружено, что вирус лучше размножался в организме млекопитающих, чем птиц [61]. Хотя такое изменение вида хозяев может быть связано с определенным набором генов птичьего вируса, также вполне возможно, что адаптация - была обусловлена серией последовательных мутаций. [c.309]

Вирус гриппа стал первым выявленным патогенным вирусом человека и, более того, первым вирусом эукариот, который исследовали количественными генетическими методами [9]. В ранних опытах с использованием смешанной инфекции лабораторными штаммами с разной нейраминидазной активностью и разной патогенностью для мышей были выявлены частицы с признаками, характерными для обоих родительских штаммов, что свидетельствовало о наличии генетической рекомбинации. После того, как этот процесс был изучен применительно к другим вирусам животных, оказалось, что у вируса гриппа частота рекомбинации на порядок выше. Херст [32] предположил, что высокая частота рекомбинации объясняется сегментацией вирусного генома. Впоследствии его гипотеза нашла подтверждение в биохимических экспериментах [41]. Если заразить клетку двумя штаммами вируса гриппа, сегменты их реплицирующихся геномов будут смешиваться в любых сочетаниях, поэтому дочерние вирусные частицы будут содержать разные наборы генов, заимствованных от каждого из родителей. Такое комбинирование [c.467]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология