Вирус инфицирование изучения

В процессе изучения взаимоотношений вирус — растение было вовлечено большое число различных методов. Только их комбинирование могло принести результаты по получению растений, устойчивых к вирусной инфекции. За последние годы в этом направлении был сделан заметный рывок, что напрямую связано с более детальным пониманием организации генома и функционирования вирусных генов. В настоящее время для получения растений, устойчивых к вирусной инфекции, с помощью генно-инженерных технологий существует ряд подходов, позволяющих получить трансгенные растения, трансформированные геном белка оболочки вируса, что приводит к уменьшению инфицированности и ингибированию размножения вируса. Таким методом были получены растения табака и картофеля, трансформированные геном белка оболочки вируса табачной мозаики, что привело к появлению стойкого антивирусного эффекта у трансгенных растений. [c.73]

Размножению некоторых пикорнавирусов животных (вирусов полиомиелита, энцефаломиокардита, ящура), а также бактериофагов класса f2 уделялось очень много внимания. Хуже обстоит дело с изучением размножения вирусов растений. Объясняется это тем, что работа с растительной тканью сопряжена со многими неудобствами технического характера, да к тому же трудно получить равномерно инфицированный материал [46, 413]. Однако нет оснований ожидать, что репликация вирусов растений принципиально отличается от репликации сходных вирусов бактерий и животных. [c.237]

Вирусы впервые были описаны как болезнетворные агенты, которые размножаются только в клетках и имеют настолько малые размеры, что способны проходить через ультратонкие фильтры, задерживающие самые мелкие бактерии До появления электронного микроскопа природа их оставалась неясной, хотя уже тогда высказывалось мнение, что это, возможно, просто гены, которые приобрели способность переходить из одной клетки в другую. В 1930-х годах использование ультрацентрифуги сделало возможным отделение вирусов от компонентов клетки-хозяина. В результате уже в начале 1940-х годов стало более или менее ясно, что все вирусы содержат нуклеиновые кислоты. Это укрепило исследователей в мысли, что вирусы и генетический материал выполняют сходные функции. Подтверждение такой точки зрения было получено при изучении вирусов бактерий (бактериофагов). В 1952 г. удалось показать, что в клетку бактерии-хозяина проникает одна только ДНК бактериофага (без его белка) и что именно она инициирует здесь процесс репликации, приводящий в конечном счете к появлению в инфицированной клетке нескольких сотен дочерних вирусных частиц. Таким образом, вирусы можно рассматривать как генетические элементы одетые в защитную оболочку и способные переходить из одной клетки в другую. Размножение вирусов само по себе часто оказывается летальным для клетки, в которой оно происходит. Многие вирусы разрушают инфицированную клетку (вызывают ее лизис), что и дает возможность потомству вируса переходить в соседние клетки. Клинические симптомы вирусной инфекции во многих случаях отражают именно эту цитолитическую способность вируса Высыпание при [c.314]

По существу для характеристики штаммов, циркулирующих среди животных, могут быть использованы те же методы, которые применяются нри изучении вирусов гриппа человека. Особо следует отметить олигонуклеотидное картирование РНК [14], изучение последовательностей РНК и клонированных генов [1, 18], картирование пептидов, изучение белков и РНК в геле [23, 49], а также серологические методы [52, 55], которые успешно применяли для дифференцировки вирусов гриппа животных. Однако-эти вирусы изучены в меньшей степени, чем штаммы, выделенные от людей. Это относится не только к сведениям о структуре вирусов, но также к эпидемиологическим особенностям животных штаммов, патогенезу и иммунному ответу инфицированных животных. Будущие исследования, несомненно, будут направлены на выяснение некоторых из этих вопросов. Представляется воз- [c.318]

Для изучения кривой роста вирусов проводится одноэтапный цикл роста. Применяется высокая множественность заражения. (МЖ), чтобы быть уверенным в заражении всех клеток. Обычно бывает достаточным применять 10 бляшкообразующих единиц (БОЕ) на клетку. Для получения вирусов фазу инфицирования удлиняют в условиях, обеспечивающих вторичное заражение в этом случае рекомендуется низкая МЖ, особенно когда имеет место тенденция к образованию дефектных вирусных частиц. [c.199]

Активность при хронической инфекции. Изучению особенностей метаболизма растений, выращенных из больных клубней, уделяется значительно меньше внимания, чем метаболизму первично инфицированных растений. В растениях картофеля с хронической инфекцией вирус Ь [c.60]

Изучение ЦПД вирусов. Для исследования клеток пробирку помещают на предметный столик микроскопа так, чтобы монослой находился сверху. Местоположение монослоя клеток в пробирке определяют по черте, предварительно проведенной карандашом на противоположной стороне. Морфологические изменения клеток выявляют при микроскопическом исследовании пробирки с культурой с помощью объектива 8 при опущенном конденсоре и прикрытой диафрагме. При сравнении клеточного монослоя, инфицированного вирусом, с незараженными клетками в контрольной пробирке отмечают полное или островковое разрушение пласта клеток или другие изменения, которые характеризуют ЦПД вируса. [c.61]

Разработка метода бляшек для вирусов гриппа в клетках фибропластов куриного эмбриона ( EF) [111 117] позволила идентифицировать одношаговые мутанты и установить частоту реверсии [117]. Она привела также к подтверждению более ранних исследований по кросс-реактивации вируса, инактивированного УФ-луча-ми [4, 19, 32, 64J, и, что особенно ван<но, к основанию методов клонирования некоторых бляшкообразующих штаммов вируса 1111]. Позднее использование перевиваемых человеческих клеточных линий расширило перечень вирусов, для изучения которых можно было применять метод бляшек и готовить рекомбинанты, различающиеся по типу образующихся бляшек [121, 122]. Только значительно позднее было установлено, что загадочная неспособность вирусов гриппа образовывать бляшки обусловлена главным образом необходимостью обязательного расщепления вирусного НА эндогенными протеазами клетки хозяина, без чего невозможны инфицирование клетки и репликация вируса [67, 76]. Возможность применения только тех нескольких вирусов (в основном WSN и RWS — вариантов оригинального штамма WS), которые образовывали отчетливые бляшки, значительно ограничивала проведение генетических экспериментов. К настоящему времени установлено, что образование бляшек вирусом WSN, по крайней мере [c.15]

В ответ на инфицирование вирусами, бактериями и грибами индуцируются специфические PR-белки (pathogenesis related proteins), в том числе и наиболее изученные хитиназы и Р-1,3-глюканазы. Эти ферменты ингибируют рост грибов, а также некоторых видов бактерий. [c.72]

Наиболее тонко процесс раздевания изучен у вируса оспы [245, 265]. В опытах с клетками НеЬа показано, что первая стадия раздевания , на которой происходит отщепление всех фосфолипидов и большинства белков, начинается сразу после инфицирования клеток. К концу этого процесса сердцевина вируса остается еще нетронутой и ДНК все еще бывает защищена от действия ДНК-азы. После лаг-периода, длите.льность которого в зависимости от множественности инфекции может доходить до 1 ч, наступает вторая стадия раздевания теперь уже до 70% вирусной ДНК оказывается не защищенной от действия ДНК-азы, добавленной в клеточные экстракты. Тем не менее внутри клетки-хозяина такая вирусная ДНК не деградирует в течение нескольких часов. [c.230]

Механизм действия репликаз мелких РНК-содержащих вирусов точно еще не изучен. Можно было бы предположить а priori, что в результате каждого акта репликации образуются полностью двухцепочечные молекулы. Такие двухцепочечные формы уже были обнаружены в клетках, инфицированных РНК они получили название репликативных форм (РФ). Кроме того, получены многочисленные данные о существовании таких молекул, в которых РНК лишь частично имеет двухцепочечный характер (репликативная промежуточная форма, РПФ). Были предложены схемы, объясняющие появление РПФ в результате одновременного образования многочислен--ных комплементарных копий, которые последовательно вытесняют друг друга с одной и той же матричной моле- кулы [206]. Схематическое изображение этого механизма [c.240]

В предлагаемой этапной схеме для успешного выделения вирусов важен способ забора проб воды. Наиболее распространен в настоящее время метод, предложенный Мур [101]. Автор рекомендует опускать в сточную жидкость стерильные ватно-марлевые подушечки. При этом микроорганизмы адсорбируются на тампонах, т. е. отбор проб воды проводится одновременно с первичной концентрацией, что упрощает исследование и повышает возможности выделения возбудителей. Простота и высокая эффективность метода Мура при изучении иифициросан-ности вирусами бытовых сточных вод подтверждена санитарными исследованиями и экспериментальными работами. Однако для изучения степени инфицирования вирусами воды открытых водоемов применение метода Мура недостаточно эффективно. Такие же результаты были получены при попытке выделить энтеровирусы из водопроводной воды или аналогичных вод, в которых концентрация вирусов значительно ниже, чем в бытовых сточных водах. [c.69]

Резюмируя изложенное, следует указать, что методы количественного определения инфицированности воды вирусами достаточно сложны. Для исследования воды с низким содержанием вирусов (из поверхностных водоемов, различных сооружений по очистке и обеззараживанию питьевой воды и т. п.) они не разработаны. Это обстоятельство лишает исследователей возможности характеризовать не только степень инфицированности, но и эффективность методов очистки и обеззараживания воды, содержащей вирусы. Анализ приведенных данных убеждает также, что для разработки методов исследования инфицированности воды вирусами наиболее перспективным является изучение возможности использования адсорбционных и седиментациоп1 Ых процессов. [c.73]

Особым образом ведут себя опухолевые РНК-вирусы проникновение их в пермиссивиую клетку часто ведет одновременно и к нелетальному для клетки высвобождению дочерних вирусных частиц (отпочковывающихся от клеточной поверхности), и к стойкому генетическому изменению в инфицированной клетке, которое превращает эту клетку в раковую. Как может заражение вирусом вызвать стойкое генетическое изменение, было непонятно до тех пор. пока не был открыт фермент обратная транскриптаза с помошью которого пепи инфицирующей РНК этих вирусов транскрибируются в комплементарные им цепи ДНК. Опухолевые РНК-вирусы, к которым относится первый хорошо изученный опухолевый вирус, а именно вирус саркомы Рауса, являются представителями крупного класса вирусов, так называемых ретровирусов. Название это отражает тот факт, что часть их жизненного цикла составляет процесс, обратный нормальной транскрипции, т. е. транскрипции ДНК в РНК. К ретровирусам относгггся и вирус СПИДа (спонтанно приобретенного иммунодефицита). [c.320]

Бактериальные вирусы делят на вирулентные, при инфицировании которыми все зараженные клетки гибнут с высвобождением новых фаговых частиц, и умеренные, вызывающие либо лизис инфицированных бактерий с высвобождением потомства новых фагов, либо их лизо-генизацию [4]. В лизогенном состоянии фаговый геном, называемый уже профагом, реплицируется синхронно с бактериальной хромосомой в форме плазмиды или включаясь в хромосому. Несмотря на то что вирулентные фаги и вирулентные мутанты умеренных фагов способны к трансдукции, в природе основной приток генов в бактерии за счет трансдукции обусловлен лизогенными умеренными фагами, которые представляют собой наиболее простые системы для изучения. [c.80]

Для проведения полноценных генетических экспериментов необходимо, чтобы вирус был способен к бляшкообразованшо на используемых клетках хозяина. Это требование в значительной степени ограничило изучение ts-мутантов вируса гриппа использованием штамма WSN при инфицировании фибробластов куриного эмбриона [94, 141, 142, 248] или клеток MDBK [260, 261] рекомбинанта Х-3311 (на основе штамма NWS-A1, репродуцированного на хорион-аллантоисной мембране), образующего бляшки в клеточной линии человеческой конъюнктивы 1-5С-4 [271] птичьего вируса гриппа А (FPV), репродуцированного в фибробластах куриного эмбриона [9, 150, 222] некоторых человеческих вирусов — кандидатов в вакцинные штаммы, выращенных на первичных клетках почки цыпленка, обезьяны или быка [137, 159]. Совсем недавно в качестве хозяина для выращивания человеческих вакцинных штаммов были использованы также клетки MD K [117, 243, 244, 245]. [c.188]

Седьмой сегмент РНК кодирует матричный (М) полипептид (м.м. 28 ООО) — наиболее обильную белковую часть вириона, а также один или, возможно, два дополнительных полипептида с неизвестными функциями. Изучение последовательности этого сегмента у вирусного штамма PR8 выявило две открытые рамки считывания [3, 279], которые были также обнаружены в сегменте 7 РНК вируса FPV [155] и A/Udorn/72 (H3N2) [131]. Однако анализ сегмента 7 вирусспецифической РНК в клетках, инфицированных вирусом, показал, что имеются не две, а три мРНК, произведенные [c.228]

Два подхода должны оказаться очень полезными в дальнейших исследованиях с использованием мутантов вируса гриппа. Во-первых, первичное повреждение у большого количества нетекущих мутантов с повреждениями в отдельном сегменте РНК генома вируса гриппа должно быть установлено при тщательном изучении каждой из установленных стадий репликационного цикла. Использование коров для сравнения in vitro активностей вирионной транскриптазы ts-мутанта и вируса дикого типа должно оказать существенную помощь в расшифровке данных по инкубации при ограничите.11ьной температуре [274]. Недавно разработанные методы, в которых используются клонированные копии индивидуальных сегментов РНК [264], могут быть применены для проведения более прямого анализа фенотипа РНК но сравнению с тем, чтО было возможно до настоящего времени. И наконец, применение метода двухмерного электрофореза в геле в сочетании с изоэлектрическим фокусированием или электрофорезом в неравновесном градиенте pH дает значительные преимущества в характеристике изменений фенотипа в клетках, инфицированных мутантным ви- [c.240]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология