Гемолитические пятна

Можно воспользоваться двумя типами культур 1) обычными культурами в объеме 1 мл и 2) микрокультурами (см. гл. 27). Иммунный ответ определяют через различные интервалы времени. В культурах первого типа подсчитывают число АОК. дающих прямые (IgM) и непрямые (IgG) зоны гемолиза. Ответ культур второго типа оценивают методами гемолитического пятна или локального гемолиза. [c.346]

Пробы надосадочной жидкости из микрокультур, оцененных методом гемолитического пятна как положительные, помещают [c.351]

Стекла переносят на охлаждаемую поверхность и оставляют на 1—2 мин, затем, перевернув, их вкладывают в специальные люцитовые лотки, углубление которых заполняют истощенным БЭ комплементом морской свинки, разведенным в МСИ 1 10. Расположение гемолитического пятна определяют после 2,5-часовой инкубации во влажной атмосфере СОг-термостата. [c.352]

А. Реакция гемолитического пятна [c.377]

Когда ответ оценивают по числу антителообразующих клеток (в обычных культурах и микрокультурах), определение следует проводить в момент его максимального проявления. Реакция гемолитического пятна измеряет антитела, накопившиеся в культуральной жидкости, поэтому эта реакция будет положительной, если даже клон прекратил свое существование. В какое бы время культивирования ни образовались антитела, они могут быть обнаружены данной реакцией. Благодаря этому учет результатов при необходимости можно отложить на несколько дней после пика антителообразования, что является одной из удобных особенностей метода. [c.381]

Для выделения отдельных клонов гетерогенные смеси гибридных или лимфоидных опухолевых клеток высевают в мягкий агар (о получении линий гибридных клеток см. гл. 31). Клоны, образующие антитела к БЭ, выявляют по гемолитическим пятнам, возникающим в слое агара с эритроцитами. [c.407]

Такого рода таблицы называют таблицами взаимной сопряженности 2X2 (четырехпольными таблицами). По данным первого опыта, в трех микрокультурах ответ зарегистрирован обоими методами, в двух — только методом гемолитического пятна, и не было микрокультуры, в которой ответ обнаруживался бы при оценке методом локального гемолиза, но не выявлялся методом гемолитического пятна, В 55 лунках ответ не обнаружен ни одним из методов. В общем виде четырехпольную таблицу можно записать так [c.457]

При одной степени свободы полученной величине соответствует вероятность Р в интервале 0,1—0,2. В связи с этим мы заключаем, что связь между результатами, полученными с помощью методов локального гемолиза и гемолитического пятна, для этой панели статистически незначима. [c.458]

В эксперименте 1 мы нашли, что Щ=0,76. Отсутствие полной связи ( = 1) обусловлено тем, что микрокультуры в-двух лунках оказались отвечающими при испытании методом гемолитического пятна и неотвечающими при оценке методом локального гемолиза. В эксперименте 2 г=0,06, т. е. связь между двумя оценками отсутствует. [c.461]

На рис. 1 приведен пример выделения гибридных клеток, секретирующих IgM-антитела к БЭ. Такие клетки составляют около 3% всей популяции гибридов. На рис. 1,а можно видеть прямые зоны гемолиза (темные пятна), образованные единичными клетками среди 6000 гибридных клеток, засеянных в слой агара. На рис. 1,6 представлены клоны (белые точки), выросшие в мягком агаре в течение 10 дней из 2000 засеянных жизнеспособных клеток. Эффективность образования клонов составила около 50% 33 клона вызывали прямой гемолиз БЭ (зоны гемолиза в виде темного ореола) в нанесенном сверху слое агара с эритроцитами. Один из положительных клонов извлекли из агара и культивировали далее в жидкой среде, затем собрали и вновь клонировали. На рнс. 1, в можно видеть, что фактически каждый из полученных при этом клонов проявляет гемолитическую активность. На рис. 1, г такой клон показан при большем увеличении. [c.409]

Все микрокультуры содержат по 5-10 облученных аллогенных клеток. Облученные и необлученные (активные) селезеночные клетки мыщей nude смещи-вают в различных соотнощениях, чтобы в итоге в каждой лунке находилось 1,5-10 клеток. По оси абсцисс — число активных селезеночных клеток (от мыщей nude), вносимых в каждую микрокультуру по оси ординат — доля неотвечающих микрокультур (—Info). Каждая точка на графике найдена на основании реакции гемолитического пятна в 180 микрокультурах (три паиели для микрокультивирования). Около 3-10 активных В-клеток на лунку дают 37% отрицательных микрокультур (частота предшественников В-клеток /=3,310-5). [c.375]

Если клоны малочисленны (от двух до пяти антителообразующих клеток), то реакция гемолитического пятна может дать ложный отрицательный результат. В этих случаях необходимо исследовать АОК в каждой из лунок. Об этом особенно важно помнить, когда анализируют ответ на некоторые тимус-независи-мые антигены. Обычные тимус-зависимые антигены, как правило, [c.377]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология