Локального гемолиза метод

В 60-х годах были достигнуты важные успехи, открывшие новые пути изучения В-клеток. Первым из ннх была разработка метода локального гемолиза, который позволил идентифицировать и подсчитывать индивидуальные В-клетки, вырабатывающие антитела к определенному антигену. В простейшем варианте этого метода берут лимфоциты (обычно из селезенки) у животного, иммунизированного бараньими эритроцитами (БЭ). Их помещают затем в агар вместе с избытком Ю. В результате на чашке получается газон из иммобилизованных БЭ с вкраплением лимфоцитов. В этих условиях клетки не могут передвигаться, но любые выделяемые В-клеткой антитела будут диффундировать и покрывать поверхность всех БЭ, находящихся поблизости. Такие покрытые антителами эритроциты можно лизировать, добавив комплемент (разд. 17.5). Таким образом, присутствие каждой выделяющей антитела клетки обнаруживается по прозрачному пятну ( бляшке ) в темном слое БЭ. Аналогичный метод можно использовать для подсчета клеток, вырабатывающих антитела к другим антигенам, таким как белки или полисахариды, если присоединить эти антигены к поверхности бараньих эритроцитов. [c.20]

В 60-х годах были достигнуты успехи, открывшие новые пути изучения В-клеток. Первым из них была разработка метода локального гемолиза, [c.229]

Связывание комплемента иммунным комплексом, содержащим эритроциты, нашло широкое применение для обнаружения клеток, синтезирующих антитела. Метод локального гемолиза в геле, предложенный [c.260]

Имеется в виду метод обратного пассивного локального гемолиза эритроцитов, нагруженных белком А. — Прим. ред. [c.261]

МЕТОДОМ ЛОКАЛЬНОГО ГЕМОЛИЗА [c.238]

Метод локального гемолиза в геле [c.53]

ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИТЕЛООБРАЗУЮЩИХ КЛЕТОК МЕТОДОМ ЛОКАЛЬНОГО ГЕМОЛИЗА В ГЕЛЕ [c.288]

Рис. 1. Схема определения антителообразующих клеток в реакции локального гемолиза. Вверху — стандартный метод, внизу — модификация Каннингема.

Е. Непрямой метод локального гемолиза [c.295]

Для доказательства того, что антиген не стимулирует пролиферации В-клеток, необходимо включить следующие контроли а) предварительную обработку клеток лимфатических узлов сывороткой анти-Thy-1.2 с комплементом (в этом случае следует ожидать, что включение тимидина не превысит фонового уровня) б) определение в культуре антиген-специфических антителообразующих клеток методом локального гемолиза (следует ожидать незначительного фонового уровня) в) окрашивание стимулированных клеток конъюгированной с флуоресцеином сывороткой к мышиному Ig (пролиферирующие клетки должны быть Ig-). [c.324]

Можно воспользоваться двумя типами культур 1) обычными культурами в объеме 1 мл и 2) микрокультурами (см. гл. 27). Иммунный ответ определяют через различные интервалы времени. В культурах первого типа подсчитывают число АОК. дающих прямые (IgM) и непрямые (IgG) зоны гемолиза. Ответ культур второго типа оценивают методами гемолитического пятна или локального гемолиза. [c.346]

При сборе клеток параллельные 1-миллилитровые культуры объединяют. Клетки один раз отмывают в СР и ресуспендируют в 0,5 мл МСИ. Число АОК, дающих прямые (IgM) и непрямые (IgG) зоны гемолиза определяют с помощью модифицированного метода локального гемолиза в геле, описанного в гл. 19. [c.350]

Такого рода таблицы называют таблицами взаимной сопряженности 2X2 (четырехпольными таблицами). По данным первого опыта, в трех микрокультурах ответ зарегистрирован обоими методами, в двух — только методом гемолитического пятна, и не было микрокультуры, в которой ответ обнаруживался бы при оценке методом локального гемолиза, но не выявлялся методом гемолитического пятна, В 55 лунках ответ не обнаружен ни одним из методов. В общем виде четырехпольную таблицу можно записать так [c.457]

При одной степени свободы полученной величине соответствует вероятность Р в интервале 0,1—0,2. В связи с этим мы заключаем, что связь между результатами, полученными с помощью методов локального гемолиза и гемолитического пятна, для этой панели статистически незначима. [c.458]

В эксперименте 1 мы нашли, что Щ=0,76. Отсутствие полной связи ( = 1) обусловлено тем, что микрокультуры в-двух лунках оказались отвечающими при испытании методом гемолитического пятна и неотвечающими при оценке методом локального гемолиза. В эксперименте 2 г=0,06, т. е. связь между двумя оценками отсутствует. [c.461]

Тематика восемнадцати глав настоящего тома в известной мере отражает основные тенденции развития современной иммунологии. В семи главах в центре внимания находятся моноклональные антитела и антигены клеточной поверхности три главы посвящены использованию новейших достижений техники разделения биологических макромолекул и изучения поверхностных явлений в иммунологических взаимодействиях далее описаны новые, усовершенствованные варианты ряда известных экспериментальных подходов (методика гаптенизирова шых антител, выделение и клонирование Т-хелперов, определение хелперных факторов, обратный пассивный локальный гемолиз, метод лимитирующих разведений) в трех главах представлены новые методы клинической иммунологии (типирование HLA DR-антигенов, выявление антител к ДНК, оценка первичного иммунного ответа лимфоцитов человека in vitro). [c.5]

Благодаря специфичности антител к определенному аллотипу иммуноглобулинов метод обратного локального гемолиза позволяет обнаруживать только В-клетки, возникающие из клеток-предшественников мышей BALB/ . Несмотря на это, мы все же исследовали вопрос о том, может ли популяция прикрепившихся клеток костного мозга .AL20 вносить свой вклад в возникновение В-лимфоцитов. В эксперименте, проиллюстрированном на рис. 14-2, клетки-предшественники мышей [c.252]

Клетки из культур или из селезенок иммунизированных лягушек осаждают в течение 30 с при 10 000 g в центрифуге фирмы Eppendorf. Супернатанты сохраняют для анализа на содержание антител. (За 24 ч до проведения анализа методом локального гемолиза культуральную среду в лунках панелей заменяют свежей, чтобы в день определения клетки находились в свежей среде, не содержащей антигена.) Клетки суспендируют в 80 мкл раствора ЗФР, изотонического в отношении клеток. [c.502]

СЕКРЕТИРУЮЩИХ ИММУНОГЛОБУЛИНЫ, МЕТОДОМ ОБРАТНОГО ПАССИВНОГО ЛОКАЛЬНОГО ГЕМОЛИЗА ЭРИТРОЦИТОВ, НАГРУЖЕННЫХ БЕЛКОМ А Staphylo o us aureus [c.214]

В лунки панели ostar вносят по 2,5 мл среды, а затем паиель накрывают стерильной пластинкой со вставками и в каждую вставку вносят по 200 мкл взвеси, содержащей 1,5 10 живых спленоцитов в 1 мл, нужное количество антигена и исследуемый хелперный фактор. Панель накрывают крышкой и культуры помешают на 4 дия в термостат при 37 X во влажную атмосферу с СОд. В конце культивирования содержимое вставок исследуют методом пассивного локального гемолиза по Канинигему и определяют число АОК. [c.237]

Хелперную активность культуральной жидкости можно определить также в Ьмнллилитровых приборах Марбрука. В этом случае во внутреннюю камеру вносят 10 живых клеток селезенки и соответствующее количество аитнгеиа и хелперного фактора. Культуру инкубируют 4 дня и методом пассивного локального гемолиза определяют число АОК- Следует отметить, что число АОК иа культуру в малых (200 мкл) и средних (1 мл) приборах Марбрука получается примерно одинаковым, т. е. помимо явной экономности, малый прибор обеспечивает в 3—5 раз большую эффективность при индукции образования антител. Причины этого пока неясны. [c.237]

ЖИВЫХ снленоцитов в 1 мл, 0,3 мкг/мл ДНФ-KLH и соответствующие разведения хелперного фактора в среде RPMI 1640 с СПК. Панели герметически закрывают в пластиковых коробках, заполненных воздухом с 5% СОг, и помещают на 4 дия в термостат на качающуюся платформу при 37 С. После этого извлекают клетки и определяют число АОК методом пассивного локального гемолиза. [c.238]

Для определения числа клеток, секретирующих 1 М-антите-ла к дииитрофеинльному гаптену, пользуются методом локального гемолиза по Каннингему. [c.238]

В-клеточиый ответ, количественно оцениваемый методом локального гемолиза, необходимо исследовать неоднократно, день за днем, так как только полный кинетический профиль позволяет определить, сколько отвечающих клеток содержится в культуре и возрастает ли их число. [c.247]

Рис. 4. Число клеток, синтезирующих IgM, IgG, и IgA, в се,1езенке (белые кружочки) и в костном мозгу (черные кружочки) мышей ( 57BLX BA) Fi после внутривенных инъекций бараньих эритроцитов. Мышей прнмировали, вводя 10 БЭ, и повторно иммунизировали через три месяца (4-10 БЭ). Треугольники означают, что превышение числа клеток, образующих IgA, над числом клеток, образующих IgM (выявляемое непрямым методам локального гемолиза), было недостоверным.

Глава 9. Определение клеток. секретирующих иммуноглобулины методом обратного пассивного локального гемолиза эритро цитов. нагруженных белком А Sfaphylo o us aureus (Р. Бер [c.346]

Вопрос О ТОЧНОСТИ метода был детально рассмотрен Ерне и сотр. (Jerne et al., 1974), и они пришли к выводу, что, помимо неустранимых ошибок выборки, правильно поставленные опыты локального гемолиза имеют ошибку метода, которая увеличивает дисперсию на 0,0044Р (Р — число подсчитанных зон) (Примечание 19). Чтобы сохранить точность метода на одном уровне, в опытах с уменьшением зон гемолиза следует увеличить число параллельных чашек в тех случаях, когда ожидается малое число зон, т. е. в области более высоких концентраций ингибитора. [c.55]

Метод локального гемолиза в геле применяется для подсчета и изучения отдельных аитителообразующих клеток в тех случаях, когда имеется лишь очень небольшое число их среди миллионов клеток, не образующих антител. [c.288]

Смотреть страницы где упоминается термин Локального гемолиза метод: [c.6] [c.248] [c.252] [c.261] [c.463] [c.463] [c.502] [c.120] [c.214] [c.217] [c.217] [c.218] [c.241] [c.244] [c.271] [c.274] [c.53] [c.54] [c.288] [c.457] [c.118]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология