Культуры клеток тогавирусов

Методы, используемые для определения инфекционности, зависят от имеющегося оборудования, конкретного вида вируса и характера данных, которые должны быть получены. Так, например, в некоторых странах заражение новорожденных мышат является более удобным и дешевым способом титрования инфекционности арбовирусов, чем заражение культур клеток комаров, в то время как в других странах ситуация противоположная. Кроме того, в тех случаях, когда нужна максимальная точность, используют линии клеток комаров. С другой стороны пока не доказано, что все тогавирусы способны размножаться в этих клетках. [c.66]

Показано, что во многих случаях культуры клеток беспозвоночных более чувствительны к альфа- и флавивирусам, чем новорожденные мышата или культуры клеток позвоночных В особенности это относится к первичному выделению вирусов Если в лаборатории имеются условия для культуральной ра боты, клетки беспозвоночных можно легко нарастить и исполь зевать для постоянной работы с тогавирусами. Для некоторых линий клеток комаров характерна высокая чувствительность к переносимым комарами альфа- и флавивирусам [3, 4], причем многие из этих вирусов способны образовывать бляшки, хотя результаты, по-видимому, до некоторой степени зависят от конкретных условий эксперимента [5], Если какой-либо конкретный метод не дал хороших результатов, имеет смысл попытаться применить другой. Например, обычно клетки комаров для культивирования и выделения вирусов инкубируют при 27—28°С, но в случае вируса денге лучшие результаты получают при повышении температуры до 32 °С [6]. Имеется ряд стандартных клеточных линий, и если размножение вируса не удается в одной из них, имеет смысл испытать другую. Подробные сведения об используемых средах приведены в при ложе- [c.73]

Недавно была сконструирована полная клонированная ДНК — копия позитивного РНК-генома вируса полиомиелита путем соединения трех частичных клонов генома этого вируса [152]. Существенно, что данная ДНК инфекционна для культуры обезьяньих и человеческих клеток. Это важное наблюдение позволяет предположить, что клетка распознает соответствующие контрольные сигналы клонированной ДНК вируса полиомиелита и использует эти сигналы для транскрипции полной плюс-цепи РНК, которая инициирует нормальный цикл инфекции. Создание делеционных мутантов вируса полиомиелита и других пикорнавирусов, а также других РНК-содержащих вирусов с позитивным геномом, таких как тогавирусы, должно быть относительно простым, потому что измененная клонированная ДНК может быть непосредственно перенесена в инфекционный вирус путем трансфекции культуры клеток. Таким образом, жизнеспособные делеционные мутанты могут быть идентифицированы и затем оценены в отношении аттенуации и иммуногенности. [c.177]

Рйс. 3.5. Действие тогавируса на моиослойную культуру клеток ковров (линия АР61). а — кон- РЯ ая незараженная культура О —гигантский синцитий, возникли в результате слияния мембран удельных клеток в — округлившиеся клетки, которые могут отделиться от субстрата [c.75]

Данный метод основан на использовании F -рецепторов, имеющихся на поверхности выращиваемых в культуре человеческих или мышиных макрофагов [10]. Вирус, не адсорбировавшийся на клеточной поверхности, может проникнуть в цитоплазму в результате образования комплексов с вирус-специ-фическими антителами. Комплексы антиген антитело связываются с F -рецепторами, и в результате этого повышается инфекционность вирусного препарата. Использование этого явления особенно полезно при работе с моноклональными антителами, так как удается идентифицировать антитела, реагирующие с поверхностью вириона. С помощью этого метода можно получить данные трех типов о повышении инфекционности вируса в присутствии антител, о титре нейтрализующих антител и о стандартной инфекционности вируса. Многие тогавирусы размножаются в макрофагах мыши (линия Р388 D1), имеющих на поверхности F -рецепторы. Эти клетки хорошо прикрепляются к поверхности культуральных сосудов, поэтому с ними можно работать, как с обычными культурами клеток. [c.89]

Выделение и культивирование тогавирусов не представляет принципиальных трудностей благодаря значительному разнообразию возможных экспериментальных систем. Для молекулярно-биологических исследований, как правило, необходим вирус в очень высоком титре. В случае альфавирусов подобные титры можно получить на культуре клеток. С другой стороны, многие флавивирусы дают в культуре более низкие титры, и это может потребовать соответствующей модификации условий эксперимента. Например, относительно высокой множественности инфекции достигают, выращивая клетки в виде монослоя на поверхности небольших культуральных сосудов. [c.105]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология