РНК, плюс-цепь

И бактериальные гены, а вслед за ними и гены фактора F переносятся в женскую клетку. Согласно существующим представлениям, из клетки-донора в клетку-реципиент переходит (возможно, через Р-ворсинку) лишь одна из цепей ДНК, обычно обозначаемая как плюс -цепь (рис. 15-2). В клетке-реципиенте синтезируется комплементарная ми-нус -цепь, в результате чего образуется двухцепочечная молекула ДНК, несущая гены из Hfr-клетки. Только в редких случаях плюс -цепь до-норной клетки переходит в женскую клетку полностью. Чаще всего цепь ДНК или сама ворсинка разрываются, и происходит перенос лишь части хромосомы. [c.191]

ВИЧ-1 Одноцепочечная РНК (плюс-цепь) 13 [c.113]

Одноцепочечная РНК (плюс-цепь) 3 [c.113]

М13 Одноцепочечная ДНК (плюс-цепь) 8 [c.113]

РИС. 15-2. Интеграция фактора F с бактериальной хромосомой и перенос иекоторызе бактериальных генов в другую клетку. А. Включение фактора F в геном Е. соИ и перенос плюс -цепй ДНК в женскую клетку-реципиент. Б. Генетическая рекомбинаци между фрагментом перенесенной ДНК и геномом клетки-рецнпиента. [c.190]

Репликация одноцепочечного фага должна протекать в две стадии. Сначала на содержащейся в фаговой частице плюс-цепн образуется. комплементарная минус-цепь. Для инициации этой стадии необходимы еще один бактериальный белок, а именно фактор HF , и GTP. Образующиеся минус-цепи не остаются связанными с плюс-цепями. Они, по-внди-мому, освобождаются от репликазы в одноцепочечной форме и складываются, образуя высокоупорядоченные молекулы с большим числом шпилек. (Как и в случае плюс-цепей РНК фага MS2, показанных на рис. 15 19.) Далее минус-цепи копируются (фактор ИР для этого не нужен), образуя большое число новых плюс-цепей, которые включаются в готовые фаговые частицы. [c.245]

Известно, что для инициации процесса репликации ДНК фага ФХ необходимо наличие в геноме фага специфического гена А. Недавно было показано, что этот ген детерминирует синтез белка с мол. весом 56 000 — специфической эндонуклеазы надрезающей вирусную цепь RF-формы, что необходимо для начала процесса репликации [209]. По-видимому, после появления такого разрыва стимулируется синтез небольшого участка РНК-затравки. Репликация ДНК протекает в большинстве случаев в двух направлениях (разд. Д,2), однако репликативная форма Ф X образуется, вероятно, только в одном направлении по механизму разматывающегося рулона (rolling ir le) [210]. В соответствии с этим механизмом [уравнение (15-9)], по мере того как вновь образующаяся цепь вирусной ДНК синтезируется вдоль комплементарной (минус) цепи-матрицы, исходная вирусная ДНК (плюс-цепь) вытеснется в виде одноцепочечного хвоста . [c.278]

Существует четыре типа вирусных нуклеиновых кислот одно-и двунитевые как РНК, так и ДНК. Двунитевая ДНК вирусов реплицируется в основном таким же способом, как бактериальная. Вирусы, содержащие однонитевую ДНК, типа бактериофага ФХ 174, начинают свой жизненный цикл впрыскиванием своей кольцевой ДНК в клетку хозяина, бактерии Е. соИ, в которой инфекционная плюс -цепь действует как матрица для построения комплиментарной минус -цепи, что приводит к образованию кольцевого дуплекса. После этого новая копия плюс -цепи постепенно сворачивается и разрезается на отрезки идентичной длины перед пединением 3 - и 5 -концов в замкнутое однонитевое кольцо. [c.200]

Рис. 8.1. Олигонуклеотид-направленный мутагенез. Одноцепочечную ДНК фага М13 (плюс-цепь), несущую ген-мишень, отжигают с комплементарным синтетическим олигонуклеотидом, содержащим одно основание, не комплементарное соответствующему основанию исходной ДНК. Олигонуклеотид служит затравкой для синтеза ДНК, а М13-вектор с встроенным геном — матрицей. Репликацию катализирует фрагмент Кленова ДНК-полимеразы 1 Е. oli. Синтезированную полноразмерную цепь замыкает в кольцо ДНК-лигаза Т4. Образовавшимися двухцепочечными молекулами трансформируют Е. соИ. Часть фаговых частиц содержит ДНК дикого типа, часть — мутантную ДНК.

Для вирусов, вирионы которых содержат однонитевую ДНК, первой стадией репликации является синтез в инфицированной клетке комплементарной цепи, т.е. образование двунитевой репликативной формы ДНК. При этом цепь ДНК, входящая в вирион, называется плюс-цепью, а создаваемая на ней, как на матрице, комплементарная ДНК - минус-д епью. Инициация и элонгация синтеза ми-нус-цепи идут с участием ферментов клеток хозяина. Механизмы инициации достаточно разнообразны. Например, при синтезе минус-цепи ДНК фаг-а tpX 174 в инициации участвует сложный комплекс белков, включающий праймазу. ДНК фага М13 имеет специальную шпильку, стебель которой работает как полноценный двунитевой фрагмент по отношению к РНК- юлймеразе клетки. Поэтому затравка образуется с помощью хозяйской РНК-4Юлимеразы. [c.194]

На минус-цепи, как на матрице, начинается производство новых плюс-цепей. Вначале они преимущественно используются для создания новых репликативных структур. Затем, по мере накопления в клетке структурщлх белков бактериофага, на плюс-цепях начинают формироваться новые фаговые частицы. [c.195]

V освободившимся участком РВ за 3 -конец минус-ДНК. Это дает возможность последней продолжить элонгацию до полного считывания 5 -конца начавшей формироваться плюс-цепи. Одновременно плюс-цепь получает возможность элон-гироваться до достижения 5 -конца минус-цепи. Как видно из схемы, при этом на обоих концах линейной двунитевой ДНК возникают идентичные структуры, известные как длинные концевые повторы (long terminal repeats, LTR), с помощью которых происходит встраивание вирусной ДНК в геном. [c.227]

I - синтез минус-цепи ДНК, содержащий в качестве праймера тРНК 2 - гидролиз РНКазой Н-участка плюс-цепи РНК, содержащего R и U5 3 - первый скачок. Образование дуплекса 3 -конца плюс-цепи РНК и R -фрагмента вновь синтезированной минус-цепи ДНК и начало синтеза минус-цепи ДНК 4 - элонгация синтеза минус-цепи ДНК 5 - образование ника в РНК в точке, прёд-шествующей участку U5 6 - синтез плюс-цепи ДНК и образование U3, R, U5, РВ области, комплементарной U3, R, U5 7- расщепление тРНК-фрагмента минус-цепи РНКазой Н 5 - завершение [c.227]

Одна из наиболее упо фебляемых схем такого мутагенеза приведена на рис. 85. С этой целью исходный ген встраивают в двунитевую репликативную форму ДНК фага М13, зрелые частицы которого содержат однонитевую кольцевую молекулу ДНК (плюс-цепь, см. 5.7). Введение полученной рекомбинантной ДНК в бактериальные клетки приводит к накоплению частиц бактериофага, содержащих однонитевую рекомбинантную ДНК, из которых ее можно выделить и использовать в качестве матрицы для ДНК-полимеразы. Для репликации используют специально сконструированный праймер, который соответствует участку встроенного гена, содержащему кодирующий элемент заменяемой аминокислоты. При этом по обе стороны от этого тринуклеотнда праймер полностью комплементарен рекомбинантной ДНК, а в пределах этого тринуклеотида заменен таким образом, чтобы в образующейся при репликации минус-цепи образовалась запла- [c.305]

В клетках Е. соИ, зараженных фагом MS2, меченным по фосфору, у/ке через несколько минут после заражения образуется меченое соединение, устойчивое к действию РНК-азы [171]. Оно было идентифицировано как двухценочечная репликативная форма РНК фага MS2 (стр. 59 и стр. 161), во-первых, по профилю тепловой денатурации и температуре плавления, во-вторых, по поведению при центрифугировании в градиенте плотности сернокислого цезия и, в-третьих, по локализации радиоактивности в одной из цепей ( плюс -цепь), представляющей родительскую РНК фага MS2. Эта репликативная форма, но-видимому, аналогична репликативной форме ДНК фага фХПА (стр. 214). [c.249]

На основании приведенных данных Очоа и его сотрудники [172, 173] пришли к выводу, что репликация вирусной РНК родительского типа ( плюс цепь) происходит в два этапа. На первом этапе внедряющаяся цепь вирусной РНК действует как т-РНК (стр. 271), т. е. вступает в контакт с рибосомами клетки-хозяина и контролирует образование РНК-зависимой полимеразы и синтез белков вирусной оболочки. С помощью полимеразы на <шлюс -цепи, действующей как матрица, образуются комплементарные минус -цепи, и в результате происходит образование двухцепочечной репликативной формы РНК. [c.250]

Далее, на следующем этапе, эта образовавшаяся двухцепочечная репликативная форма играет роль матрицы при полуконсер-вативном способе образования новых плюс -цепей, которые вытесняют своих двойников из двухцепочечной матрицы (фиг. 85). [c.250]

На родительской плюс -цепи образуется комплементарная минус -цепь. Эта образовавшаяся дшнус -цепь действует затем как матрица, на которой штампуется новая плюс -цень (пунктир), вытесняя исходную плюс -цепь. Процесс затем много раз повторяется, в результате чего образуется целая группа новых плюс -цепей. Исходная родительская плюс -цепь остается неизмененной. [c.250]

Одноцепочечная кольцевая плюс -цепь инфицирующей ДНК фага служит в качестве матрицы для синтеза комплементарной минус -цепи, давая начало двухцепочечной репликативной форме, или РФ. На ранних стадиях заражения РФ реплицируется полуконсервативно и симметрично, в результате чего образуются дочерние молекулы РФ. На поздних стадиях заражения, когда уже присутствуют белковые молекулы фаговых головок, начинается асимметричная репликация молекул РФ. Теперь в качестве матрицы для синтеза дочерней плюс -цепи служит только минус -цепь Р Ф в результате происходит вытеснение старой плюс -цепн из молекулы РФ. Вытесненная плюс -цепь заключается в фаговую головку одной из частиц потомства. [c.276]

Изучение внутриклеточного размножения фага 0X174 позволило создать следующую картину репликации его генетического материала (фиг. 139) при вхождении в клетку-хозяина одноцепочечная кольцевая молекула ДНК родительского фага, или плюо>-цепь, служит сначала в качестве матрицы для синтеза комплементарной минусу>-цепи, в результате чего образуется двухцепочечная кольцевая РФ-структура. Репликация РФ протекает обычным полуконсервативным способом, в соответствии с моделью Уотсона — Крика, так что число РФ-молекул на зараженную клетку возрастает на ранних стадиях латентного периода. Однако на более поздних стадиях, когда в клетке уже имеется определенный пул субъединиц белка фаговой головки, начинается асимметричный процесс репликации ДНК, когда только минус -цепь РФ-кольца служит в качестве матрицы для синтеза комплементарной плюс -цепи. С ростом новой плюс -цепи старая плюс -цепь вытесняется из РФ н заключается в белковую оболочку, превращаясь, таким образом, в одноцепочечный генетический материал зрелой инфекционной частицы фага 0X174. [c.277]

Отсюда можно заключить, что, как и предполагалось, только одна из. двух комплементарных цепей ДНК, а именно минус -цепь, активна в осуществлении гетерокаталитической функции. Транскрипция минус -цепи, очевидно, приводит к образованию мРНК, нуклеотидная последовательность которой идентична нуклеотидной последовательности плюс -цепи, содержащейся в инфекционной частице фага 0X174. [c.397]

В реакционную смесь добавляли меченные радиоактивными изотопами субстраты РНК-полимеразы и исследовали образовавшуюся РНК в опытах по молекулярной гибридизации. Оказалось, что такая синтетическая РНК образует гибридные двойные спирали при совместном отжиге с РФ-ДНК- Она, однако, не образует таких гибридов с плюс -цепью ДНК, выделенной из зрелых частиц фага 0X174. Из этого следует, что РНК-полимераза в реакционной смеси не только образует цепь РНК, комплементарную добавленной к ферменту ДНК, но даже выбирает в качестве матрицы из двух комплементарных цепей РФ-ДНК именно мипус -цепь — ту самую цепь, которая только и активна в реакции транскрипции in vivo. [c.401]

Однако в экстрактах, приготовленных спустя несколько минут, меченая родительская РНК обнаруживается в составе двухцепочечной формы, устойчивой к рибонуклеазе, которая благодаря своей жесткой спиральной конформации имеет более низкую константу седиментации — 145. В экстрактах, приготовленных через 10 мин после начала внутриклеточного развития фага, меченая родительская РНК обнаруживается в составе частично двухцепочечной формы, которая частично чувствительна к рибонуклеазе до обработки рибонуклеазой такая РНК имеет константу седиментации около 305, а после обработки — 148. На основании этих результатов была предложена схема репликации РНК фага 2 (фиг. 233), напэмянаю цая в принципе механизм репликации ДНК фага 0X174. Согласно этой схеме, в начале репликации одноцепочечная родительская РНК ( плюс -цепь) используется в качестве матрицы для синтеза комплементарной минус -цепи в результате образуется двухцепочечная РФ-РНК. Образовавшаяся минус -цепь репликативной формы служит затем в качестве матрицы для синтеза комплементарной плюс -цепи дочерней РНК- Однако задолго до того, как закончится синтез первой дочерней плюс -цепи, на репликативной форме инициируется синтез второй, [c.471]

Таким образом, РП состоит из устойчивого к РНКазе ствола двуспиральной РНК и нескольких боковых хвостов одноцепочечных РНК, Эта структура, будучи намного тяжелее РФ, седиментирует гораздо быстрее ее, но после расщепления поддействием РНКазы одноцепочечных боковых хвостов РНК она превращается в форму, похожую на РФ. После завершения синтеза дочерней плюс -цепи и освобождения ее из состава РП она люжет быть использована либо в качестве матрицы для синтеза комплементарной минус -цепи с образованием повой РФ, либо для построения зрелой фаговой частицы потомства. В течение первых 15 мин после заражения в клетке реализуется первая из этих двух возможностей. За это время постепенно накапливаются РФ и РП, т. е. возрастает количество молекул, участвующих в синтезе молекул РНК фагового потомства. На поздних этапах латентного периода, когда внутриклеточное содержание субъединиц белка оболочки достигает достаточно высокого уровня, начинает осуществляться вторая из этих возможностей. Количество РФ и РП (и, следовательно, число минус -цепей) достигает к этому времени окончательного уровня, а число внутриклеточных частиц фагов-потомков постепенно нарастает, пока весь процесс репродукции не завершится лизисом клетки. [c.472]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология