Сахарозный градиент приготовление

Фпг. 1. Системы для приготовления линейных сахарозных градиентов. [c.128]

При таком приготовлении градиента образца следует иметь в виду, что градиент РНК должен быть не выше обратного ему градиента сахарозы, иначе такая система не будет стабильной. Для тех, кто желает использовать максимальную емкость сахарозных градиентов в препаративных целях, мы приводим пример расчета, позволяющего определить емкость градиентов. [c.133]

Обычно применяют градиенты концентрации сахарозы, растворенной в буфере, который использовался для очистки вируса. Не следует использовать для приготовления сахарозных градиентов боратные буферы. При очистке большинства простых (т. е. состоящих только из белковой оболочки и нуклеиновой кислоты) вирусов применяют 10—40%-ные сахарозные градиенты. Их можно приготовить одним из следующих способов [c.16]

Отводную трубку опускают в цептрифужную пробирку и прислоняют к внутренней стенке так, чтобы эта трубка все время находилась чуть выше уровня раствора, наполняющего эту пробирку. Поскольку в ходе формирования градиента концентрация сахарозы в растворе постепенно снижается, то в пробирке мепее концентрироваиный раствор наслаивается на слои более концентрированного раствора таким образом формируется непрерывный градиент плотности. Если С] орость вытекания жидкости из смесителя достаточно мала, то существенного перемешивания раствора сахарозы в центрифужной пробирке пе происходит. Насколько мне известно, оптимальная скорость наполнения пробирки сахарозным градиентом еще не установлена, однако принято считать, что продолжительность нриготовления одного градиента составляет 10—15 мин. Если экспериментатор пон елает проверить свой собственный метод приготовления градиента, то ему потребуется только расфракционировать градиент так, как это будет описано далее, и определить коэффициент преломления каждой фракции. [c.129]

За исключением особых случаев, для уменьшения пуклеазиой активности сахарозные градиенты рекомендуется охлаждать перед использованием и центрифугировать их на холоду. В этом отношении приготовление градиентов в холодной комнате не дает особого выигрыша, поскольку их все равно приходится оставлять на некоторое время для того, чтобы в результате диффузии исчезли локальные искажения концентрации и градиент выровнялся в целом. Если градиенты предполагают использовать сразу же вскоре после приготовления, то их можно быстро охладить в ледяной бане. Если же градиенты используют не сразу, то их можно оставить в холодильнике на несколько часов. Отличное разделение РНК может быть, получено при центрифугировании даже в таких сахарозных градиентах,, которые были приготовлены за 24 час перед их использованием. [c.130]

При использовапии сахарозного градиента для аналитической цели количество наносимой РНК очень мало (менее 500 мкг), и поэтому при наслаивании образца на поверхность приготовленного в центрифужной иробирке градиента обычно не возникает никаких трудностей. Конец пипетки, содержащей образец, прислоняют к внутренней поверхности боковой Стенки центрифужной пробирки и осторожно опускают его по стенке до тех пор, пока он не коснется поверхности градиента. Если пользоваться полуавтоматической пипеткой, то образец мон<но аккуратно наслоить на поверхность сахарозного градиента без заметного перемешивания. Весьма желательно (хотя и не обязательно) растворять образец РНК в том же буфере, что и сахарозу. Однако важным условием, которое следует выполнять, является то, что плотность раствора образца должна быть меньше плотности раствора сахарозы в поверхностном слое градиента. 1 роме того, между комнонентами градиента и раствора образца не должно происходить никаких химических реакций, которые могли бы изменить градиент или РНК. [c.132]

Если в сахарозном градиепте содержится додецилсульфат, то для того чтобы предотвратить выпадение его в осадок, градиент можно центрифугировать при температуре 15° [8]. Кроме того, в этом случае для приготовления буфера не стоит употреблять калиевые соли, поскольку додецилсульфат калия обладает плохой растворимостью. Как уже упоминалось ранее, додецилсульфат натрия уменьшает поверхностное натяжение раствора сахарозы. Если концентрация додецилсульфата натрия в градиенте равна [c.132]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология