Центрифугирование для аналитических целей

Аналитическое ультрацентрифугирование полимеров [1, 2, 4, 12] включает в себя три следующих экспериментальных метода скоростную седиментацию, изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к нему. Скоростная седиментация позволяет определить константу седиментации и полидисперсность образца. Седиментация макромолекул в зоне (зонное ультрацентрифугирование) — ценный метод обнаружения гетерогенности высокомолекулярного образца. Метод приближения к равновесию позволяет рассчитать молекулярную массу М и получить сведения о неоднородности полимера, а изучение седиментационного равновесия (состояния, достигаемого транспортным переносом макромолекул, хотя сам метод и не является истинно транспортным) — молекулярную массу (надежнее, но с большей затратой времени, чем в предыдущем методе) различных типов усреднения. Метод центрифугирования в градиенте плотности заключается в исследовании седиментации, состояния равновесия и приближения к нему в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности это — широко используемый метод определения молекулярной массы, наличия неоднородности и ее типа, служащий и для препаративных разделительных целей. [c.14]

IX. Применение центрифугирования в аналитических целях [c.2]

ПРИМЕНЕНИЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ В АНАЛИТИЧЕСКИХ ЦЕЛЯХ [c.362]

Пробирки применяются для различных аналитических целей, проведения качественных реакций, посева бактериальных культур, отделения осадков центрифугированием и т. п. [c.43]

Главным рабочим органом ультрацентрифуги является ротор. На рис. 22 показаны роторы ультрацентрифуги, УЦП-65. Угловой ротор предназначен для получения плотного осадка на дне центрифужной пробирки. При вращении ротора вещество к стенке пробирки проходит быстро (расстояние до стенки значительно меньше расстояния дет ее дна) и сползает на дно. После остановки вращения ротора пробирки вынимают и, сливая супернатант, получают осадок исследуемого вещества или фракции. Ротор с подвесными стаканами также можно использовать для полу--чения плотного осадка. Однако он чаще используется прк центрифугировании в аналитических целях. [c.105]

В этом варианте препарат в виде тонкого слоя помещают в пробирку поверх среды, плотность которой обычно меньше плотности выделяемых частиц, и затем подвергают центрифугированию. Под действием приложенной центробежной силы частицы движутся в виде отдельной полосы через градиент, который служит лишь для того, чтобы предотвратить размывание зоны, или полосы в результате конвекции. Этот исключительно полезный метод, очень широко применяемый как для аналитических, так и для препаративных целей, используется для выделения и характеристики частиц всех размеров, начиная от таких крупных объектов, как вирусы, ядра и митохондрии, и кончая рибосомами, а также чистыми белками и нуклеиновыми кислотами. [c.250]

В этой части рассмотрены принципы, которые лежат в основе разделения клеточных органелл и частиц (центрифугирование) и способы их очистки (хроматография и электрофорез). Некоторые из этих методов применяются в основном при препаративном разделении, другие с успехом используются в аналитических целях. В приложении даны рекомендации по выбору того или иного метода разделения. [c.42]

Если центрифугирование проводится для получения осадка, то после остановки вращения ротора пробирку вынимают и жидкий супернатант сливают с осадка. Если центрифугирование проводится в аналитических целях, то для фракционирования содержимого пробирки в дне пробирки прокалывают отверстие и собирают раствор по каплям. Если скорость течения при этом достаточно мала, чтобы не возникла турбулентность, каждая капля будет представлять собой единичный слой жидкости в пробирке, как показано на рис. 11-6. [c.282]

Разбавление и скорость фильтрации. На скорость фильтрации и эффективность центрифугирования разбавление сырья растворителями влияет двояко непосредственно, снижая вязкость обрабатываемого продукта, и косвенно, улучшая его микроструктуру. Если рассматривать скорость фильтрации, отнесенную ко всему отфильтрованному раствору в целом, то добавка маловязкого растворителя повысит ее при любой величине вязкости растворителя и при любой кратности разбавления. Но введение растворителя уменьшает концентрацию в фильтрате целевого масла. Поэтому при увеличении разбавления скорость фильтрации, отнесенная к целевому маслу, будет возрастать в меньшей мере, чем скорость фильтрации всего фильтрата. И при достаточно высоком разбавлении, когда вязкость раствора понизится настолько, что дальнейшее разбавление (вследствие значительного уменьшения концентрации целевого масла в фильтрате) не будет уже суш,ественно снижать вязкость, дополнительный ввод растворителя не увеличивает скорость фильтрации, а уменьшает ее. Аналитический разбор влияния разбавления на скорость фильтрации дан одним из авторов [1] для суспензий с нерастворимым осадком. Выясненные в этой работе положения действительны и для разбавления сырья при его депарафинизации. Основные из этих положений заключаются в следующем а) чем ниже вязкость растворителя, тем эффективнее его действие и тем выше наибольшая скорость фильтрации, отнесенная к целевому маслу, которая может быть достигнута при оптимальном разбавлении [c.100]

Седиментация имеет большое практическое значение. Так, очистка питьевой воды от взвешенных частиц отстаиванием (осветление) происходит в результате седиментации. Ее широко используют и для очистки газообразных отходов производства от аэрозольных частиц (пыль, сажа, влага). С целью ускорения седиментации очищаемый газ подвергают воздействию искусственного силового поля, создаваемого в аппаратах, называемых циклонами (рис. VI.5). На таком же принципе проведения седиментации в искусственном силовом поле основаны очистка нефти и нефтепродуктов от эмульсионной влаги центрифугированием и выделение сливок из молока в сепараторах. Центрифугирование широко применяют в аналитической практике для ускорения отделения осадков. [c.275]

Непосредственное выделение из анализируемого продукта определяемого вещества или его составных частей в химически чистом состоянии представляет во многих случаях очень трудную, а порой и неосуществимую задачу. Поэтому очень часто определяемое вещество выделяют в осадок в виде соединения определенного состава. Для этого взвешенное количество (навеску) анализируемого вещества переводят в раствор, к полученному раствору прибавляют соответствующий реактив, реагирующий с одним из компонентов анализируемой смеси с образованием малорастворимого соединения. При этом определяемая составная часть анализируемого вещества (катионы или анионы) выделяется из раствора в виде практически нерастворимого осадка. Выделившийся осадок отделяют от раствора фильтрованием или центрифугированием, промывают с целью удаления всех растворимых в данном растворителе примесей, высушивают или прокаливают до постоянной массы и взвешивают на аналитических весах. [c.347]

Сходный метод для определения сульфатов основан на использовании 2-аминопиримедина [114], позднее этот реагент был применен для нефелометрического определения сульфата [115]. Это соединение обладает сильным светопоглощением в ультрафиолетовой части спектра и имеет двойной пик при 200—230 нм и широкий максимум при 305 нм. Для аналитических целей более пригоден второй максимум. Методика определения заключается в следующем к анализируемому раствору сульфата прибавляют известное количество реагента, выдерживают смесь 30 мин для образования сульфата 2-аминоперимиднна и измеряют светопоглощение при 305 нм после осветления раствора центрифугированием. Описанная методика позволяет определять 4—120 рргп сульфатов. Мешающее действие 100 ррт фторидов, нитратов и фосфатов при определении 50 ррт сульфатов выражено в слабой степени. [c.539]

Ультрацентрифугирование может быть препаративным и аналитическим. В качестве препаративного метода оно применяется для очистки препаратов или для разделения смесей с целью последующего анализа. При этом образец, помещенный в цилиндрическую пробирку, вращают с большой скоростью в течение заранее заданного промежутка времени, а затем извлекают из центрифуги, прежде чем приступить к каким-либо измерениям. Преимущество такого подхода состоит в том, что можно использовать большие препаративные объемы (5—100 мл), а также в том, что полученный после центрифугирования образец может быть подвергнут в дальнейшем биохимическим и физическим измерениям. Однако при остановке ротора и извлечении образца неизбежно происходит некоторое взбалтывание или перемешивание содержимого пробирки. К тому же в связи с тем, что в данном случае возможно изучение состояния образца лишь в один из моментов времени, при таком подходе теряется много информации. [c.226]

В отличие от препаративного центрифугирования, целью которого является разделение веществ и их очистка, аналитическое ультрацентрифугирование применяется в основном для изучения седиментационных свойств биологических макромолекул и других структур. Поэтому в аналитическом центрифугировании применяют роторы и регистрирующие системы особой конструкции они позволяют непрерывно наблюдать за седиментацией материала в центробежном поле. [c.59]

С тех пор как Сведберг (1925 г.) с целью характеристики макромолекул исследовал их поведение в сильном центробежном поле, началось конструирование ультрацентрифуг в двух направлениях. Первое привело к созданию современной аналитической ультрацентрифуги, которая снабжена оптической системой для анализа малых количеств материала во время центрифугирования. Она широко используется главным образом для определения размера, формы, плотности и молекулярного веса высокомолеку- [c.58]

На конечной стадии очистки некоторые авторы использовали центрифугирование в градиенте сахарозы. Мори и Утсуми [83], как и Кэйзи [17], очищают этим способом легумины соответственно конских бобов и гороха. Однако для аналитических целей чаще применяется ультрацентрифугирование. Этот метод остается ценным средством для проверки чистоты образца и позволяет, кроме того, оценивать размеры молекул [17, 33, 47, 52, 85]. [c.155]

Для аналитических целей почти всегда используется гидролиз белков умеренно концентрированными кислотами, так как при этом гидролиз протекает быстро, а побочные реакции, приводящие к потере аминокислот, идут в общем медленнее, чем при применении других реагентов. Первоначально для гидролиза белков предпочитали использовать серную кислоту, так как ее применил Браконно [14] при получении глицина из желатина. После работы Хлазивеца и Хаберманна [15] гидролиз белка стали проводить чаще соляной кислотой, тогда как серную кислоту (в меньшей концентрации и более короткое время) применяют для углеводов, которые, вообще говоря, гидролизуются легче белков (см. гл. 8). Избыток соляной кислоты можно удалить из гидролизата упариванием, но сульфат-ион удаляется легче нейтрализацией гидролизата гидроокисью бария с последующим отделением образующегося сульфата бария центрифугированием или фильтрованием. В настоящее время применение соляной кислоты для гидролиза белка приобрело почти универсальный характер, и дальнейшее изложение относится в основном к этому реагенту. [c.123]

Разделение и анализ изотопов является одной из самых сложных и трудоемких аналитических задач. Близость свойств изотопных веществ сильно затрудняет их разделение. Применяемые для этой цели методы (диффузия, термодиффузия, ректификация, центрифугирование и др.) длительны и трудоемки. Чаще всего для идентификации изотопов пользуются масс-спектро.метрией, но и этот метод весьма сложен и его производительность изка. [c.42]

Процессы, характерные для целой клетки, протекают в отдельных клеточных частицах и органеллах, которые для анализа выделяют из клетки с помощью фракционирования. Этот процесс обычно состоит из двух этапов (разд. 1.10.3) сначала клетки разрушают, а затем из образовавшейся суспензии методом центрифугирования (гл. 2) выделяют нужные частицы и органеллы. Дальнейшее разделение индивидуальных компонентов клеточных частиц и органелл и изучение их свойств проводят с помощью центрифугирования (гл. 2), хроматографии (гл. 3) или электрофореза (гл. 4). Для. определения состава, механизма действия и функций клеточных компонентов пользуются сложными количественными и качественными аналитическими методами. На атомном и молекулярном уровнях применяют целый ряд спектральных методов (гл. 5) механизм действия клеточных частиц и внутриклеточные взаимодействия изучают, используя одновременно несколько аналитических методов, таких, как спектроскопия (гл. 5) и радиоизотопные методы (гл. 6), потенциометрия, полярография (гл. 7) и манометрия (гл. 8). [c.18]

На рис. 11-5 показаны два типа роторов для препаративной ультрацентрифуги. Угловой ротор в первую очередь предназначен для осаждения материалов . Он очень эффективен для этой цели, так как вещество проходит до стснки центрифужной пробирки короткое расстояние накапливающийся на стенке материал быстро сползает по стенке на дно пробирки. Ротор с подвесными стаканами большей частью используют для аналитического равновесного и зонального центрифугирования (будет описано вкратце). [c.282]

В препаративных опытах для разрушения клеток наряду с ультразвуком [29, 80, 106, 127, 152, 234, 299] относительно часто используются механические экструзионные дезинтеграторы [13, 74, 138, 163, 184, 254], позволяющие обрабатывать большие объемы биомассы. Получаемые объемы гомогената в большинстве случаев не исключают возможности проведения стадии центрифугирования в режимах, аналогичных таковым в случае аналитических опытов. Только в случае выделения Bstl503, проводившегося из 70 кг биомассы В. stereother mophilus 1503, с этой целью было использовано проточное центрифугирование [74]. [c.166]

Центрифугирование препаратов нуклеиновых кислот в градиенте плотности сахарозы используют в основном в двух целях фракционирование ио молекулярному весу (аналитическое и нренаративное) и определение коэффициента седиментации и молекулярного веса. Обычно применяют 5—20%-ный или 15—30%-ный линейный градиент плотности сахарозы [c.177]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология