Фенотипический отбор клеток

В культуре микроба наряду с чувствительными клетками могут быть клетки, обладающие определенной степенью устойчивости к антибиотику. В этом случае антибиотическое вещество может выступать в роли фактора отбора устойчивых форм. Однако единой точки зрения, объясняющей механизм этого явления, нет. Одни авторы указывают, что гетерогенность микробной культуры обусловлена частым появлением устойчивых к антибиотику вариантов. Другие рассматривают явление гетерогенности в отношении некоторых производных пенициллина (метициллин, оксациллин) в качестве фенотипического фактора, определяемого условиями среды. [c.450]

Первичный отбор гибридных клонов значительно упрощается, если в векторной молекуле предусмотрена специальная фенотипическая система селекции. При трансформации клеток чаще всего используют векторные молекулы ДНК, несущие гены устойчивости к антибиотикам и антиметаболитам. Поэтому на среде с определенным антибиотиком или антиметаболитом будут расти только клетки трансформантов. Особенно хорошо данная система селекции отработана для бактерий, так как получены векторные плазмиды, детерминирующие устойчивость трансформированных клеток сразу к нескольким антибиотикам. Если векторная плазмида определяет устойчивость к двум антибиотикам и при встройке в нее экзогенного фрагмента ДНК нарушается одна из генетических детерминант устойчивости к антибиотикам, то клоны клеток, содержащих такие гибридные ДНК, легко отличить от трансформантов, включающих исходный вектор, на средах с каждым антибиотиком в отдельности. [c.34]

Таким образом, данная работа продемонстрировала возможность введения мутаций в заранее выбранный участок изучаемой последовательности ДНК. Однако, как видим, выход мутантов относительно невелик, что может затруднять их отбор при отсутствии методов фенотипического выявления. Долю мутантов, получаемых данным методом, можно увеличить, если в качестве клетки-хозяина для транс- [c.177]

Плазмида ol El (Mr 4,2 МДа) применяется для клонирования E oRI-фрагментов. При этом интеграция чужеродного фрагмента в участок узнавания E oRJ ведет к фенотипическому изменению клетки, прекращению синтеза колицина с сохранением иммунности к нему. Этот признак используют при отборе рекомбинантных трансформантов. [c.118]

Фенотипический отбор. Фенотипический отбор из популяции трансформированных оеток-это самый прямой путь вьщеления нужного клона (рис. 628). На практике этот метод, вообще говоря, Офаничивается клонированием прокариотических генов и некоторых генов дрожжей и других фи-бов в клетках прокариот и эукариотических генов в оетках эукариот. В общем виде он был описан в разд. 5.6.6, когда мы рассматривали способ конструирования дрожжевого плазмидного вектора. Чтобы клонировать ген А (или г ЦНК-А), смесь фрагментов ДНК (т.е. фрагментов, полученных из всего клеточного генома) встраивали в векторные молекулы и трансфицировали ими оетки, мутантные по гену А (А"). Клетки выращивали в условиях, требующих присутствия продукта гена А, так что колонии могли образовывать лищь те клетки, в которых синтезируется продукт гена А, присутствующего в векторе. Наиболее подходящими для проведения такого отбора являются клет-ки-хозяева, в которых делетирован либо весь ген А, либо его часть. В противном случае приходится выявлять и разграничивать ревертанты и трансфор- [c.299]

Возникновение онкогенных мутаций - стадия инициации канцерогенеза (превращения нормальной клетки в опухолевую), а вызывающие канцерогенез агенты наз канцерогенами-инициаторами. Дальнейшие изменения клетки на пути злокачеств. превращения вызывают промоторы канцерогенеза, к-рые обусловливают нарушения межклеточного взаимод., клеточного обмена, приводят клетку в состояние фенотипически выраженной опухолевой трансформации и к развитию опухоли. Первичный опухолевый узел прогрессирует в осн в результате клеточного отбора, изменяя свои св-ва в зависимости от разл воздействий (гормональных, химиотерапевтических) чаще всего в [c.306]

На этапе формировании клонов, способных взаимодействовать с одной из молекул МНС, процесс дифференцировки клеток не заканчивается. Тимоциты, подвергающиеся отбору, экспрессируют как D4-, так и С08-корецепторы. Однако как только отбор на специфичность произошел, тимоцит теряет один из корецепторов. Во всех случаях отбор на специфичность к молекулам I класса определяет сохранение D8 и потерю D4. Напротив, тимоциты, прошедшие селекцию к молекулам II класса, экспрессируют D4 и подавляют синтез D8. Наиболее четко корреляция фенотипических маркеров со специфичностью рецепторов показана на трансгенных мышах. Если мышам вводили реорганизованные гены для ар-цепей со специфичностью к молекулам I класса, то все образовавшиеся зрелые Т-клетки имели фенотип Т-киллеров ( D8). В ситуации, когда специфичность касалась молекул II класса, все зрелые Т -клетки несли корецептор Т-хелперов ( D4). Коррелятивная связь корецепторов со специфичностью Т-рецепторов показана и на других экспериментальных моделях. Мутантные мыши, у которых отсутствуют молекулы II класса, не способны образовывать СГМ -лимфоциты. Введение таким мышам трансгена, кодирующего синтез молекул II класса, полностью восстанавливало формирование D4 -клеток. [c.179]

Таким образом, накопленный опыт демонстрирует, что клонирующие векторные системы можно разработать для любых прокариотических организмов. Необходимым условием является лишь наличие репликона, способного обеспечить размножение гибридных молекул ДНК в изучаемых клетках автономно от бактериальной хромосомы, а также возможность экспрессии выявляемых фенотипически генетических маркеров. Часто для упрощения процедур получения и отбора целевых гибридных молекул ДНК создают бифункциональные (челноч- [c.231]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология