Иммуноанализ флуоресцентные метки

В настоящее время 30% всех иммуноанализов в США включают применение изотопных меток. Остальные 70% выполняются в основном с помощью методов, в которых роль меток выполняют флуорофоры или ферменты. Применение нефелометрии ограничено анализом иммунных белков. Инфекционные заболевания в основном диагностируют с помощью гетерогенных методов с применением ферментных меток и бусин в качестве носителей, хотя 30% анализов выполняются с помощью более дешевых методик типа РИА. Контроль лекарственных препаратов осуществляют с помощью гомогенных методик, включающих применение ферментных меток или регистрацию поляризации флуоресценции. В случае анализа гормонов имеется большой выбор как гомогенных, так и гетерогенных методик с радиоактивными, ферментными и флуоресцентными метками. Доля неизотопных методов составляет 65% и имеет тенденцию к росту. Альтернативные методы йммуноана-лиза часто используются внутри определенной диагностической группы, например в анализах на тиреоидный статус. В США наиболее важным фактором является стоимость анализа, а различные технические аспекты обычно имеют второстепенное значение. В частности, 50% инструментального парка, используемого в иммуноанализе, работает с промышленно выпускаемыми реагентами. [c.19]

В этой главе мы ограничимся рассмотрением биосенсоров на основе обратимого вязывания определяемых веществ со специфическими рецепторами, В биологии среде аналитических методов этого типа чаще всего встречаются методы иммуно-нализа с использованием специфических антител к низкомолекулярным гаптенам (в анном контексте-к определяемым веществам). Исходно в иммуноанализе для конт-оля степени связывания использовали радиоактивные метки. Однако в последние оды с этой целью все чаще прибегают к флуоресцентным меткам, исключающим озможность радиационного поражения [24], К счастью, большинство технологи-еских приемов, разработанных для флуоресцентного иммуноанализа, можно легко риспособить и для биосенсоров. [c.507]

При крайне низких концентрациях компонентов образование простого бинарного комплекса антиген-антитело не может быть за регистрировано ни визуально, ни простыми инструментальным методами, что вызывает необходимость усложнения аналитическо системы. Одним из путей визуализации образования комплекс является использование меченых соединений, в которых метка мо ет легко детектироваться в концентрациях, сопоставимых с опре деляемой концентрацией анализируемого соединения. Как правило от типа метки зависит название анализа — радиоиммунологически анализ, флуоресцентный иммуноанализ, иммунокофакторный ана ЛИЗ, иммуноферментный анализ и т. д. [c.78]

Хотя стоксов сдвиг флуоресцеина невелик (23 нм) и поэтому флуоресцеиновая метка весьма чувствительна к рассеянию света, ее чаще всего применяют для определения соединений, циркулирующих в организме в концентрациях порядка мкмоль/л (например, лекарственных препаратов и наркотиков). Как показано на рис. 10.2, флуоресцеин характеризуется также большим изменением поляризации излучаемого света и в силу этого особенно пригоден для поляризационного флуоресцентного иммуноанализа (ПФИА). Известны несколько методов сшивки флуоресцеина с [c.142]

Разработка новых методов иммуноанализа. Разработка новых исследовательских методов иммуноанализа затруднена из-за недоступности соответствующего реагента для введения метки (например, изотиоцианатофенил-EDTA-Eu). Такие реагенты очень стабильны, а методы получения конъюгатов с использованием этих реагентов очень просты. Выпуск таких реагентов в промышленном маштабе значительно ускорит внедрение методов флуоресцентного иммуноанализа с временным разрешением и раз- работу новых исследовательских методов иммуноанализа. [c.162]

Отсюда, при фиксированной концентрации антитела, равновесное отношение концентраций связанного и свободного антигена количественно связано с общей концентрацией лиганда. Это соотношение лежит в основе любого иммуноанализа. Таким образом, если ввести в анализируемую систему фиксированное количество меченого антигена, то можно определить и неизвестную концентрацию антигена. Неизвестную концентрацию антитела определяют при помощи меченых антител. Для введения метки в антитело или антиген можно использовать различные метящие агенты, такие, как радионуклиды, ферменты, красные кровяные клетки, флуоресцентные и хемилюминесцентные зонды или металлы. В радиоиммуноанализе (РИА) и иммуно-ферментном анализе (ИФА) метят антиген, а в иммунорадиометрическом (ИРМА) и иммуноферментометрическом (ИФМА) анализе - антитело. В большинстве методик иммунного анализа требуется порознь определять связанный и свободный меченый антиген или антитело. Поэтому эти методики довольно громоздки и длительны. [c.57]