Флуорофоры

Определение констант динамического и статического тушения флуоресценции. Для раздельного определения констант скорости взаимодействия возбужденных молекул флуорофора с тушителем (динамического тушения) и константы равновесия комплексоой-разования в основном состоянии (статического тушения) проводят измерения спектров и кинетики флуоресценции образцов с различными концентрациями тушителя (в том числе и в отсутствие туши- [c.115]

Широко применяется люминесцентный анализ при изучении смолисто-асфальтеновых веществ [97, 100] и ванадилпорфири-нов нефти [101]. В молекулах этих соед1шеиий присутствуют фрагменты ароматических структур, являющихся флуорофора-ми и обусловливающими их способность к люмниесцепции. Сделан вывод о достаточно устойчивой структуре молекул асфальтенов, причем междз молекулами существуют ассоциативные связи. Область свечения молекул асфальтенов занимает широкий интервал — от 480 до 700 нм. Трудности, возникающие ири люминесцентном анализе этих соединений, связаны с тем, что не существует вполне определенной химической стру туры молекул асфальтенов. Смолисто-асфальтеновые вещества представляют собой смеси различных молекул. [c.57]

Значительная чувствительность флуоресценции к внутримолекулярным и межмолекулярным изменениям позволяет выявить взаимодействия молекул, не обнаруживаемые другими методами. Так, ионизация и взаимодействие между мо.пекулами, которые трудно обнаружить спектрофотометрическими методами, могут изменять квантовый выход флуоресценции. Флуорофоры, взаимодействуя со специфическим ферментом, могут увеличить или уменьшить интенсивность его флуоресценции, и по степени изменения интенсивности можно судить о типе связи. Межмолекулярные и внутримолекулярные взаимодействия могут вызвать также изменения в спектрах возбуждения и флуоресценции. А по изменению спектров можно также судить об изменениях в структуре флуорофора, сопровождающих молекулярное взаимодействие. [c.84]

Рассмотрим подробнее влияние реабсорбции и реэмиссии на кинетику флуоресценции. При наблюдении флуоресценции в сильно реабсорбируемой области длин волн регистрируется и,элучение, исходящее главным образом с поверхности образца и испускаемое непосредственно первично возбужденными молекулами флуорофора, поэтому кинетика затухания флуоресценции должна быть близкой к экспоненциальной, а время затухания близко к то. [c.192]

При высокой концентрации флуорофора и сильном перекрывании его спект )ов поглошения и флуоресценции может наблюдаться перенос энергии между молекулами одного сорта (миграция энергии). Внешне это напоминает явления, наблюдающиеся в случае рсаб-сорбцни. Нужно, однако, подчеркнуть существенные различия при миграции энергии наблюдаемое время жизии не возрастает, не записнт от геометрии образца и способа регистрации. [c.195]

Для измерения флуоресценции используют специально предназначенные для этой цели флуоресцентные спектрофотометры, позволяющие с помощью монохроматоров задавать длины волн для возбужда-i0щeг0 и испускаемого света. Испускаемый флуорофором свет обычно регистрируют под углом 90° к падающему свету. В отсутствие флу- [c.365]

Принципы работы с этими оптическими метками во многом те же, что и с радиоактивными метками, за исключением того, что метод детектщ)Ования включает спектрофотометрическое измерение. Однако большинство прямых методов с колориметрической меткой, когда длины волн возбуждения и детектирования совпадают, редко достигают высокой чувствительшсти в иммунном анализе. Но можно получить улучшение на порядок величины, разделив эти длины волн. Существует дна основных класса меток, пригодных для этого флуорофоры и хемилюминесцеитиьш реагенты. [c.585]

Рис. 7.9-14. Принцип иммунного анализа по поляриза цнн флуоресценции. Связывание антитела с антигеном, мечег1ым флуорофором, увеличивает поляризацию флуоресценции.

Флуорофоры переходят на более вшяжяй энергетический уровень при поглощении света в одном диапазоне длин воли в возбужденном состоянии происходит быстрый безызлучательный переход в самое низкое возбужденное состояние и затем возврат в оснсшное состояние с испусканием фотона с больщей длиной волны (рис. 7.9-10,а, 6) возбужденное состояние имеет типичное вре- [c.585]

Вслед за началом возбуждения интенсивность флуоресцегащи зависит от коицентргщии флуорофора в возбужденном состоянии и является функцией времени [c.587]

Наиболее распространенные флуорофоры, используемые напрямую в качестве меток, традиционно являются производными флуоресцеина и родамина в первом случае при присоединении метки в качестве активного интермедиата часто исполь ют взотиоцианатное производное. Длины волн возбуждения/испускания этих меток хорошо подходят для большинства флуориметров (рис. 7.9-12), хотя их положение и малый стоксов сдвиг делают затруднительным ва )ждение недорогих диодных источников возбуждения, которые можно было бы использовать для создания небольшого специализированного прибора. [c.588]

Непрерывно разрабатываются новые флуоресцентньш зонды, чтобы покрыть все более широкий спектр и приспособиться к потребностям специфических длин волн. В табл. 7.9-3 суммированы некоторые из них. Весьма чувствительными флуорофорами ивляются гидроксильные производные кум фи-на (умбеллифероны), которые открывают широкие возможности для получения различных флуоресцентных свойств. Многие из производных этого ароматического фенола, такие, как фосфаты, гликозиды и др., не флуоресцируют, ио флуоресцирующие частицы могут быть получены при их гцлролизе это свойство также можно испольэовать в иммунном анализе с меткой, как уже обсуждалось ранее. [c.588]

Для данного флуорофора изменение поляризации флуоресценции зависит от молекулярной массы антигена и природы комплекса с антителом должно иметь место надлежащее изменение молекулярной массы, а этого нельзя добиться с большими антигенами. В целом, хфинято считать, что иммунный анализ ло поляризации флуоресценции неприменим к антигенам с молекулярной массой выше 20000. [c.592]

Основным источником ошибок при образовании сигнала является какое-либо ингибирование метки. Например, флуорофор может тушиться эндогенными частицами пробы или на ферментную метку может влиять присутствие ингибиторов либо усилителей. Как было показано ранее прн обсуждении, эти [c.603]

Наиболее широко распространены флуориметрическпе методы, основанные на измерении флуоресценции. При поглощении ультрафиолетового или видимого излучения молекулы переходят в электронно-возбужденное состояние. Полученная энергия может полностью переходить в энергию теплового движения, а может с определенной вероятностью (квантовым выходом) испускаться в виде рассеянного электромагнитного излучения, как правило, с частотой, меньшей частоты возбуждающего излучения. Это рассеянное излучение называют флуоресценцией. Его интенсивность можно измерить с высокой чувствительностью в любом направлении, даже отличающемся от направления пучка возбуждающего излучения, лучше всего в перпендикулярном ему направлении. При использовании достаточно чувствительных фотоэлектронных умножителей это позволяет регистрировать концентрации флуорофоров, практически недоступные спектрофотометрическому методу. Для веществ с достаточно высоким квантовым выходом флуоресценции удается регистрировать концентрации флуорофора порядка 10" о М и ниже. [c.252]

Возможно также непрямое флуоресцентное детектирование, при этом речь может идти об универсальной методике детектирования, если имеется в распоряжении подходящий флуорофор без эффекта тушения. [c.40]

Само собой разумеется, что могут использоваться УФ-неактивные и нефлуоресцирующие пробы, если применять реагенты, употребляемые обычно для получения соответствующих производных перед разделением хромофоров и флуорофоров. В результате этого, однако проявляют себя недостатки предколоночного происхождения, известные из ВЭЖХ. Специальные реагенты для электрофореза, имеющие помимо хромофора еще и соответствующий заряд, являются темой для обсуждения. [c.40]

Из числа возможных детекторов для КЭСМ оптимальным считается непрямой флуорометрический, основанный на вытеснении анализируемым веществом растворенного в электролите флуорофора и снижении вследствие этого фоновой флуоресценции. [c.92]

Флуорометры и флуоресцентные спектрофотометры надо ежедневно стандартизовать по стабильному флуорофору для обеспечения правильной воспроизводимости ответа. Изменения обусловлены факторами, связанными с самим прибором, такими, как различия в интенсивности -лампы и чувствительности фотоумножителя. Флуорофором может служить чистый образец флуоресцирующего вещества, подвергаемого анализу, или другое легко очищаемое флуоресцирующее вещество с полосами поглощения флуоресценции такими же, что и у испытуемого вещества. Подходящим флуорофором для голубой флуоресценции является хинин в разведенной серной кислоте, для зеленой флуоресценции — флуоресцеин натрий и для красной — родамин. [c.54]

Почти все 2-тио-З-фенилгидантоины можно разделить, используя двумерную тонкослойную хроматографию на силикагеле. Используют две системы растворителей хлороформ — этанол (98 2, по объему) и хлороформ — этанол — метанол (88,2 1,8 10, по объему). Если силикагель содержит флуорофор, можно наблюдать зоны в УФ-свете (254 нм). Альтернативно, пластинки можно опрыскать раствором нингидрина или раствором иод-азида. Тонкослойная хроматография — дешевый метод, однако ему присущи два недостатка малая чувствительность и невозможность количественной оценки. Эти недостатки устраняются использованием для ступенчатой деградации фенил [ 5] изотиоцианата. В этом случае обнаружение проводят либо авторадиографически, либо одним из выше- [c.270]

Другое применение измерений флуоресцентной анизотропии иллюстрирует изучение [63] декапептидного гормона лулнберина— 5-оксо-Рго-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2. Когда измерения проводили в вязкой среде, что сделано для уменьшения деполяризации, возникающей от теплового движения относительно свободно двигающихся ароматических боковых групп, то проходящая при этом передача энергии от находящегося в боковом радикале фенольного флуорофора тирозина к индольной группе триптофана указывает на то, что вытекающая из данных КД конформация -витка включает область полипептида, содержащую остатки тирозина и триптофана [63]. [c.442]

Метка (Label) Радиоактивный изотоп или идентифицируемый биохимическими либо иммунологическими методами лиганд (например, флуорофор), связывающийся с макромолекулой. Позволяет обнаружить меченое вещество в образце. [c.553]

Сильным флуорофором является восстановленное никотинамидное кольцо, в результате чего интенсивной флуоресценцией обладает NADH, у которого максимум поглощения и максимум испускания находятся соответственно при 340 и 450 нм. [c.252]

Широко используют в ТСХ пред- и пост-дериватизацию исследуемых соединений. Обычно целью дериватизации в ТСХ является повышение чувствительности анализа при введении хромофоров или флуорофоров в молекулы исследуемых соединений. Это 364 [c.364]

Измерением флуоресценции удалось существенно повысить предел чувствительности количественного определения некоторых соединений (табл. 11.55). В каждом опыте реакцию проводили при оптимальном для данной реакции значении pH (см. табл. 11.54), затем водный раствор титровали 1 М фосфорной кислотой до pH = 5,0 и сразу же извлекали флуорофор 10 мл этилацетата и измеряли интенсивность его флуоресценции. [c.489]

Использование флуорометрических методов ограничивается тем, что далеко не все поглощающие ультрафиолетовое излучение вещества являются достаточно эффективными флуорофорами. Тем не менее среди них находятся такие аминокислоты, как триптофан и тирозин, в результате чего флуоресцируют все содержащие их белки. При облучении светом длиной волны 280 нм, т.е. в максимуме поглощения остатков триптофана, наблюдается флуоресценция с максимумом испускания при 348 нм. [c.252]

Органические люминофоры (1976) -- [ c.22 ]

История органической химии (1976) -- [ c.241 ]

История органической химии (1976) -- [ c.241 ]

Химия синтаксических красителей Том 6 (1977) -- [ c.336 , c.342 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.484 , c.510 ]

Физическая Биохимия (1980) -- [ c.418 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология