Панкреатический денатурация-ренатурация

Рис. 3-8. Денатурация и ренатурация на примере панкреатической рибонуклеазы (по Анфинсену).

Важнейшим достижением в изучении механизмов структурной организации белков явились экспериментальные исследования Крейтона 1970-1980-х годов, особенно его работы, посвященные эмпирическому подходу к изучению промежуточных состояний обратимой денатурации цистинсо-держащих белков [29, 30]. Разработанные Крейтоном методы позволяют Идентифицировать дисульфидные связи, регулировать скорость их образования и разрушения и по последовательности возникающих промежуточных MOHO-, ди- и т.д. S-S-продуктов следить за ходом свертывания белковой цепи. Предпринятое им на этой основе исследование пути свертывания панкреатического трипсинового ингибитора [29] опережает и сейчас, по прошествии двух десятилетий, научный уровень аналогичных работ по ренатурации других белков. Подход Крейтона, однако, неприемлем для белков, лишенных S-S-мостиков. [c.86]

Другой интересной особенностью циклических ДНК, наблюдаемой при щелочной денатурации, является очень быстрая ренатурация при нейтрализации щелочного раствора такой денатурированной ДНК, если значение pH не превышает 12,5. При денатурации щелочью более высоких концентраций не удается добиться ренатурации (после нейтрализации) в условиях, когда ДНК II легко ренатурирует . Необратимо денатурированная ковалентно-замкнутая ДНК после нейтрализации и обработки панкреатической ДНК-зой спонтанно ренатурируетобразуя циклическую ДНК II с односпиральными разрывами данный процесс протекает значительно быстрее, чем ренатурация ДНК П. Это означает, по-видимому, что необратимая денатурация ДНК I происходит без разрыва цепей ДНК, однако в процессе денатурации они сдвигаются относительно друг друга вдоль оси спирали, после чего образование полностью комплементарной структуры при нейтрализации затруднено из-за случайного образования ненативных комплементарных пар 5 Возможно также, что воссоздание вновь исходной комплементарной структуры затруднено стерически из-за образования сверхспиральной структуры. Быстрая спонтанная ренатурация после образования единственного одноцепочечного разрыва объясняется, очевидно, тем, что при этом происходит быстрое раскручивание сверхспиральной денатурированной структуры и две цепи, находясь в непосредственной близости друг от друга, могут легко образовать полностью комплементарную двухспиральную структуру, как это происходит, например, при ренатурации денатурированной ДНК со сшивками между комплементарными цепя- [c.270]

На основе экспериментального подхода, объединяющего отмеченные выше и некоторые другие методы, можно проводить изучение денатурации по строго логической и апробированной схеме. Она прежде всего включает получение информации о наличии дисульфидной связи в любом промежугочном продукте, что свидетельствует о сближенности соответствующих участков его полипептидной цепи. Такие данные о серии продуктов, например о моно-8-8-производных, образовавщихся на первом этапе ренатурации, создают о каждом из них специфическое стереохимическое представление. Сопоставление таких (а именно детерминированных числом и положением дисульфидных связей) представлений о всей гамме метастабильных промежуточных продуктов на пути ренатурации от флуктуирующего клубка до нативной трехмерной структуры позволяет выделить ряд связанных между собой продуктивных промежуточных состояний внутримолекулярных конвертируемых реорганизаций, ведущих этот ряд к нативной конформации. Дисульфидная связь как бы делает видимым весь процесс сборки белковой глобулы. В наиболее полной мере имеющиеся возможности реализованы пока лишь для одного белка - бычьего панкреатического трипсинового ингибитора. [c.381]

Проблема белка (1997) -- [ c.471 , c.472 , c.473 , c.474 , c.475 , c.476 , c.477 , c.478 , c.479 , c.480 , c.481 ]

Проблема белка Т.3 (1997) -- [ c.471 , c.472 , c.473 , c.474 , c.475 , c.476 , c.477 , c.478 , c.479 , c.480 , c.481 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология