Фракционирование пептидов на колонке с дауэксом

В. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ ПЕПТИДОВ НА КОЛОНКЕ С ДАУЭКСОМ 50X2 В НЕЛЕТУЧИХ БУФЕРНЫХ РАСТВОРАХ [c.197]

Сложную смесь пептидов приходится фракционировать по крайней мере в две стадии вначале на катионите, а затем на анионите. Такая последовательность удобна с практической точки зрения. При разделении на смоле даузкс-50 повторный эксперимент проводят на свежеприготовленной колонке, так как на последней стадии фракционирования смола дает усадку. Дауэкс-1 можно регенерировать непосредственно в колонке. На практике готовят две колонки на первой (дауэкс-50) ведут первичное фракционирование, на второй (дауэкс-1) разделяют отдельные фракции. Конечно, в случае необходимости первичное фракционирование можно вести и на дауэксе-1. [c.404]

Элюирование пептидов с колонки, заполнетюй смолой дауэкс-50 (сульфополистирол), осуществляется с номон ью повышающегося градиента рИ и концентрации пиридина [58, -бО] (детали приведены в табл. 10.5). При pH 2 карбоксильные группы С-концевых остатков и боковых ценен аспарагиновой и глутаминовой кислот протонированы, как и Ы-концевые аминогруппы п боковые цепи аргинина, лизина, гистидина. В этих условиях пептиды сорбируются на сульфогруппах смолы. При повышении pH карбоксильные группы ионизируются и пептиды отделяются от смолы. Таким образом, фракционирование пептидов [c.355]

В результате расщепления белка или полипептида, каким бы методом оно ни осуществлялось, всегда образуется смесь пептидов. В среднем наиболее короткие пептиды получают при химотрипсиновом гидролизе, а наиболее длинные — при обработке бромистым цианом (так как содержание метионина в большинстве белков очень мало по сравнению с суммарным содержанием крупных гидрофобных аминокислот). При фракционировании смесей пептидов наилучшие результаты дает метод ионообменной хроматографии на колонках. Если для разделения используют смолу дауэкс I или другую, сходную смолу основного характера, а для элюции — ниридин-ацетатный буфер с постепенно понижающимся значением pH (8—3), то первыми с колонки выходят основные пептиды наиболее кислые выходят последними (фиг. 12). Обратный порядок элюции имеет место при [c.72]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология