Обессоливание белковых растворов на колонке с. сефадексом

Обессоливание. В прозрачном супернатанте доводят pH до 7,0 1 М раствором триса и наносят раствор белка на колонку с сефадексом [c.263]

Обессоливание растворов. С помощью колонки, заполненной сефадексом G-25, можно проводить обессоливание растворов высокомолекулярных соединений. Фракции высокомолекулярных соединений элюируются с внешним объемом колонки, в то время как фракции, содержащие низкомолекулярные соединения, распределяются между подвижной и неподвижной фазами и поэтому движутся с меньшей скоростью. Обессоливание — более быстрый и эффективный метод, чем диализ, и используется, в частности, для удаления фенола из растворов нуклеиновых кислот, сульфата аммония из растворов белков, а также для отделения моносахаридов от полисахаридов и аминокислот от белков. [c.100]

Гель-фильтрация на заранее подготовленных колонках (разд, 1.2.2.1)—более быстрый способ обессоливания. Элюент и параметры матрицы выбирают в соответствии с растворимостью и молекулярной массой исследуемого белка. Слаборастворимые гидрофобные белки растворяют в 98%-ной муравьиной кислоте, которую перед нанесением образца на колонку разбавляют до 75%-НОЙ концентрации (разд. 1.3.2.1). Белки с молекулярной массой 5СЮ0—30 000 обессоливают на сефадексе G-25, более высокомолекулярные белки — на сефадексе G-50. Объем образца не должен превышать 1/3—1/4 объема колонки. Фирма Pharma ia выпускает колонки с сефадексом G-25, рассчи- [c.75]

Этот выбор диктуется характером задачи, которая решается гель-фпльтрацией, и свойствами разделяемых молекул, в первую очередь их массами. Для обессоливаиия раствора макромолекул естественно использовать жесткие, достаточно мелконористые матрицы с крупными гранулами (последнее — для увеличения скорости течения), например сефадекс С-25 или биогель Р-б. Для обессоливания более мелких молекул можно воспользоваться сефадексами С-10 и С-15 или биогелями Р-2 и Р-4. Названные матрицы удобны и для смены буфера, в котором первоначально находится препарат, на тот, которым уравновешена колонка и производится элюция, или для освобождения биополимеров от радиоактивных низкомолекулярных предшественников. Близка к описанным н задача рассортировки смеси на две группы веществ — высокомолекулярных и низкомолекулярных (например, отделение белков от пептидов или нуклеиновых кислот от белков). Здесь, очевидно, следует вы- [c.133]

Обессоливание и смена буфера с помощью гель-фильтрации широко используются в ходе очистки белков и пептидов для освобождения от сульфата аммония или в качестве промежуточной операции, подготавливающей препарат к последующему этапу хроматографии (ионообменной, аффинной или других видов). Если объем раствора белка изл еряется миллилитрами, то рутинную операцию его очистки нередко ведут вслепую . Однажды откалибровав небольшую колонку с сефадексом С-25, последующий отбор фракций, содержащих высокомолекулярные компоненты, производят по объему элюата, нередко просто путем отсчета капель. Соотношение объемов исходного раствора и колонки в этом случае может составлять примерно 1 10. В препаративных вариантах обессоливания, когда желательно максимально использовать объем колонки и избежать разбавления препарата, 5то соотношение можио увеличить до 1 3, контролируя выход хроматографических зон по УсГ-поглощению. Скорость элюции в таких опытах может быть значительной, порядка 20мл/см -ч (скорость продвижения фронта зоны очищаемого вещества по колонке — 20 см/ч). [c.137]

Методика [10. Перед употреблением малеиновый ангидрид очищают возгонкой. 20 мг бычьего химотрипсиногена растворяют в 20 мл 0,1 М пирофосфатного буфера (pH 9,0), затем при 2°С добавляют 300 мкл (6 порций по 50 мкл) 1,0 М раствора малеинового ангидрида в перегнанном диоксане. pH 9,0 поддерживают титрованием 0,1 М ЫаОН. Обессоливание проводят путем гель-фильтрации на колонке (3X40 см) с сефадексом 0-25 в 0,01 М растворе аммиака. Для снятия малеильных групп раствор белка титруют муравьиной кислотой и аммиаком до pH 3,5 и раствор инкубируют при 37 в течение 30 ч, а затем при 60 °С в течение 60 ч. [c.145]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология