Белковые растворы, обессоливание

Благодаря перечисленным выше свойствам сефадексы интенсивно используются при изучении структуры белков. Чаще всего их применяют для разделения белков в зависимости от молекулярного веса, для очистки белковых фракций, для концентрирования разбавленных растворов белка и для обессоливания белковых препаратов. [c.24]

Подготовка колонки. Для обессоливания 100 мл белкового раствора необходимо примерно 25 г сухого сефадекса 0-25. Объем раствора, из которого требуется удалить соли, должен быть не более одной пятой объема геля, заполняющего колонку. [c.220]

При очистке белков используют помимо указанных выше методов фракционирования также и ряд вспомогательных процедур. Особенно важны две из них —диализ и лиофилизация. Диализ, или удаление соли из раствора белка, заключается в пассивном переносе ионов из раствора белка через непроницаемую для белка мембрану в буферный раствор этот метод известен давно и применяется очень широко. Освобождение белка от соли путем диализа необходимо проводить на многих стадиях очистки, в частности после осаждения белка сульфатом аммония. Другой метод обессоливания — пропускание белкового раствора через соответствующие молекулярные сита. [c.81]

Работа 17. Обессоливание белкового растворе методом гель-фильтрации [c.28]

А. ОБЕССОЛИВАНИЕ БЕЛКОВЫХ РАСТВОРОВ НА КОЛОНКЕ [c.220]

Выполните лабораторную работу Обессоливание белкового раствора методом гель-фильтрации . [c.342]

Обессоливание. Белковый раствор пропускают через гель сефадекса. Содержание белка в обессоленных фракциях определяют либо по оптической плотности при 280 нм, либо в реакции осаждения белка трихлоруксусной кислотой. [c.220]

Почему при обессоливании белкового раствора методом гель-фильтрации белок по времени появляется в элюирующей жидкости раньше, чем ионы соли Как это обнаруживается [c.30]

Таблица 1.2. Размеры колонок для обессоливания белковых растворов < помощью сефадекса 0-25

Как и в случае диализа, конечный объем белкового раствора, вероятно, будет значительно больше, чем до обессоливания тем не менее перед нанесением образца на адсорбционную колонку может потребоваться дальнейшее разведение (гл. 4). Смена буферов может быть осуществлена тем же способом, что и обессоливание однако, если концентрация белка в растворе низка и объем достаточно велик, лучше предварительно провести высаливание белка, а затем растворить его в небольшом объеме буфера и обессолить на небольшой колонке. [c.33]

Препаративное фракционирование. Метод гельфильтрации впервые применили для обессоливания белковых растворов [669]. Под термином обессоливание надо понимать не только процесс удаления солей, но и отделение любых низкомолекулярных веществ от растворов макромолекул. Фильтрованием через гель сефадекса мож- [c.138]

Обессоливание растворов нейтральных аминокислот с помощью ионитов и новая препаративная методика разделения на группы аминокислот из белковых гидролизатов [194]. [c.216]

Эти смолы и соответствующие им амберлиты ША-400 и Ш-120 употребляются чаще в виде смесей в целях обессоливания белковых растворов, чем для истинных хроматографических операций [35, 36]. В тонкоизмельченном виде эти смолы иногда дают хорошее хроматографическое разделение, однако они обладают одним серьезным недостатком — низкой емкостью. Боман [37] систематически исследовал смолу дауэкс 2 (200—400 меш), имеющую 8—10% поперечных связей, и выяснил ряд интересных фактов. Перед использованием смолу промывают 1 н. раствором НС1. После насыщения смолы буфером при pH 7,3 на ней адсорбируют белки сыворотки при низкой ионной силе (0,02—0,04 М) и элюируют путем ступенчатого повышения молярпости буферного раствора. При использовании катионного буфера трис-НаХ pH регулируется лучше, чем при использовании анионного буфера, например ацетатного. Емкость дауэкс 2 при pH 7,3 для сывороточного альбумина составляет 0,5 лгг/лгуг смолы, поэтому для разделения следует использовать колонку, близкую к пределу насыщения. Как и при работе с фосфатом кальция, индивидуальный блок может элюироваться в виде нескольких небольших пиков, соответствующих разности между теми количествами белка, которые насыщают смолу при данных концентрациях солей. Боман нашел, что порядок элюирования белков сыворотки с дауэкс 2 отличается не только от порядка распределения их при электрофорезе, но также отданных, полученных при разделении на [c.232]

Когда выбран нужный буфер, следует подумать об условиях нанесения белка на колонку, а также о том, каковы должны быть ее размеры при данном количестве белка и какие еще процедуры могут понадобиться. Как правило, наносимая на колонку белковая смесь должна быть растворена в том же буфере, который используют для уравновешивания колонки. Если же в этом нет необходимости, поскольку интересующий нас фермент хорошо связывается с адсорбентом, то тем лучше — не нужно тратить В ремя на перенос образца в определенный буфер. Однако значение pH белкового раствора должно быть идентично pH буфера, уравновешивающего колонку. Желательно также, чтобы ионная сила образца была близка к ионной силе буфера. Существует два способа, с помощью которых можно получ1Ить буфер требуемого состава диализ и гель-фильтрация. Диализ является традиционным методом, и, хотя его проведение занимает много времени, он не трудоемок. В настоящее время чаще используется, особенно при работе с небольшими объемами, обессоливание методом гель-фильтрации. Эпи процессы описывались в разд. 1.4. [c.123]

G-50 для обессоливания (размер колбнки 4X40 см). Предварительно колонку уравновешивают 0,2 М ЭДТА, доведенным 1 М раствором триса до pH 7,5—7,8. В обессоленных фракциях определяют активность 3-фосфоглицераткиназы. Выход соли с колонки регистрируют пробой с ацетатом бария. Необходимо следить, чтобы белковые фракции были тщательно обессолены, так как примесь сульфата в растворе не позволит посадить белок на ионообменник (с. 108). [c.264]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология