Белки отделение

Кровяная плазма, полученная по описанной выше методике, представляет собой жидкость, слегка окрашенную каротиноидамн, и содержит следующие белки альбумины (растворимы в 5%-ном солевом растворе), липопротеины, фибриноген и протромбин. Из цельной крови без защитных добавок при стоянии через несколько минут выделяются хлопья в результате превращения растворимого глобулярного фибриногена в н< растворимый нитевидный белок—фибрин, нити которого образуют ячеистую структуру сгустков. Это превращение происходит под влиянием протромбина и ионов кальция. Центрифугирование свернувшейся крови приводит к отделению смеси фибрина и красных кровяных тел. Надосадочная жидкость представляет собой кровяную сыворотку, которая отличается от плазмы тем, что не содержит фибриногена. Витамин К является антигеморрагическим агентом, так как он снижает концентрацию протромбина. Цитрат и гепарин предупреждают свертыванис крови, связывая ионы кальция. [c.670]

Мембранное равновесие Доннана. Присутствие в организмах солей белков, отделенных клеточной мембраной от растворов электролитов, приводит к перераспределению электролитов и соответственно влияет на осмотическое давление по обе стороны мембраны. Перераспределение электролитов подчиняется выведенному Доннаном уравнению мембранного равновесия. [c.193]

Существует несколько способов отделения цитохрома с от митохондрий. Принцип всех этих методов состоит в разрушении внешней мембраны митохондрий с помощью детергентов или гипотонической обработки и экстракции белка солевыми растворами. В настоящей задаче предлагается экстрагировать цитохром с из митохондрий, убедиться в снижении оксидазной активности экстрагированных препаратов и активировать дыхание добавлением цитохрома с. В качестве объекта исследования используются митохондрии печени крысы (получение см. выше). Схематически процесс отделения цитохрома с изображен на рис. 50. [c.419]

Выделение и очистка. — Выделение гомогенных белков в нативном состоянии — весьма трудная задача, так как большинство белков весьма чувствительно к действию различных агентов и находится в виде смеси близких по свойствам веществ. Растворимость белка минимальна в изоэлектрической точке, а так как изоэлектрические точки разных белков лежат в разных интервалах pH, то создание определенного значения pH ведет к отделению одного компонента смеси от других, особенно при добавлении определенного количества соли или смешивающегося с водой органического растворителя — этилового спирта или ацетона. [c.689]

Мембранное равновесие. Присутствие в организмах солей белков, отделенных клеточной мембраной от растворов электро- [c.355]

Проведение электрофореза. Разделение можно проводить как в трубочках (с. 95), так и на пластинах для вертикального электрофореза (с. 97). После обработки ДСН к образцам добавляют сахарозу (до концентрации 10%) и в качестве лидирующего красителя — бромфеноловый синий (до концентрации 0,001%). Образцы исследуемых белков и белков-маркеров наносят на поверхность геля в объеме от 20 до 100 мкл (каждого или смеси нескольких образцов) и осторожно наслаивают электродный буфер. Нагрузка на гель определяется методом окраски гелей, а также способностью того или иного белка связывать используемый краситель. Как правило, при электрофорезе в трубочках удается обнаружить от 20 до 100 мкг белка, при электрофорезе в пластинке — от 4 до 15 мкг. В электродный буфер катодного отделения добавляют ДСН до концентрации 0,1%. Электрофоретическое разделение проводят при комнатной температуре и силе тока 8 мА на трубочку. При этом сначала устанавливают силу тока - [c.120]

К группе сложных белков, или протеидов, относятся такие белки, в состав которых, кроме белковой части, входит та или иная небелковая группа, прочно связанная с белком. Отделение белка от небелковой части достигается лишь после полного или частичного гидролиза протеидов. Все протеиды [c.221]

Технологическая схема включает следующие основные операции подготовку жидких питательных растворов, подачу в ферментатор газообразного источника углерода и кислорода, выращивание микроорганизма — продуцента белка, отделение и промывку полученной биомассы от культуральной жидкости, концентрирование биомассы и ее сушку. [c.270]

Активность иммобилизованных ферментов можно определить практически всеми известными методами (непрерывными и периодическими, спектрофотометрическими, рН-метрическим, флуоресцентными, химическими и др.). При работе с иммобилизованными ферментами не-> обходимо постоянно перемешивать реакционную смесь в процессе из--мерения активности, так как в противном случае по мере оседания частиц носителя активность будет уменьшаться. При определении активности ферментов методом отбора проб обычное осаждение белка (например, трихлоруксусной кислотой) в случае иммобилизованных препаратов можно заменить отделением фермента фильтрованием или центрифугированием. [c.298]

Перебродившую жидкость подвергают затем фракционной перегонке для возможно более тщательного отделения этилового спирта от остальных продуктов брожения и воды. Так как этиловый спирт и вода не слишком сильно отличаются по температурам кипения, то для получения фракции с высоким содержанием спирта необходимы перегонные аппараты с многократной конденсацией и испарением дистиллата. Путем применения ректификационных колонн и дефлегматоров, т. е. соединенных с перегонным кубом насадок, на охлаждаемых стенках которых происходит частичная конденсация паров, удается из перебродившей жидкости отогнать сырой спирт (сырец) более чем 90%-ной концентрации. Остающаяся в перегонном кубе жидкость, так называемая барда, содержит наряду с водой нелетучие вещества — золу, белки, жиры, глицерин, янтарную кислоту — и является превосходным кормом для скота. [c.125]

Обязательный органоид клетки вакуоли—полости, наполненные клеточным соком и отделенные от цитоплазмы вакуолярной мембраной. Форма вакуолей изменяется вследствие движения п контракции цитоплазмы. Вакуоль в молодых клетках состоит из множества мелких полостей, в старых — из одной очень большой. Клеточный сок представляет собой водный раствор различных солей, углеводов, белков, жиров и ферментов. В вакуолях сосредоточиваются различные соединения, которые должны подвергаться ферментативным превращениям, образуются продукты жизнедеятельности и отбросы. [c.195]

Наличие этих составляющих в той или иной степени характерно для любых мембранных процессов. Однако примеры использования последних в анализе суперэкотоксикантов немногочисленны, хотя мембранное разделение является одним из лучших методов для отделения анализируемых веществ на уровне следовых количеств от связанных с ними белков. Так, с помощью мембран вьщеляют микотоксины в концентрациях порядка 1-4000 мкг/кг из кормов и печени свиней 1110,111]. [c.226]

Аналогичный результат получают при очистке нуклеиновых кислот (ДНК) от фенола, который обычно применяют для их отделения от белков. Раньше от фенола освобождались путем экстракции эфиром, однако при этом часто [c.79]

Иммобилизованные ферментные препараты обладают существенными преимуществами при использовании их в прикладных целях по сравнению с нативными соединениями, что определяется легкостью отделения от пищевого продукта, многократностью использования дорогостоящего препарата, возможностью осуществления технологических процессов производства и переработки пищевой продукции в непрерывном потоке. Для иммобилизации белков в качестве носителей применяют природные, синтетические полимеры и др. [1]. [c.213]

Предназначены для отделения высокомолекулярных фракций из водных растворов (например, белков и полисахаридов). [c.920]

При наличии в растворе нейтральных солей требуется более высокая концентрация органического растворителя для осаждения белка, что нежелательно. Не рекомендуется, однако, полностью удалять соли, так как в этом случае затрудняется последующее отделение выпавшего осадка На эффективность фракционирования влияет и pH [c.201]

После центрифугирования смесь разделяется на 4 слоя небольшой осадок, водный слой, плотный слой денатурированного белка и небольшой слой избытка нерастворившегося бутанола. Водный слой с помощью шприца переносят в мерный цилиндр, измеряют объем и переносят в химический стакан (под ток азота) pH раствора доводят деаэрированной 2 н. уксусной кислотой до 6,0. При отделении вод- [c.416]

Вернемся к такой специфической особенности нейронов, как высокая скорость обмена веществ. Ядро и большая часть рибосом расположены в теле нервной клетки. Однако многие белки необходимы в высокой концентрации в аксоне и синаптических окончаниях. К таким белкам относятся ферменты синтеза и распада нейромедиаторов, а также мембранные белки. При перерезке аксона отделенное синаптическое окончание очень скоро атрофируется это наблюдение еще много лет назад позволило заключить, что из тела клетки на периферию поступают какие-то необходимые вещества. Экспериментально установлено, что действительно многие соединения перемещаются от тела клетки вниз по аксону со скоростью 1—10 мм/день. Больший интерес, однака представ- [c.349]

Если раствор белка отделен от чистого растворителя полупроницаемой мембраной, через которую могут проникать молекулы растворителя и не проникают молекулы растворенного веш ества, то величина давления по обе стороны мембраны будет различной. Разность давлений по обе стороны такой полупроницаемой мембраны называется осмотическим давлением. Ус,повием равновесия между растворо. и растворителем является (помимо равенства их температур) равенство хиашчоских потенциалов растворителя в растворе и в чистом растворителе, причем вследствие полуироницаемости мембраны равновесие имеет место только по отношению к растворителю. Отсутствие равновесия но отношению к растворенному веществу приводит к возникновению осмотического давления, которое нетрудно определить, измерив минимальное гидростатическое давление, препятствующее переносу растворителя через мембрану. Такие измерения производятся с помощью осхмометра, схематически изображенного на фиг. 14. [c.62]

Фракция у-глобулинов плазмы крови наряду с антителами содержит также и имуннонеактивные белки. Отделение антител от неактивных белков является сложной задачей, так как по электрофоретической подвижности различные белки фракции у-глобулинов близки друг к другу. Вы-сокЬочищенные антитела получают осаждением их специфическими антигенами с последующим отделением от антигенов. [c.510]

Добываемое из этих деревьев каучуковое молоко (латекс) состоит примерно из 55—60% воды и 35—40% каучука в форме мелких глобул, стабилизованных адсорбированным на их поверхности слоем белка. Часть латекса, предохраненного от брожения добавкой небольшого количества аммиака, непосредственно экспортируется в промышленные страны другая часть перерабатывается на месте его добычи в твердый каучук. В последнем случае мелкие частицы каучука коагулируют, добавляя уксусную или муравьиную кислоту, и затем коагулят обрабатывают по одному из двух различных способов для получения смокед-шитса или светлого крепа. По первому способу коагулят постепенно вытягивают на вальцах в листы толщиной 3—4 мм, после чего сушат и коптят в специальных помещениях. Копчение при температурах до 60° предохраняет каучук от окисления и плесневения. При получении крепа количество вводимого коагулянта берут с таким расчетом, чтобы при коагуляции разбавленного латекса получалась рыхлая масса последнюю после отделения водной фазы промывают и вальцуют в крепо-подобную тонкую шкурку, а затем сушат на воздухе. [c.950]

Полезный метод отделения следовых количеств веществ представляет перегонка с паром (кодистилляхщя). Этот метод, главным образом перегонка с водяным паром, используется, в частности, для разделения соединений на фуппы, например для отделения летучих веществ ог нелетучих (белков, жиров и т.п.) и выделения следовых количеств ХОП из природных вод. Предварительно следует выяснить, не разрушается ли определяемое вещество при температуре отгонки. В противном случае следует применять отгонку с паром при пониженном давлении. Отогнанные соединения обычно извлекают из конденсата жидкостной экстракцией. Иногда применяют перегонку с другими растворителями (метанол, циклогексанон и т.п.) (123 . В другом варианте добавляют растворитель, кипящий при сравнительна низкой температуре, но с которым совместно отгоняются определяемые компоненты, например дихлорметан. Этот прием даст хорошие результаты при отделении суперэкотоксикантов от веществ, содержащих природные липиды, которые хорошо растворяются в дихлорметанс(5 [c.230]

Этот выбор диктуется характером задачи, которая решается гель-фпльтрацией, и свойствами разделяемых молекул, в первую очередь их массами. Для обессоливаиия раствора макромолекул естественно использовать жесткие, достаточно мелконористые матрицы с крупными гранулами (последнее — для увеличения скорости течения), например сефадекс С-25 или биогель Р-б. Для обессоливания более мелких молекул можно воспользоваться сефадексами С-10 и С-15 или биогелями Р-2 и Р-4. Названные матрицы удобны и для смены буфера, в котором первоначально находится препарат, на тот, которым уравновешена колонка и производится элюция, или для освобождения биополимеров от радиоактивных низкомолекулярных предшественников. Близка к описанным н задача рассортировки смеси на две группы веществ — высокомолекулярных и низкомолекулярных (например, отделение белков от пептидов или нуклеиновых кислот от белков). Здесь, очевидно, следует вы- [c.133]

Особый случай представляет собой отделение белка от свободного детергента. Здесь следует помнить о том, что при концентрациях выше некоторых критических детергенты в водном растворе существуют в виде мицелл, достаточно крупных для того, чтобы не проникать в поры, например сефадекса G-25. Например, мицеллы додецилсульфата натрия (ДДС-Na) содержат до 70 молекул, т. е. имеют суммарную молекулярную массу около 20 ООО. Мицеллы Тритона Х-100 еще крупней — до 120 молекул с суммарной массой около 75 000. Критическая концентрация мицеллообразования для ДДС-Na в 0,01 М Na l составляет 0,3%, а для Тритона Х-100 — 0,06%. Это означает, что отделить от детергентов гель-фильтра-дией можно только очень крупные белки на крупнопористых матрицах. К счастью, в случае ДДС-Na проблему можно разрешить, воспользовавшись резким падением его растворимости при понижении температуры. Охлаждением препарата до 0° основную массу [c.138]

Накоплен большой оиыт псиользования гель-фильтрации для очистки рибосом, полисом и ферментов, участвующих в биосинтезе белка и образующих комплексы с нуклеиновыми кислотами, нуклеотидами, а также аминокислотами. Например, при исследовании аминоацилирования тРНК для отделения аминоацил-тРНК-син-тетаз и их комплексов с АТФ и аминокислотами от свободных ами- [c.141]

Некоторое недоумение на первый взгляд может вызвать другая работа, где гидрофобная обратнофазовая хроматография использовалась, как и выше, для фракционирования негистоновых белков хроматина. В этой работе предварительно отделенные от нуклеиновых кислот и гистонов (на оксиапатите) белки хроматина сначала диали-зовали против довольно концентрированного раствора сульфата ам- [c.182]

Разумеется, без достаточных экспериментальных подтверждений мы не можем настаивать на таком объяснении, однако это и не так уже существенно. Важен надежно установленный экспериментальный факт для элюции нативной ДНК (или двунитевой РНК, а также гибридных молекул ДНК—РНК) с оксиапатита требуется почти вдвое более высокая концентрация фосфатного буфера, чем для элюции денатурированной ДНК или однонитевой РНК. Это обстоятельство открыло возможность быстрого и надежного отделения двунитевых молекул нуклеиновых кислот от однонитевых, что сыграло очень важную роль как в изучении структуры генома (исследования кинетики ренатурации), так и в развитии современных методов генной инженерии (гибридизация молекул НК и др.). Как и в случае кислых белков, присутствие даже относительно высоких концентраций неорганических солей в элюирующем буфере практически не сказывается на процессах элюции одно- и двунитевых молекул НК с оксиапатита. Вместе с тем, варьируя концентрацию Na l или КС1 в буфере, можно управлять изменением конформации самих нуклеиновых кислот, а также характером их гибридизации (например, отделять истинные , полноценные, гибридные молекулы от несовершенных гибридов ). [c.230]

Биологическая активность фермента в ходе хроматографии может измениться (как уменьшиться, так иногда в возрасти) в силу ряда дополнительных причин. Например, кажущееся увеличение активности фермента может быть результатом его отделения от протеаз. Снизиться активность может как в результате истинной денатурации илп окисления 8Н-групп белка, так и при отделении апофермепта от кофакторов. Иногда инактивация обусловлена разъединением двух или нескольких последовательно работающих ферментов. Такого рода кажущиеся инактивации могут быть обнаружены при объединении хроматографических фракций, когда активность фермента восстанавливается. Для сохранения биологической активности липофильных белков мембран в элюент иногда приходится добавлять спирт или ацетон. При этом может возникнуть определенная неравномерность распределения органического растворителя между жидкостью внутри и снаружи гранул — ионы сорбента, гидратируясь, оттягивают на себя воду. Следствие этой неравномерности — наложение на ионный обмен эффекта распределетельной хроматографии. Для сохранения биологической активности ферментов в элюент часто добавляют глицерин (до 25%) или этиленгликоль (до 5%). [c.292]

Определение гликогена. Исследуемую пробу предварительно обрабатывают щелочью для разрушения простых сахаров. При высоком содержании гликогена в пробе определение проводят прямым методом, т. е. непосредственно из раствора. Прямой метод применяется при определении гликогена в ткани печени, в опытах с добавлением гликогена. Если содержание гликогена в пробе мало, то перед определением его осаждают спиртом — непрямой метод. Предварительное отделение гликогена в этом случае необходимо потому, что окраску с антроном дают также и продукты гидролиза белка, и при небольших количествах гликогена это не может не сказаться на результатах определения. [c.24]

В процессе выделения фермента из дрожжей происходит частичное отщепление от него тиаминпирофосфата. Полное отделение можно получить, выдерживая фермент в щелочной среде (pH 8,0) или путем диализа против раствора ЭДТА. Взаимодействие кофермента с апо-ферментом осуществляется при участии ионов двухвалентных металлов, таких как Mg +, ea +, Мп2+ и др. В нативной холотранскетолазе обнаружен только кальций в количестве 2 г-атом на моль белка. [c.279]

Препараты иммобилизованной глицеральдегид-З-фосфатдегидроге-назы промывают 10-кратным объемом 0,15 М Na l. Добавляют к осажденному центрифугированием гелю равный объем раствора АТФ и инкубируют суспензию при 4° С в течение 2 ч. После окончания инкубации препараты промывают 0,1 М Na-фосфатом для отделения денатурированного белка и АТФ до полного исчезновения поглощения элюата при 260 и 280 нм. В полученных препаратах иммобилизованных димеров определяют активность и содержание белка. Такого рода определения можно проводить и в процессе инкубации с АТФ для выяснения особенностей протекания процесса диссоциации иммобилизованного тетрамера. [c.301]

Кюветы спектрофотометра заполняют средой, содержащей фосфатный буфер (pH 7,4), 1 мМ K N, 1 мкМ ротенон, 1,5 мМ НАДН, 10—20 мкМ цитохром с. Устанавливают длину волны 550 нм (точно ). Для этого кювету помещают в кюветное отделение, устанавливают длину волны по шкале прибора на отметке 550 нм и добавляют к среде нейтрализованный (pH 7,4) раствор аскорбиновой кислоты (конечная концентрация — 5—10 мМ). Цитохром с немедленно восстанавливается, и раствор меняет цвет от красновато-оранжевого до ярко-розового. Устанавливают шкалу длин волн на 550 нм по максимальному поглощению раствора восстановленного цитохрома с, при дальнейшей работе установку длин волн не меняют. Реакцию начинают внесением препаратов в кювету, содержащую окисленный цитохром с, и регистрируют увеличение поглощения при 550 нм. Рассчитывают удельную активность препаратов в микроэлектронэквивалентах за 1 мин в расчете на 1 мг белка. Коэффициент миллимолярной экстинкции для цитохрома с Активность фермента, характерного для внешней мембраны, определяют по разнице скоростей реакций в присутствии и в отсутствие ротенона. [c.412]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология