Метилаза

Широкое распространение обмена ДНК между бактериями ставит перед ними задачу сохранения собственного генома. Далеко не всегда проникшая в клетку чужеродная ДНК.способна оказаться полезной. Более того, посторонний генетический материал может быть губительным для клетки, особенно если принадлежит бактериальному вирусу, бактериофагу. Для того чтобы бороться с чужеродной ДНК, нужно уметь отличать свою ДНК от чужой. Бактерии достигают этого те.м, что метят свою ДНК с помощью специального модифицирующего фермента. Практически все виды бактерий имеют метилазы, модифицирующие аденин или цитозин в определенной, характерной для данного вида последовательности ДНК- Другой специальный фермент, эндонуклеаза рестрикции (рестриктаза), узнает ту же последовательность и разрезает ее, если она не модифицирована, т. е. попала в клетку извне. Таким путем бактерии ограничивают возможности попадания в них постороннего генетического материала. [c.129]

Рестриктазы III типа являются промежуточными между ферментами 1 и II типов. Подобно ферментам 1 типа, в состав единого фермента III типа входят и рестриктаза, и метилаза. Рестриктазы [c.132]

Модификация ДНК хозяина ДНК-метилаза М [c.187]

Перенос метильных групп от SAM на специфические участки ДНК— самая распространенная модификация ДНК. Наиболее часто метилируются аминогруппа в 6-м положении аденина и 5-й углеродный атом цитозина. Обычно каждую рестриктирующую нуклеазу сопровождают метилазы. [c.280]

Соответствующие метилазы называются M-Bst I. M-Alu I и т. д. [c.131]

Рестриктазы П1 типа являются промежуточными между ферментами I и И типов. Подобно ферментам I типа, в состав единого фермента П1 типа входят и рестриктаза, и метилаза. Рестриктазы И1 типа вносят разрыв не в сайт узнавания, но в отличие от рестриктаз I типа на небольшом фиксированно.м расстоянии от него. [c.132]

Укажите реагенты и условия, необходимые для получения из л-толилдиазонийхлорида а) толуола б) л-фтортолуола в) 2,4-дигидрокси-4 -метилазо-бензола [c.116]

Системы рестрикции II типа обнаружены у очень многих бактерий. Эти системы состоят из двух отдельных ферментов, рестриктазы н метилазы, узнающих одну и ту же последовательность ДНК — сайт рестрикции. Если сайт рестрикции не метилирован, то рестриктаза вносит в него двуцепочечный разрыв. ДНК не подвергается рестрикции, если хотя бы одна цепь метилирована. Такие свойства предохраняют собственную ДНК бактерий от рестрикции собственная ДНК либо полностью метилирована по всем сайтам рестрикции, либо, после репликации, патуметилирована. На полуметилированные сайты рестрикции действует метилаза и метилирует их полностью. Как и прочие клеточные метилазы, метилазы системы рестрикции-модификации в качестве донора метильных групп нс-патьзуют 5-аденозилметионин. В табл. 7 для примера приведены данные о некоторых рестриктазах и метилазах II типа. [c.130]

Сайт рестрикции рестриктаз II типа, как правило, симметричен обе цепи ДНК и.меют одинаковую последовательность, если читать ее в одном и том же направлении (например, от 5 - к З -концу ДНК) для каждой цепи (табл. 7). Эго естественно, поскатьку рестриктазы вносят разрывы в обе цепи ДНК и метилазы тоже метилируют обе цепи. [c.130]

TGA. TG T=3 . Если оба отмеченных звездочкой аденина этой последовательности метилированы, то рестриктаза ничего с последовательностью не делает. Если метилирован только один аденин (например, после репликации нлн репарации), то метилаза метилирует второй, используя S-аденозилметионин в качестве донора метильной группы. Если же сайт не. метилирован, то ДНК. в составе [c.131]

Роль локального метилирования ДНК как фактора, контролирующего активность генов, подтверждается прежде всего реактивацией некоторых неактивных генов после частичного деметилирования. Метилирование можно ингибировать, добавляя к культурам клеток 5-азацитидин, подавляющий активность метилаз. В присутствии 5-азацитидина удается наблюдать резкое возрастание уровня экспрессии генов — в 10 —10 раз. если, например, судить об этом по увеличению активности фермента. В таком случае эффект 5-азацитидина по силе своего действия сопоставим с э(Й)ектом мутационного события. Добавление 5-азацитидина иногда вызывает процессы дифференцировки, например образование мышечной ткани в культуре миобластов. [c.219]

Еще один возможный механиз.м сохранения информации об активности генов в ходе клеточного деления — это метилирование ДНК- У прокариот метилаза узнает полуметилированный по одной цепи ДНК сайт после репликации и восстанавливает общую картину метилирования. Возможно, сходные механизмы действуют у эукариот. Ряд данных указывают на то, что ингибиторы метилирования ДНК активируют многие гены после одного или нескольких раундов репликации. В растительных клетках метилирование регуляторных участков некоторых генов приводит к их полному выключению на протяжении многих поколений. Это явление трудно отличить от истинной мутации. [c.258]

Пример 10. Очистка метилазы белка из мозга теленка на SAH-сефарозе [Kim et al., 1978]. Метилазы, катализирующие метилирование белков, как и лучше изученные метилазы тРНК, в качестве донора метила используют S-аденозилметионин (SAM), который после переноса метильной группы на белок превращается в S-аденозилгомоцистеин (SAH). Последний, являясь ингибитором метилазной активности, обладает высоким сродством к ферменту. [c.432]

Аффинную очистку метилаз вели на сорбенте, полученном иммобилизацией SAH на сефарозе. Исходной матрицей служила AH-Sepharose 4В . Спейсер активировали присоединением остатка бромуксусной кислоты в] реакции с О-бром-ацетил-К-оксисукцинимидом. SAH фиксировали инкубацией с суспензией активированного сорбента в течение 3 сут при комнатной температуре. Частично очищенный фермент сорбировали на ВАН-сефарозе в 0,005 М Na-фос-фатном буфере (pH 6,2) с 5 мМ ЭДТА и 2,4 мМ -меркаптоэтанола. Биоспецифи-ческую элюцию вели раствором субстрата — 0,02 мМ SAM в том же буфере. [c.432]

Распознавание чужеродной ДНК ос) ществ гяегся в спецнфич. нуклеотидных последовательностях (сайтах), к-рые в собственной ДНК клетки отмечены благодаря модификации (чаще всего метилированию) спец. ферментами (напр., метилазами) иногда такой модифицяр ющей активностью обладают и сами Р. [c.259]

Сочетание проводили по методике, аналогичной получению азокрасителя 2 -хлор-4 -нитро-2-амино-4-метокси-5-метилазо- [c.89]

Диметиловый эфир 4 -нитро-2-амипо-4-метокси-5-метилазо-бензол-1Ч,N-диуксусной кислоты нерастворим в воде, крепких и разбавленных щелочах, плохо растворим в разбавленных минеральных и органических кислотах, в холодном этиловом спирте. Растворим в концентрированных кислотах, в горячем этиловом спирте, в метиловом спирте, ацетоне, хлороформе, четыреххлористом углероде, бензоле и в других органических растворителях. [c.91]

Метилирование позволяет отличить старую цепь ДНК от новой . В течение нескольких минут,после репликации, пока ие подействовала метилаза, новосинтезированная ДНК не метилирована, т. е. отличается от матричной цепи) / — полностью метилированная ДНК // — полуметилированная ДНК ill — полностью метилированная ДНК [c.82]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология