Электроэндосмос Электрофорез

Большинство работ по ИЭФ в геле выполнено с применением полиакриламидного геля, так как остальные употребляемые при электрофорезе гелеобразующие вещества содержат заряженные группы и, следовательно, при работе с ними возникает электроэндосмос, влияющий на результаты разделения. Правда, недавно появилась одна статья [631], в которой описаны способ очистки агарозы на QAE-сефадексе и применение этого очищенного препарата для ИЭФ в геле. [c.147]

Агароза — для большинства видов электрофореза требуется агароза с низким электроэндосмосом, ее же можно использовать для реакций диффузии. [c.199]

ИЭФ можно проводить также в установке, созданной Йертеном [565, 566] для электрофореза со стабилизацией зон при помощи вращения разделительной колонки со скоростью 40 об/мин (см. рис. 6). Фокусирование осуществляют в кварцевой трубке, покрытой слоем метилцеллюлозы для предотвращения электроэндосмоса. Белковые полосы регистрируют путем сканирования трубки в ультрафиолетовом свете. [c.145]

Большинство преципитирующих антител относится к классу иммуноглобулинов О (1дО), обладающих лишь очень слабым отрицательным зарядом при pH 8—9. Поэтому электроосмоти-ческий поток смещает 1 0 к катоду. Электроэндосмос заметно уменьшается при замене агара агарозой. Путем подбора определенных соотношений агара и агарозы можно регулировать скорость эндосмоса, создавая тем самым оптимальные условия для электросинереза. Очевидно, что антитела следует помещать ближе к аноду, а антиген — ближе к катоду. Если расположить рядом несколько лунок с антигенами, то последние можно сравнивать между собой подобно тому, как это делается в методе двойной иммунодиффузии [186]. Видимые линии преципитации образуются в течение 1—2 ч. Избыток реагентов удаляют, продолжая электрофорез после образования преципитатов. При этом нет надобности отмывать гель перед окрашиванием, что позволяет в течение 3—4 ч получить полную картину окрашенных полос преципитации. [c.247]

Второй наиболее важный электрофоретический метод — это электрофорез в агаровом геле при pH 6,0—6,5 [ПОЗ]. В исходном методе рекомендуется наливать 1%-ный раствор агара в цитратном буфере на стеклянные пластинки размером 22Х Х13 см. Образцы наносят на маленькие кусочки фильтровальной бумаги, которые помещают в щели, вырезанные в агаровом геле, или просто накладывают на поверхность геля, и после того, как белки проникнут в гель, начинают электрофорез. Шнейдер [1141] описал метод электрофореза на предметных стеклах в агаровом геле, забуференном цитратом. Образцы наносят на гель в виде круглого пятна. Кроме того, на каждую пластинку следует наносить стандартный гемолизат (содержащий, как правило, НЬАЗ), поскольку положение компонентов варьирует в зависимости от величины электроэндосмоса. При перемещении к катоду гемоглобины располагаются в следующем порядке НЬР> НЬА>НЬ8>НЬС. Та же закономерность наблюдается и в отношении растворимости гемоглобинов при pH 6,0. Основное преимущество этого метода электрофореза состоит в том, что он позволяет отделять НЬС от НЬЕ и НЬ5 от НЬВ, а также определять малые количества НЬА в присутствии НЬР. Многие мутантные виды гемоглобина (О, В, Е, О, I [c.322]

Наиболее часто для определения фенотипа трансферрина используют электрофорез в крахмальном геле. Разделение проводят в боратном буфере Смитиса [1199] или в неоднородной трис-цитратной системе Паулика [1028]. Для установления фенотипа трансферринов животных применяют и другие буферные системы, в частности систему Аштона и Брейдена [65]. Спунер и Бакстер [1221] использовали буфер трис-какодиловая кислота (pH 7,45). Кроме того, с этой целью проводят электрофорез в полиакриламидном геле в трис-глициновом буфере при pH 8,8 [960] или при pH 9,3 [1275]. Наличие в сыворотке человека того или иного вариантного трансферрина обнаруживают также с помощью электрофореза в агаровом геле [630], а для подтверждения полученных результатов осуществляют во втором направлении иммуноэлектрофорез [424]. Однако в этом случае картина оказывается менее четкой, чем при электрофорезе в крахмальном или полиакриламидном геле. В последнее время стали применять другой подход вначале сыворотку подвергают изоэлектрофокусированию в геле из специальной марки агарозы (лишенной электроэндосмоса), а затем проводят электрофорез в геле, содержащем антитела [492, 631]. [c.346]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология