Чувствительность флуоресценции хромофора к окружению

Флуоресценция, как правило, гораздо более чувствительна к окружению хромофора, чем поглощение, и это позволяет с успехом использовать ее для изучения связывания ли- [c.94]

Флуоресценция более чувствительна к окружению, чем поглощение, поскольку процессы испускания охватывают сравнительно протяженный период времени. Можно регистрировать стационарные спектры излучения либо исследовать истинную кинетику затухания излучения. При достаточно близком расположении двух хромофоров происходит перенос энергии. Возбуждая один хромофор, можно наблюдать флуоресценцию другого. Вероятность переноса обратно пропорциональна шестой степени расстояния между хромофорами. Таким образом, измеряя эффективность переноса энергии, можно найти расстояние между двумя характерными точками макромолекулы. При пропускании через жесткие или замороженные образцы поляризованного света наблюдается преимущественное поглощение хромофорами, обладающими моментами переходов, ориентированными параллельно направлению поляризации. В отсутствие молекулярного движения флуоресценция будет иметь предельную поляризацию. Характерное время вращения молекул типичных белков и нуклеиновых кислот в растворе составляет от 10 до 100 не, в то время как время затухания флуоресценции лежит в интервале от I до 30 не. Таким образом, наблюдаемая для растворов степень поляризации определяется соотношением между временами затухания флуоресценции и молекулярного вращения. При помощи поляризационных [c.123]

Как было показано в предыдущей главе, спектры поглощения позволяют получать различного рода информацию о свойствах макромолекул и их взаимодействиях с другими молекулами. Возможность получения такой информации основана на том, что спектр поглощения молекулы, содержащей хромофор, в значительной степени зависит от ее химического и внешнего окружения. В этой главе будет рассмотрен более чувствительный спектроскопический метод — флуоресценция. [c.415]

Флуоресцентные методы часто применяются для определени1г параметров, характеризующих связывание хромофора с мембраной. Для этого используют 1-анилин-8-нафталинсульфонат (АНС)—первый зонд, примененный Д. Лоуренсом в 1952 г. для исследования мембранных структур. В неполярном окружении интенсивность флуоресценции этого зонда заметно возрастает, и максимум ее сдвигается в область более коротких длин волн. При правильно выбранной области возбуждения и флуоресценции практически вся флуоресценция будет исходить от зонда, связанного с мембраной. Связывание заряженных молекул зонда с мембраной зависит от плотности заряда на ней и может быть использовано для определения этого параметра, а также величины трансмембранного потенциала. рН-чувствительные флуоресцентные зонды (производные акридина) применяют для измерения градиента pH на мембране. [c.81]