Использование мочевины и детергентов

Использование мочевины и детергентов [c.24]

Наиболее широко распространенным детергентом, применяемым для солюбилизации мембран, является ДСН. В концентрации более 1% он переводит в растворимую форму, по-видимому, все мембранные белки бактериальных [613] и эукариотических [358, 755, 829, 896] клеток. При использовании ДСН в более низких концентрациях достигается лишь частичная солюбилизация мембранных компонентов [781], что позволяет фракционировать белки в соответствии с растворимостью их комплексов, образующихся при разных концентрациях ДСН [167]. Присутствие мочевины [766, 776] и обработка ультразвуком [1041] способствуют солюбилизации белков в ДСН. [c.316]

Биогель Р (Bio-Rad Laboratories, США). Сферические гранулы полиакриламида, получаемые сополимеризацией акриламида и N,N -мeтилeнби aкpилaмидa. Размер пор регулируется содержанием используемого поперечно-спшвающего реагента. Устойчив в органических растворителях (но в большинстве из них не набухает и, таким образом, не может быть в них использован), солевых растворах, детергентах, 8 М мочевине, 6 М гуанидин-НС1. Устойчив при pH 2 -н 10 амидные группы гидролизуются при более высоких и более низких pH. Окисляется под действием сильных окислителей. Может быть автоклавирован при 120°С и pH 5,5 6,5. [c.439]

При хроматографии и электрофорезе белков использование органических растворителей исключается из-за их денатурирую щего действия, в результате которого белки переходят в нерастворимое сйстояние. Подобное действие могут оказывать и некоторые органические соединения. Поэтому при разделении белков необходим тщательный выбор селективных водных буферных систем. Однако необходимость солюбилизации белков, в особенности тех из них, которые ассоциированы с биологическими мембранами, привела к введению детергентов — как ионных, так и неионных, а также таких реагентов, как мочевина и гидрохлорид гуанидина, которые разрывают водородные связи и препятствуют гидрофобным взаимодействиям. Даже будучи денатурированными, многие белки остаются растворимыми в присутствии этих соединений, особенно после расщепления ди-сульфидных связей дитиотретиолом или меркаптоэтанолом. [c.105]

При нейтральном или близких к нему значениях pH большинство вирусов диссоциирует лишь при добавлении сильных денатурирующих агентов. Добавлением мочевины или формамида до концентрации 8—10 М при pH 7—8 можно вызвать диссоциацию многих вирусов, а для отделения высвободившегося белка от вирусной РНК часто прибегают к методу осаждения белка сульфатом аммония. Белок ВТМ, выделенный таким способом при 20%-ном насыщении сульфата аммония, нерастворим даже в присутствии дитиотреитола, предотвращающего самоокисление. Денатурированный белок ВТМ успешно ренатурирует при растворении в 8 М растворе мочевины и последующем диализе против 0,02 М фосфата при pH 6 [7]. Под действием мочевины ренатурация белка может произойти даже после его обработки галоидоводородными солями гуанидина (4 М), которые относятся к более сильным денатурирующим агентам. У таких детергентов, как додецилсульфат натрия, наблюдается тенденция слишком прочно связываться с белками, что и является основным недостатком при их использовании для выделения белков. [c.50]

Однако Уиллард и соавторы утверждают, что полного растворения основных белков (из гепатомы Новикова) не удается добиться с помощью мочевины, NP-40, умеренных концентраций ДДС-Na, а также с помощью цетавлона и ряда других детергентов катионной природы. Решить проблему растворения и фракционирования основных белков в системе формирующегося градиента pH удалось путем использования в качестве детергента 0,5%-ного раствора дипальмитоил-Ь-а-фосфатндилхолнна в сочетании с 9,5 М мочевиной [Willard et al., 1979]. [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология