Я и у л а й т и с. Ферменты рестрикции и их применение

ФЕРМЕНТЫ РЕСТРИКЦИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ [c.4]

Как уже упоминалось, одним из простых и эффективных методов обнаружения метилированных остатков С и А в ДНК является использование эндонуклеаз рестрикции, чувствительных к метилированию (ЭРЧМ) (см. раздел 2.2) (рис. 21, а). В этом случае инкубация изучаемой ДНК с ЭРЧМ в зависимости от статуса метилирования исследуемого участка может приводить или не приводить к разрушению ампликона и подавлению его амплификации в ПЦР. Однако, поскольку не всегда в нужных местах генома присутствуют соответствующие сайты рестрикции, применение таких ферментов имеет ограничения. При другом распространенном подходе, лишенном этого недостатка, используют способность бисульфита (HSO3) превращать в оц ДНК остатки С [c.220]

А. А. Янулайтис. Ферменты рестрикции и их применение Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Биотехнология, т. 17, 1989. 1—201 Обзор содержит информацию о способах поиска, характеристики, свойствах и использовании ферментов рестрикции, ключевой группы ферментов, необходимых для проведения современных теоретических и прикладных молекулярно-биологических исследований. Библ. 722 [c.204]

Получение генов. Их возможно получать методом химического синтеза, выделением из геномов живых организмов, а также при помоши обратной транскриптазы, которая на соответствующей мРНК кодирует комплементарную ДНК (кДНК). Первый и второй методы имеют ограниченное применение. Химический синтез — достаточно длительная и дорогостоящая процедура. Вьщеление однородных фрагментов ДНК осуществляется при помощи ферментов-рестриктаз, которые узнают и расщепляют ДНК в строго фиксированных точках. Эти ферменты функционально связаны с модифицирующими метилазами следующим образом метилазы осуществляют метилирование в сайтах ДНК, которые атакуются рестриктазами. Метилирование защищает собственную ДНК клетки от неспецифической фрагментации, в то время как чужеродная ДНК немедленно разрушается. В месте разрыва полинуклеотидных цепей образуются, в частности, липкие концы, способные образовывать между собой комплементарные пары оснований. Открытие В. Арбером рестрикции и использование ее для получения генов было отмечено Нобелевской премией. В настоящее время идентифицировано более 500 рестриктаз, причем их название складывается из первой буквы рода микроорганизма и двух пер- [c.499]

Следует отметить, что исследования систем RM II типа методами генанализа являются немногочисленными. Это вполне объяснимо, учитывая тот факт, что подавляющее большинство продуцентов рестриктаз относятся к таксонам, которые пока недоступны для применения генетических методов исследования. Поэтому в этом случае единственным выходом из создавшейся ситуации является применение молекулярно-генетического метода — метода генной инженерии. Учитывая большие потенциальные возможности этой методологии, в последнее время она стала основным подходом при исследовании таких вопросов как структура и структурная организация, а также регуляция экспрессии генов гт. Большой интерес представляют данные о первичной структуре, наличие которых способствует решению таких фундаментальных задач, как механизмы высокоспецифического белок-нуклеинового взаимодействия и эволюции генов рестрикции-модификации. В прикладном аспекте клонирование генов гт и исследование их структуры является базой для создания высокоэффективных продуцентов дефицитных ферментов. [c.101]

Значительная часть исследований, в особенности на первом этапе изучения рестриктаз, была посвящена поиску, очистке и характеристике специфичности рестриктаз. Это направление исследований не потеряло своей актуальности и в настоящее время и стимулируется как желанием обнаружить новые по специфичности ферменты с целью их дальнейшего применения в качестве аналитических реагентов, так и необходимостью изучения таких фундаментальных вопросов как закономерность распространения рестриктаз и вариабильность их субстратной специфичности. В настоящем разделе будут рассмотрены некоторые методические аспекты решения обсуждаемых, а также ряда других задач (определение активности, клонирование генов рестрикции-модификации). [c.126]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология