Глобины клонирование генов

Микроинъекцию клонированных генов проводят в один или оба пронуклеуса только что оплодотворенной яйцеклетки мыши. После инъекции яйцеклетку немедленно имплантируют в яйцевод приемной матери или дают возможность развиваться в культуре до стадии бластоцисты, после чего имплантируют в матку. Таким образом были инъецированы гены интерферона и инсулина человека, ген глобина кролика, ген тимидинкиназного вируса герпеса и кДНК вируса лейкемии мышей. Выживает обычно от 10 до 30 % яйцеклеток, а доля мышей, родившихся из трансформированных яйцеклеток, составляет от нескольких до 40 %. [c.127]

Молекулярные механизмы, лежашие в основе примеров генетической регуляции, описанной в этой главе, в основном неизвестны. Однако генетический анализ сложных процессов развития позволил идентифицировать гены, играющие важную - возможно, даже главную-роль в процессах развития, как, например, гены ВХ-С у дрозофилы или Т локус у мыши. Генетические исследования помогают понять сложность генетических регуляторных механизмов, управляющих процессами развития, и сформулировать гипотезы, касающиеся их функций. Методики, использующие рекомбинантную ДНК, в настоящее время применяются для клонирования генов, играющих важную роль в процессе развития. С помощью этих методов изучают структуру генов и транскрипцию в отдельных клетках развивающегося зародыша. Первые результаты таких исследований мы обсуждали в гл. 16 при рассмотрении генов глобина человека. Вскоре появятся новые результаты. [c.283]

В лаборатории X. Темина в 1981-1983 гг. была разработана система клонирования генов в составе генома вируса некроза селезенки (SNV). Использована клонированная в плазмиде ДНК провируса SNV. В различные места этой ДНК встраивали фрагмент генома HSV-1, содержащий ген тимидинкиназы. Во всех случаях после встройки гена tk провирусная ДНК была неинфекционна из-за нарушения каких-либо функций, но интегрировалась в геном клеток ТК , обусловливая их генетическую трансформацию к фенотипу ТК При инсерци-онном повреждении LTR эффективность генетической трансформации была низкой, что доказывает важную роль LTR в процессе интеграции ретровирусной ДНК. Чтобы получить потомство гибридных вирусов SNV, в клетки кроме гибридной ДНК ввели котрансфекцией ДНК вируса ретикулоэндотелиоза для продукции ви-руса-помощника. В результате удалось получить в высоком титре потомство гибридного вируса SNV, при инфекции которым ТК -клеток цыпленка или крысы происходила их генетическая трансформация к фенотипу ТК" . Объединение в составе генома ретровируса легко селектируемого маркера генетической трансформации и любого другого гена позволяет упростить работу с гибридными ретровирусами. Данный подход успешно реализован в 1982 г при встройке в ДНК ретровируса SNV хромосомного гена а-глобина мыши или гена tk вируса простого герпеса. [c.403]

Клонирование генов на основе библиотек кДНЕ имеет ряд преимуществ. Первое из них связано с тем, что многие белки вырабатываются специализированными клетками в очень больших количествах, а значит, в избытке синтезируется и мРНЕ, кодирующая подобный белок Библиотека кДНК для таких клеток, естественно, обогащена молекулами кДНЕ, кодирующей данный белок (рис 5-81) Это обилие именно нужных молекул кДНК сильно облегчает задачу распознавания требуемого клона в библиотеке Гемоглобин, например, синтезируется в больших количествах в развивающихся эритроцитах, и как раз по этой причине в числе первых подвергнутых клонированию генов были гены глобина [c.330]

Синтез HSP зависит от активации транскрипции генов теплового шока. Индукция происходит безотлагательно, при этом в течение часа теплового воздействия количество мРНК возрастает с менее чем одной молекулы на клетку до тысяч молекул. Некоторые гены теплового шока регулируются в процессе развития и не нуждаются для активации своей транскрипции в тепловом шоке. Клонирование и секвенирование генов теплового шока из разных организмов позволило выявить основные особенности транскрипционного ответа на это воздействие. Как правило, промоторы, осуществляющие регуляцию транскрипции в ответ на тепловой шок, состоят из нескольких повторов относительно короткой последовательности (элементы теплового шока-HSE), рассеянных внутри области протяженностью 200 п.н. перед ТАТА. Эта каноническая последовательность, обнаруженная в регуляторных областях многих промоторов теплового шока у разных организмов, имеет вид 5 - NGAANTT NG-3, где N-любое из четырех оснований. HSE-элементы, помещенные перед ТАТА-блоком гетерологичных промоторов (например, промотора гена ТК вируса герпеса или промотора гена р-глобина), обусловливают чувствительность транскрипции с этих промоторов к тепловой индукции. [c.81]

Впервые Alu-последовательности были выделены и клонированы (случайным образом) из ДНК человека (рис. 9.41), и исходя из этих данных была построена каноническая последовательность. Затем клонированные члены Alu-семейства использовали в качестве зондов для определения числа копий методом кинетики реассоциации. Было обнаружено 9 10 копий Alu-последовательностей на гаплоидный геном (или около 9% геномной ДНК человека). В среднем на каждые 5 т.п.н. генома человека и других приматов Старого Света приходится одна Alu-последовательность. С Alu-зондами гибридизуется ДНК более 90% рекомбинантных фагов, содержащих хромосомную ДНК человека, а больщинство из клонированных сегментов длиной 15-20 т.п.н. содержит более одного члена Alu-семейства. Соседние Alu-последовательности могут располагаться друг относительно друга в любой ориентации, поэтому некоторые из них входят во фракцию схлоп-нувщейся геномной ДНК. Например, из восьми Alu-последовательностей в пределах сегмента ДНК длиной 65 т.п.н, которые входят в состав мультигенного семейства генов -глобина, пять ориентированы в одном направлении, а три-в другом (рис. 9.42). [c.202]

В простейшем случае ПДРФ обусловливается тем же изменением нуклеотидной последовательности, которое детерминирует определенный мутантный фенотип. Именно такова ситуация с мутантным -глобиновым геном, сопряженным с серповидноклеточной анемией (рис. III.6). ПДРФ такого рода встречается редко, однако анализ рестриктов ДНК человека и других млекопитающих с помощью различных случайным образом отобранных клонированных зондов показал, что даже у нормальных особей аллели данного локуса у гомологичных хромосом часто обнаруживают полиморфизм. Число таких локусов гораздо больше, чем это следует из генетических и структурных данных. По оценкам, полиморфной может быть каждая сотая пара оснований из 65 т.п.н., составляющих ген -глобина человека. [c.354]

Многочисленные работы, выполненные в разных лабораториях, показали, что экспрессии гена З-глобина человека, клонированного в составе ретровирусного вектора, гораздо проще добиться в культуре клеток или клетках костного мозга, чем в организме реконструиро- [c.410]

Смотреть страницы где упоминается термин Глобины клонирование генов: [c.317] [c.330] [c.123] [c.123] [c.412] [c.364] [c.369] [c.87] [c.145] [c.156] [c.214] [c.988] [c.231] [c.152] [c.342] [c.128] [c.137] [c.128] [c.137] [c.398] [c.399] [c.142] [c.176] [c.313] [c.359] [c.231]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология