Секвенирование генов

В общих чертах стратегия Сенгера сохранила свое значение и до наших дней, однако за истекшие десятилетия были разработаны два новых подхода, которые произвели революцию в определении первичной структуры полипептидов (белков). Первый подход основан на разработанной Эдманом в 1967 г. автоматической процедуре последовательного отщепления и идентификации N-кoнцeвыx аминокислотных остатков в виде их фенилтиогидантоиновых производных. Второй подход связан с методом, разработанным Сенгером и, независимо, Максамом и Гилбертом, позволяющим проводить быстрое и однозначное секвенирование гена, кодирующего рассматриваемый белок. Оптимальная стратегия состоит в одновременном использовании обоих подходов. Автоматическая деградация по Эдману, намного более быстрая по сравнению с первоначальным ручным методом Сенгера, тем не менее сильно уступает по скорости методам секвенирования ДНК и сопряжена с рядом трудностей. С другой стороны, секвенирование ДНК не всегда дает однозначную первичную структуру исследуемого белка. Главным [c.38]

Генетические методы включают в себя весь арсенал генетического анализа болезни — от применения клинико-генеалогического метода до секвенирования гена. Накопление родословных по какому-либо заболеванию и их генетический анализ позволяют подразделять ранее описываемую одну болезнь на реально существующие формы, если в этой группе встречаются мутации с доминантным и рецессивным типом наследования. Именно так были подразделены синдром Марфана (доминантное наследование) и гомоцистинурия (рецессивное наследование), имеющие сходную клиническую картину (высокий рост, подвывих хрусталика, деформация грудной клетки). Разные типы наследования обнаружены во многих гетерогенных группах болезней (синдром Элерса—Данло, мукополисахаридозы, витамин О-резистентный рахит, амиотрофия Шарко—Мари). [c.124]

Эти спирали, но-видимому, взаимодействуют друг с другом, образуя стенки поры, заполненной водой. Совсем недавно был секвенирован ген, [c.401]

Размер белка КА вируса гриппа В, аминотерминальный гидрофобный участок и гомология между вирусами А и В — все эти данные свидетельствуют в пользу того, что трансляция КА В/Ьее начинается со 2-го кодона АУГ на 5 -конце мРНК [94]. В большинстве мРНК эукариот, включая те или другие секвенированные гены вируса гриппа, первый кодон АУГ используется как сайт инициации трансляции, но есть несколько случаев среди генов эукариот, когда первый кодон АУГ не принимается во внимание за счет гипотетического сканирующего механизма [36]. Однако ген КА вируса гриппа В необычен тем, что содержит длинную открытую рамку считывания, способную кодировать 100 аминокислот, следующую за первым кодоном АУГ. Пока сообщений о синтезе подобного белка не было [94]. [c.279]

Синтез HSP зависит от активации транскрипции генов теплового шока. Индукция происходит безотлагательно, при этом в течение часа теплового воздействия количество мРНК возрастает с менее чем одной молекулы на клетку до тысяч молекул. Некоторые гены теплового шока регулируются в процессе развития и не нуждаются для активации своей транскрипции в тепловом шоке. Клонирование и секвенирование генов теплового шока из разных организмов позволило выявить основные особенности транскрипционного ответа на это воздействие. Как правило, промоторы, осуществляющие регуляцию транскрипции в ответ на тепловой шок, состоят из нескольких повторов относительно короткой последовательности (элементы теплового шока-HSE), рассеянных внутри области протяженностью 200 п.н. перед ТАТА. Эта каноническая последовательность, обнаруженная в регуляторных областях многих промоторов теплового шока у разных организмов, имеет вид 5 - NGAANTT NG-3, где N-любое из четырех оснований. HSE-элементы, помещенные перед ТАТА-блоком гетерологичных промоторов (например, промотора гена ТК вируса герпеса или промотора гена р-глобина), обусловливают чувствительность транскрипции с этих промоторов к тепловой индукции. [c.81]

Итак, если линейную информационную макромолекулу ДНК сравнить с длинными полосами лент, которые использовали в первых компьютерах, то ДНК хромосом можно представить как последовательность миллионов букв (оснований). В этих последовательностях закодирован весь набор инструкций, представляющих генетический материал всех живых клеток на Земле. Проект Геном человека поставил целью определить порядок этих букв во всех 22 парах аутосом и в двух половых хромосомах человека. Этой работой занимается целый ряд специализированных лабораторий мира, владеющих методами клонирования и секвенирования генов. В общедоступных базах данных и в персональных компьютерах молекулярных биологов хранятся сотни файлов, содержащих информацию о тысячах (может быть, миллионах) последовательностей ДНК. Достижения компьютерных технологий дают возможность биологам манипулировать последовательностями (например, искать определенную последовательность, разрезать ее или вставлять дополнительную информацию). Можно смело утверждать, что для появления ряда новых открытий молекулярной биологии было необходимо развитие современных компьютерных технологий (табл. 2.1). [c.50]

Определение нуклеотидной последовательности (секвенирование) генов Прямая детекция мутантных генов [c.271]

Последняя цитадель гипотезы ненаследования приобретенных признаков — это первичная структура ДНК генеративных клеток, считающаяся полностью изолированной от изменений в соматических клетках. Однако и здесь ее позиции резко ослабляются из-за последних открытий молекулярной биологии, которые показывают, сколь много мы еще не знаем. Например, несколько месяцев назад был полностью секвенирован геном человека и открыто, что реальное число генов существенно меньше, чем предполагалось еще за год до этого. Разительное несовпадение только что выявленных фактов и существующей теории говорит о том, что многие фундаментальные вещи в биологии и генетике человека мы себе еще даже и не представляем. Можно только догадываться какие открытия, какая ломка прежде незыблемых представлений ждут нас в будущем. Вспомним, даже на нашей памяти многие открытия молекулярной биологии вначале объявлялись абсурдом, а затем их авторам присуждали Нобелевские премии. Так было с явлениями перемещения генов в геноме и обратной транскрипции. А между тем именно эти открытия позволяют предположить возможный путь наследования приобретенных признаков и на уровне первичной структуры ДНК синтез информационной РНК на мутантной ДНК соматических клеток — обратная транскрипция ДНК — встраивание ретротранскрипта в ДНК генеративной клетки. [c.6]

Роль повторов и перераспределений экзонов в эволюции гена гормона роста. Структура гена гормона роста (и других генов этого надсемейства) свидетельствует об амплификации экзонов. При клонировании и секвенировании гена гормона роста крысы было обнаружено пять экзонов (рис. 9.3). Первый и часть второго экзона кодируют сигнальную поли-пептидную последовательность (разд. З.Ю.б). Сходство второго, четвертого и пятого экзонов свидетельствует о том, что все они образовались в результате четырехкратной тандемной амплификации предкового экзона (экзон 5 содержит две копии гомологичных последовательностей). Экзон 3 отличается от других и, вероятно, появился при перераспределении экзонов- вставки копии одного из экзонов другого гена. Действительно, пептид, кодируемый экзоном 3, не стимулирует рост, хотя и обладает противоинсулиновой активностью, в то время как гормон роста обладает обеими этими активностями. [c.161]

Полимеразная цепная реакция Блот-гибридизация по Саузерну Прямая детекция мутаций (варианты) Олигонуклеотидные зонды Дагностика путём секвенирования гена [c.271]

Исходя из этих данных, мы приступили сначала к конструированию, химическому синтезу, клонированию, а затем и секвенированию гена псевдофитохелатина. Для этого были синтезированы соответствуюгцие комплементарные друг другу олигонуклеотидные блоки протяженностью по 37 нуклеотидов каждый, с которыми после их отжига друг с другом и некоторых ферментативных процедур, лигирования с фагмидным вектором и трансформации бактерий, были получены рекомбинантные клоны, секвенирование которых показало, что часть из них содержат искомый ген, кодируюгций небольшой белок [c.60]

Смотреть страницы где упоминается термин Секвенирование генов: [c.20] [c.20] [c.477] [c.51] [c.108] [c.148] [c.119] [c.51] [c.108] [c.148] [c.62] [c.307] [c.314] [c.87] [c.142] [c.145] [c.357] [c.365] [c.366] [c.164] [c.187] [c.255] [c.401] [c.220] [c.74] [c.23]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология