Карбоксипептидаза определение концевых карбоксильных групп

Для энзиматического определения С-концевых групп применяют карбоксипептидазу. Карбоксипептидаза расщепляет в белках только те пептидные связи, которые смежны со свободной -карбоксильной группой. Следовательно, при действии фермента на белок первой от полипептидной цепи отщепляется С-конце-вая аминокислота, затем начинает отщепляться следующая за ней и т. д. Таким образом, карбоксипептидаза осуществляет постепенное расщепление белка с С-конца. [c.76]

Обсудим последовательные стадии определения первичной структуры небольшого пептида для белка эта процедура аналогична, но более громоздка. Сначала необходимо выяснить, какие аминокислоты находятся на концах цепи. Обратите внимание, что на рис. 40.1 одна концевая аминокислота содержит свободную а-аминогруппу, а другая концевая аминокислота — свободную а-карбоксильную группу. Эти аминокислотные остатки называют соответственно М-концевым и С-концевым. В соответствии с методикой, разработанной Сенджером в его работе с инсулином, сначала используется 1-фтор-2,4-динитробензол, который образует стабильное динитрофенильное производное с Ы-концевым остатком. После кислотного гидролиза модифицированная аминокислота отделяется и идентифицируется. Определение С-концевого остатка можно провести с помощью осторожной обработки ферментом карбоксипептидазой, которая специфически катализирует гидролиз С-концевой пептидной связи, отщепляя от полипептидной цепи единственную аминокислоту. Существуют также и другие методы определения Н- и С-конце-вых аминокислотных остатков, но два описанных являются наиболее распространенными. [c.374]

При добавлении альдегидов гидразиды кислот выпадают в осадок, а оставшиеся аминокислоты могут быть идентифицированы. Очень ценным для определения С-кон-цевых групп является действие фермента карбоксипептидазы, специфически расщм-ляющей пептидную связь, наиболее близко расположенную к свободному карЙо-ксилу. Многократно действуя карбоксипептидазой, можно определить последовательность расположения ряда аминокислот, начиная с конца цепи со свободной карбоксильной группой [c.307]

Хотя из литературных данных известно, что изучались различные химические методы определения С-концевых аминокислот [206], ни один из этих методов не обнаружил достаточно удовлетворительных результатов, которые давали бы основание к его широкому использованию. Поэтому наибольшее распространение получил способ, основанный не на химической, а на ферментативной реакции с карбоксипептидазой — ферментом, реагирующим лишь с теми пептидами, которые содержат свободную карбоксильную группу. Поскольку рассмотрение ферментативных реакций выходит за рамки настоящего раздела книги, реакция с карбоксипептидазой в данном изложении не описывается. Следует отметить, однако, что проблема развития химии белка настолько важна, что вполне оправданы постоянно продолжающиеся исследования, направленные на поиск и разработку удобных и с широкими возможностями применения химических методов. Было показано, что для установления последовательности аминокислот с С-конца белковой молекулы по крайней мере ограниченное применение могут найти три разных химических метода, так как они дают результаты, подтверждающие данные, получающиеся при использовании карбоксипептидазы. Речь идет о гидразинолизе, этерификации с последующим восстановлением сложноэфирной группы на конце молекулы в спиртовую, а также о реакции с неорганическим тиоци-анатом. [c.376]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология